1.本发明涉及化学合成技术领域，具体是一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法。
背景技术：2.紫杉醇是一种具有抗癌活性的二萜生物碱类化合物，对许多肿瘤细胞都具有细胞毒作用的化疗药物，临床上经多项研究证实，紫杉醇常和其他的化疗药物联合使用，紫杉醇主要用于治疗乳腺癌、卵巢恶性肿瘤和肺恶性肿，它还可以用于治疗泌尿系统的恶性肿瘤，例如膀胱癌、前列腺癌等。对于头颈部的恶性肿瘤，晚期胃癌的患者紫杉醇也有治疗作用。
3.紫杉醇从太平洋紫杉(短叶红豆杉)树皮中提取出来的具有独特抗癌活性的二萜类化合物，用于治疗对常规化疗无效的卵巢癌和乳腺癌，由于它独特的抗癌机理和广谱高效的抗癌活性，对人的卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、cns癌、黑色素瘤、肝癌和白血病细胞系等有细胞毒作用，其抗癌活性高于噻唑呋啉、顺铂、依托泊甙、阿霉素和氟尿嘧啶等常用抗癌药物。
4.紫杉醇是从红豆杉科红豆杉属植物中分离得到的具有紫杉烷独特骨架的二萜类化合物，是一种高效细胞毒素，具有独特的抗癌机理，是一类具有独特抗癌机制的继阿霉素和顺铂后最热点的抗癌新药，它作用于微管蛋白，促进小管蛋白聚合为微管，这类微管不同于一般微管，微管是真核细胞的一种纤维蛋白，微管在有丝分裂后能解聚重新生成小管蛋白，与细胞的有丝分裂紧密相关，对于迅速分裂的肿瘤细胞，紫杉醇"冻结"有丝分裂纺锤体，从而使肿瘤细胞停止在g2期和m期，导致癌细胞死亡。
5.10-脱乙酰基紫杉醇作为紫杉醇的类似物，被美国药典、欧盟药典收录为紫杉醇杂质，受到严格管控，在紫杉醇研发、生产、检测等环节需要大量的10-脱乙酰基紫杉醇进行标定，而红豆杉山中10-脱乙酰基紫杉醇含量较低，提取难度较大，不利于商业化生产，本方法采用红豆杉中含量较大的10-脱乙酰基巴卡亭iii座位起始原料合成10-脱乙酰基紫杉醇的方法，工艺简单已操作，利于商业化放大生产。
6.10-脱乙酰基紫杉醇为白色粉末状物质，英文名称:10-o-deacetylpaclitaxel，cas号:78432-77-6，分子式:c
45h49
no
13
，分子量:811.86946，结构式如下:
7.
技术实现要素：8.本发明的目的在于提供一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
9.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:
10.一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
11.(1)以10-脱乙酰基巴卡亭iii为原料，用无水二氯甲烷溶解后再加入吡啶，在-20℃～3℃并且搅拌条件下滴加氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯；滴加结束后自然升温至室温进行反应；待反应结束后依次用水和饱和食盐水对反应混合物体系进行萃取洗涤，经过萃取洗涤处理的反应混合物体系依次经过采用无水硫酸钠干燥、过滤和减压浓缩抽干得粉末i；
12.(2)将步骤(1)得到的粉末i投入到无水二氯甲烷中，在常温下搅拌；接着加入紫杉醇侧链，搅拌至溶液呈白色浆状后继续向溶液中加入催化剂dmap-dcc，溶液逐渐由白色浆状转变为淡黄色浑浊液；反应结束后用助滤剂硅藻土进行过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，滤液和洗涤液合并后依次经过如下处理：用水、饱和食盐水进行萃取洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩抽干得粉末ii；
13.(3)将步骤(2)中的粉末ii用无水丙酮溶解后在常温下搅拌，接着加入盐酸调节ph值，反应1-2h后向其中加入饱和醋酸钠溶液，调节ph值；接着依次加入冰醋酸和锌粉，继续反应3-4h；滤除锌粉并用丙酮洗涤滤饼，将滤液和洗涤液合并加入到搅拌状态下的冰水当中静置；3.5-4.5h后，过滤并且将滤饼干燥得10-脱乙酰基紫杉醇粗品；
14.(4)将步骤(3)中的10-脱乙酰基紫杉醇粗品用氯仿溶解，接着采用氯仿和异丙醇的混合溶剂柱层析分离，得到的馏分减压浓缩抽干得到干馏物；再用乙腈溶解干馏物，接着加入正己烷后静置；过滤乙腈、正己烷和干馏物混合物体系，滤饼经减压干燥得10-脱乙酰基紫杉醇成品。
15.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(1)中10-脱乙酰基巴卡亭iii、无水二氯甲烷、吡啶、氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯的用量比为1g:15～25ml:1.0ml～1.2ml:1.1ml～1.3ml。
16.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(2)中粉末i、无水二氯甲烷、紫杉醇侧链、dmap和dcc用量比为1g:10～20ml:0.9g～1.1g:25mg～30mg:0.9g～1.0g。
17.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(3)中粉末ii、丙酮、冰醋酸、锌粉用量比为1g:8～11ml:2～3ml:1.1g～1.3g；所述步骤(3)中加入盐酸调节ph值为0.9～1.0，加入饱和醋酸钠调节ph值为5.0～5.4。
18.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(3)中粉末ii和冰水的用量比为1g:10～15ml。
19.作为本发明的一种优选技术方案，上述步骤(4)中氯仿和异丙醇的体积比为80:1，乙腈和正己烷的体积比10:1。
20.与现有技术相比，本发明的有益效果是:
21.本发明提供一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，该方法以红豆杉植株中提取纯化的10-脱乙酰基巴卡亭iii为原料，在氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯的参与下发生保护、酯化、水解、脱保护等反应得到10-脱乙酰基紫杉醇粗品，10-脱乙酰基紫杉醇粗品通过柱层析、重结晶进一步纯化后得到10-脱乙酰基紫杉醇成品。本发明方法降低了合成难度，简单易操
作，纯化效率高、收率高。
具体实施方式
22.为了使本领域的技术人员更好地理解本技术方案，下面将对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动成果前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本技术保护的范围。
23.需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合，下面将结合实施例来详细说明本技术。
24.将含量为99.7％的150g10-脱乙酰基巴卡亭iii用3000ml无水二氯甲烷溶解于5000ml反应器，搅拌5min后，加入吡啶150ml，继续搅拌，调节温度，使物料温度降温至-10℃，控制流速缓慢滴加180ml氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯，滴加结束后自然升温至室温，反应过程通过tlc监控，2.2h后原料消失，此时反应结束；接着将反应混合物体系依次用1500ml水、1500ml饱和食盐水进行萃取洗涤，经过萃取洗涤处理的反应混合物体系采用100g无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩抽干得类白色的粉末i共236.1g，通过hplc检测粉末i，中间产物一含量为97.1％，中间产物一收率为95.8％；
25.称取上述步骤产出的类白色的粉末i 230g，用3500ml无水二氯甲烷溶解于5000ml反应器中，常温搅拌均匀，继续加入紫杉醇侧链230g，搅拌10min，继续向其中加入5.75gdmap和230gdcc，通过tlc监测，1.8h后原料消失，此时反应结束；反应结束后用助滤剂硅藻土进行过滤；滤饼用2000ml二氯甲烷洗涤，滤液和洗涤液合并后依次用2000ml水、2000ml饱和食盐水进行萃取洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩抽干得淡黄色的粉末ii共308.2g；通过hplc检测粉末ii，中间产物二含量为94.3％，中间产物二收率为93.7％；
26.称取淡黄色的粉末(v)300g，用3000ml丙酮溶解于5000ml反应器中，常温搅拌，加入盐酸104ml，调节ph值至1.0，反应1.9h，通过tlc监测发现原料消失；向其中加入饱和醋酸钠溶液320ml，调节ph值至5.2，接着依次加入冰醋酸600ml和锌粉300g，继续反应3.6h，通过tlc监测发现原料消失，反应完全；过滤，滤除锌粉，并用1000ml丙酮洗涤滤饼，将滤液和洗涤液合并加入到搅拌状态下的4500ml冰水当中，水结晶；4h后，过滤并且将滤饼干燥得10-脱乙酰基紫杉醇粗品274.4g，通过hplc检测发现10-脱乙酰基紫杉醇粗品中10-脱乙酰基紫杉醇含量为82.3％，10-脱乙酰基紫杉醇收率88.7％；
27.称取10-脱乙酰基紫杉醇粗品270g，用3000ml氯仿溶解，接着采用混合溶剂柱层析分离，混合溶剂柱的硅胶总质量为4000g，硅胶颗粒粒径为200～300目，溶剂为氯仿和异丙醇按照体积比为80ml:1ml的混合溶剂；经过混合溶剂柱层析分离得到的馏分经减压浓缩抽干得到干馏物，再用3000ml乙腈溶解干馏物，接着再加300ml正己烷，静置放置8h，过滤乙腈、正己烷和干馏物混合物体系，所得滤饼经减压干燥后得10-脱乙酰基紫杉醇188.9g，经hplc检测，10-脱乙酰基紫杉醇含量98.9％，收率84.1％。
28.以上的，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
技术特征：1.一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)以10-脱乙酰基巴卡亭iii为原料，用无水二氯甲烷溶解后再加入吡啶，在-20℃～3℃并且搅拌条件下滴加氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯；滴加结束后自然升温至室温进行反应；待反应结束后依次用水和饱和食盐水对反应混合物体系进行萃取洗涤，经过萃取洗涤处理的反应混合物体系依次经过采用无水硫酸钠干燥、过滤和减压浓缩抽干得粉末i；(2)将步骤(1)得到的粉末i投入到无水二氯甲烷中，在常温下搅拌；接着加入紫杉醇侧链，搅拌至溶液呈白色浆状后继续向溶液中加入催化剂dmap-dcc，溶液逐渐由白色浆状转变为淡黄色浑浊液；反应结束后用助滤剂硅藻土进行过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，滤液和洗涤液合并后依次经过如下处理：用水、饱和食盐水进行萃取洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩抽干得粉末ii；(3)将步骤(2)中的粉末ii用无水丙酮溶解后在常温下搅拌，接着加入盐酸调节ph值，反应1-2h后向其中加入饱和醋酸钠溶液，调节ph值；接着依次加入冰醋酸和锌粉，继续反应3-4h；滤除锌粉并用丙酮洗涤滤饼，将滤液和洗涤液合并加入到搅拌状态下的冰水当中静置；3.5-4.5h后，过滤并且将滤饼干燥得10-脱乙酰基紫杉醇粗品；(4)将步骤(3)中的10-脱乙酰基紫杉醇粗品用氯仿溶解，接着采用氯仿和异丙醇的混合溶剂柱层析分离，得到的馏分减压浓缩抽干得到干馏物；再用乙腈溶解干馏物，接着加入正己烷后静置；过滤乙腈、正己烷和干馏物混合物体系，滤饼经减压干燥得10-脱乙酰基紫杉醇成品。2.根据权利要求1所述的一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中10-脱乙酰基巴卡亭iii、无水二氯甲烷、吡啶、氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯的用量比为1g:15～25ml:1.0ml～1.2ml:1.1ml～1.3ml。3.根据权利要求1所述的一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中粉末i、无水二氯甲烷、紫杉醇侧链、dmap和dcc用量比为1g:10～20ml:0.9g～1.1g:25mg～30mg:0.9g～1.0g。4.根据权利要求1所述的一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中粉末ii、丙酮、冰醋酸、锌粉用量比为1g:8～11ml:2～3ml:1.1g～1.3g；所述步骤(3)中加入盐酸调节ph值为0.9～1.0，加入饱和醋酸钠调节ph值为5.0～5.4。5.根据权利要求1所述的一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中粉末ii和冰水的用量比为1g:10～15ml。6.根据权利要求1所述的一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中氯仿和异丙醇的体积比为80:1，乙腈和正己烷的体积比10:1。
技术总结本发明公开了一种10-脱乙酰基紫杉醇的制备方法，涉及化学合成技术领域；该方法以红豆杉植株中提取纯化的10-脱乙酰基巴卡亭III为原料，在氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯的参与下发生保护、酯化、水解、脱保护等反应得到10-脱乙酰基紫杉醇粗品，10-脱乙酰基紫杉醇粗品通过柱层析和重结晶进一步纯化后得到10-脱乙酰基紫杉醇成品；本发明提供的制备方法降低了合成难度，简单易操作，纯化效率高、收率高。收率高。
技术研发人员：杨青春 普倩 滕院 赵晓怡 陶琪 胡倩 马秋丽
受保护的技术使用者：上海卓鼎生物技术有限公司
技术研发日：2022.07.07
技术公布日：2022/11/1
