1.本发明涉及植物提取物的分离纯化领域，具体是一种茶叶提取物提取分离纯化的方法。
背景技术：2.一直以来人们对茶叶保健功效的关注主要集中于茶多酚类物质及茶黄素类物质，而忽略了茶红素、茶褐素类物质的生物活性和药理功能，以致较少研究它的制备方法，目前提取方法还是有机溶剂提取法和色谱分离法两种。
3.饮茶有益于健康，更是对“三高”及特殊人群起到保健作用。有研究表明，红茶和绿茶具有类似的功效。功效大多来自儿茶素和茶黄素，儿茶素为茶黄素和茶红素的先质，茶红素主要为儿茶素和茶黄素的高聚物，根据茶多酚和茶色素具有明显的抗氧化、抗衰老、抗突变、抗炎抗菌、抗毒素、防癌抗癌、预防肥胖等功效的研究，推测茶红素同样具有较好的药理学功能，另从结构上分析，茶红素上的酚羟基和苯骈卓酚酮结构的活性较强，目前有少量研究表明，茶红素与其前体物质儿茶素、茶黄素在一些方面如抗氧化、抗癌、抗肿瘤、抗突变、抗炎、抗白血病和抗神经毒素有相似的功效。
4.茶褐素系指一类能溶于水而不溶于乙酸乙酯、正丁醇和乙醇的褐色色素，也是一类十分复杂的化合物。全熟茶黑茶茶褐素除含有多酚类的氧化聚合产物外，还含有氨基酸、含氮物质、糖类、没食子酸(ga)、咖啡因等结合物，其化学组成及结构还有待进一步探明。
5.目前传统的茶叶提取工艺只是针对茶叶中某个成分进行提取，如只提取茶多酚，肢体去咖啡碱等，所以对茶叶的利用效率较低，所以需要对传统的茶叶提取工艺进行改进。
技术实现要素：6.本发明的目的在于提供一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
7.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
8.一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，所述方法按以下步骤进行：
9.(1)采用一种茶叶或者多种茶叶为原料；
10.(2)用去离子水或蒸馏水作为提取剂回流浸提(1)中的原料；得到混合浸提液；
11.(3)将(2)中的混合浸提液用氯仿萃取，对氯仿萃取液减压浓缩，浓缩至其体积的1/8～1/10时停止浓缩，冷却静置结晶，析出针状晶体，过滤干燥得咖啡碱产物；
12.(4)将(3)中被氯仿萃取后的混合浸提液继续用正丁醇萃取，对正丁醇萃取液减压浓缩抽干，得到包含茶黄素-茶红素的茶色素产物；
13.(5)将(4)中被正丁醇萃取后的混合浸提液继续用乙酸乙酯萃取3～4次，合并乙酸乙酯萃取液并且减压浓缩至其体积的1/7～1/9时停止浓缩，冷却静置结晶，有大量沉淀逐渐产生，过滤干燥得茶叶总黄酮产物；
14.(6)将步骤(5)中经乙酸乙酯萃取后的混合浸提液减压浓缩至其体积的1/8～1/10
时停止浓缩，冷却至室温，加入乙醇，至乙醇的质量分数为50-70％，静置沉降，有大量沉淀逐渐产生，过滤干燥得黑褐色固体粉末茶褐素。
15.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(1)中的茶叶为白茶、绿茶、红茶和黑茶中的一种或者多种；所述茶叶为生茶、半熟茶或者全熟茶。
16.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(2)中原料和提取剂的质量体积比为1kg:10l～15l。
17.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(3)中将(2)中的混合浸提液用氯仿萃取3～4次，每次萃取操作时氯仿体积是混合浸提液的一半；合并氯仿萃取液并且减压浓缩，浓缩至其体积的1/8～1/10时停止浓缩，冷却静置结晶，析出针状晶体，过滤干燥得咖啡碱产物。
18.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(4)中将(3)中被氯仿萃取后的混合浸提液继续用正丁醇萃取3～4次，每次萃取操作中正丁醇的体积是混合浸提液体积的一半；合并正丁醇萃取液并且减压浓缩抽干，得到包含茶黄素-茶红素的茶色素产物。
19.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(5)中将(4)中被正丁醇萃取后的混合浸提液继续用乙酸乙酯萃取3～4次，单次萃取中乙酸乙酯用量为混合浸提液体积的1/2；合并乙酸乙酯萃取液并且减压浓缩至其体积的1/7～1/9时停止浓缩，冷却静置结晶，有大量沉淀逐渐产生，过滤干燥得茶叶总黄酮产物。
20.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(6)中乙醇的质量分数为60％。
21.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
22.本方法重点对茶叶进行了更为彻底的提取利用，通过对茶叶提取并进行系统的分离纯化，能实现四个产品的产出，实现了茶叶的综合利用，咖啡碱、茶红素-茶黄素、茶叶总黄酮、茶褐素等。
具体实施方式
23.为了使本领域的技术人员更好地理解本技术方案，下面将对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动成果前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本技术保护的范围。
24.需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合，下面将结合实施例来详细说明本技术。
25.实施例1
26.一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，具体操作如下：
27.取5.5kg红茶为原料置于带有搅拌装置的提取罐内；用70l去离子水作为提取剂，投入到提取罐内，开启搅拌；开启加热，使提取罐夹套温度升温至95℃，回流2.5h，反复浸提3次；将180l浸提液合并用90l的氯仿分别萃取3次，氯仿体积合并共计270l，60℃条件下减压浓缩，浓缩至约30l时停止浓缩，冷却静置结晶，析出淡黄色针状晶体，过滤干燥得咖啡碱产物148.3g经hplc检测，面积归一化含量为98.4％，水相继续下一道工序；继续用90l的正丁醇对步骤4中的水相分别萃取3次，正丁醇合并共计250l，68℃条件下减压浓缩抽干，得茶黄素-茶红素等茶色素产物363.1g，经hplc检测，茶黄素与茶红素面积归一化含量总和为
68.4％，水相继续下一道工序水相继续下一道工序；继续用90l的乙酸乙酯对步骤4中的水相分别萃取3次，正丁醇合并共计270l,60℃减压浓缩至约30l时停止浓缩，冷却静置结晶，有大量沉淀逐渐产生，过滤干燥得茶叶总黄酮产物121.3g，hplc检测，其中总黄酮含量为43.9％；将步骤6中的水相减压浓缩至其体积的20l时停止浓缩，冷却至室温，加入约30l乙醇，此时乙醇浓度约为60％，静置沉降8h，有大量黑褐色沉淀逐渐沉降，过滤干燥得黑褐色固体粉末茶褐素1421.3g，经hplc检测，其中没食子酸含量为84.6％。
28.实施例2：
29.一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，具体操作如下：
30.取5.0kg普洱茶为原料置于带有搅拌的提取罐内；用60l去离子水作为提取剂，投入到提取罐内，开启搅拌；开启加热，使提取罐夹套温度升温至95℃，回流2.3h，反复浸提3次；将160l浸提液合并用其80l的氯仿分别萃取3次，氯仿合并共计230l，60℃条件下减压浓缩，浓缩至约25l时停止浓缩，冷却静置结晶，析出淡黄色针状晶体，过滤干燥得咖啡碱产物101.6g经hplc检测，面积归一化含量为97.4％，水相继续下一道工序；继续用80l的正丁醇对步骤4中的水相分别萃取3次，正丁醇合并共计240l，68℃条件下减压浓缩抽干，得茶黄素-茶红素等茶色素产物302.6g，经hplc检测，茶黄素与茶红素面积归一化含量总和为71.6％，水相继续下一道工序水相继续下一道工序；继续用80l的乙酸乙酯对步骤4中的水相分别萃取3次，正丁醇合并共计240l,60℃减压浓缩至约26l时停止浓缩，冷却静置结晶，有大量沉淀逐渐产生，过滤干燥得茶叶总黄酮产物98.4g，hplc检测，其中总黄酮含量为49.3％；将步骤6中的水相减压浓缩至其体积的16l时停止浓缩，冷却至室温，加入约24l乙醇，此时乙醇浓度约为60％，静置沉降7.5h，有大量黑褐色沉淀逐渐沉降，过滤干燥得黑褐色固体粉末茶褐素1349.1g，经hplc检测，其中没食子酸含量为87.2％。
31.实施例3：
32.一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，具体操作如下：取5.0kg白茶为原料置于带有搅拌的提取罐内；用60l去离子水作为提取剂，投入到提取罐内，开启搅拌；开启加热，使提取罐夹套温度升温至95℃，回流2.1h，反复浸提3次；将160l浸提液合并用其80l的氯仿分别萃取3次，氯仿合并共计225l，60℃条件下减压浓缩，浓缩至约26l时停止浓缩，冷却静置结晶，析出淡黄色针状晶体，过滤干燥得咖啡碱产物202.3g经hplc检测，面积归一化含量为98.2％，水相继续下一道工序；继续用80l的正丁醇对步骤4中的水相分别萃取3次，正丁醇合并共计230l，68℃条件下减压浓缩抽干，得茶黄素-茶红素等茶色素产物204.7g，经hplc检测，茶黄素与茶红素面积归一化含量总和为61.6％，水相继续下一道工序水相继续下一道工序；继续用80l的乙酸乙酯对步骤4中的水相分别萃取3次，正丁醇合并共计220l,60℃减压浓缩至约25l时停止浓缩，冷却静置结晶，有大量沉淀逐渐产生，过滤干燥得茶叶总黄酮产物103.5g，hplc检测，其中总黄酮含量为51.7％；将步骤6中的水相减压浓缩至其体积的15l时停止浓缩，冷却至室温，加入约23l乙醇，此时乙醇浓度约为60％，静置沉降7.1h，有大量黑褐色沉淀逐渐沉降，过滤干燥得黑褐色固体粉末茶褐素345.3g，经hplc检测，其中没食子酸含量为79.8％。
33.以上的，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加。
技术特征：1.一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，其特征在于，所述方法按以下步骤进行：(1)采用一种茶叶或者多种茶叶为原料；(2)用去离子水或蒸馏水作为提取剂回流浸提(1)中的原料；得到混合浸提液；(3)将(2)中的混合浸提液用氯仿萃取，对氯仿萃取液减压浓缩，浓缩至其体积的1/8～1/10时停止浓缩，冷却静置结晶，析出针状晶体，过滤干燥得咖啡碱产物；(4)将(3)中被氯仿萃取后的混合浸提液继续用正丁醇萃取，对正丁醇萃取液减压浓缩抽干，得到包含茶黄素-茶红素的茶色素产物；(5)将(4)中被正丁醇萃取后的混合浸提液继续用乙酸乙酯萃取3～4次，合并乙酸乙酯萃取液并且减压浓缩至其体积的1/7～1/9时停止浓缩，冷却静置结晶，有大量沉淀逐渐产生，过滤干燥得茶叶总黄酮产物；(6)将步骤(5)中经乙酸乙酯萃取后的混合浸提液减压浓缩至其体积的1/8～1/10时停止浓缩，冷却至室温，加入乙醇，至乙醇的质量分数为50-70％，静置沉降，有大量沉淀逐渐产生，过滤干燥得黑褐色固体粉末茶褐素。2.根据权利要求1所述的一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的茶叶为白茶、绿茶、红茶和黑茶中的一种或者多种；所述茶叶为生茶、半熟茶或者全熟茶。3.根据权利要求1所述的一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，其特征在于，所述步骤(2)中原料和提取剂的质量体积比为1kg:10l～15l。4.根据权利要求1所述的一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，其特征在于，所述步骤(3)中将(2)中的混合浸提液用氯仿萃取3～4次，每次萃取操作时氯仿体积是混合浸提液的一半；合并氯仿萃取液并且减压浓缩，浓缩至其体积的1/8～1/10时停止浓缩，冷却静置结晶，析出针状晶体，过滤干燥得咖啡碱产物。5.根据权利要求1所述的一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，其特征在于，所述步骤(4)中将(3)中被氯仿萃取后的混合浸提液继续用正丁醇萃取3～4次，每次萃取操作中正丁醇的体积是混合浸提液体积的一半；合并正丁醇萃取液并且减压浓缩抽干，得到包含茶黄素-茶红素的茶色素产物。6.根据权利要求1所述的一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，其特征在于，所述步骤(5)中将(4)中被正丁醇萃取后的混合浸提液继续用乙酸乙酯萃取3～4次，单次萃取中乙酸乙酯用量为混合浸提液体积的1/2；合并乙酸乙酯萃取液并且减压浓缩至其体积的1/7～1/9时停止浓缩，冷却静置结晶，有大量沉淀逐渐产生，过滤干燥得茶叶总黄酮产物。7.根据权利要求1所述的一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，其特征在于，所述步骤(6)中乙醇的质量分数为60％。
技术总结本发明公开了一种茶叶提取物提取分离纯化的方法，茶叶包含白茶、绿茶、红茶、黑茶，提取物含咖啡碱、茶色素、茶叶总黄酮、茶褐素等四个提取物；先通过水的加热回流浸提，再依次用氯仿、正丁醇、乙酸乙酯和乙醇进行萃取，每次萃取液经浓缩、结晶产出各自提取物，依次得到咖啡碱产物、茶色素产物、茶叶总黄酮产物和茶褐素；本方法有效提高了咖啡碱、茶褐素的含量，大幅度降低了其中杂质数量和含量，使产品质量得到保障，工艺简单、已操作、对设备要求低，生产投入成本低，清洁环保无排放，适合工业化生产推广。广。
技术研发人员：杨青春 毛自平 普倩 陶琪 滕院 赵晓怡 胡倩
受保护的技术使用者：上海卓鼎生物技术有限公司
技术研发日：2022.07.07
技术公布日：2022/11/1
