感染冠状病毒的患者中的肾上腺髓质素原或其片段以及用针对肾上腺髓质素的结合剂进行的治疗的制作方法

1.本发明的主题是一种在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，所述方法包括：
2.·
测定所述患者的体液样品中的肾上腺髓质素原(seq id no.31)或其片段的水平，
3.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与预定阈值或与肾上腺髓质素原或其片段的先前测量水平进行比较，以及
4.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述危及生命的恶化或不良事件的风险相关联，或
5.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述严重程度相关联，或
6.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述治疗或干预的成功相关联，或
7.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与某种治疗或干预相关联，或
8.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述患者的管理相关联，
9.其中所述肾上腺髓质素原或其片段选自pamp(seq id no.32)、mr-proadm(seq id no.33)、adm-nh2(seq id no.20)、adm-gly(seq id no.21)和ct-proadm(seq id no.34)。
10.本发明的主题是一种抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其用于在感染冠状病毒的患者中治疗或干预患者。


背景技术：

11.1993年首次描述了肽肾上腺髓质素(adm)(kitamura等人,1993.biochem biophys res comm 192(2):553-560)，作为一种包含52个氨基酸的新型降压肽，其从人嗜铬细胞瘤细胞系分离(seq id no.20)。同年，还描述了编码包含185个氨基酸的前体肽的cdna和该前体肽的完整氨基酸序列。所述尤其是在n端包含21个氨基酸的信号序列的前体肽，被称为“肾上腺髓质素原前体”(pre-proadm)。在本说明书中，所有指定的氨基酸位置通常涉及包含185个氨基酸的pre-proadm。pre-proadm随后通过切割n端信号肽而转化为164个氨基酸的pro-adm(seq id no.31)。pro-adm进一步加工成pro-adm n端20肽(pamp；seq id no.32)、中段pro-adm(mr-proadm；seq id no.33)、肾上腺紧张素pro-adm 153-185(ct-pro adm；seq id no.34)和未成熟的adm这种adm的c端甘氨酸延伸形式(adm-gly；seq id no.21)。这通过其c端的酶促酰胺化而转化为成熟的生物活性形式的adm(bio-adm；adm-nh2；seq id no.20)。超过一半的已知神经和内分泌肽需要形成c端α-酰胺基团才能获得完整的生物活性(guembe等人,1999.j histochem cytochem 47(5):623-36；vishwanatha等人,2013.《生物活性肽肽酰甘氨酸酰胺化单加氧酶(pam)手册》(handbook of biologically active peptides peptidylglycine amidating monoxygenase(pam)).第二版.elsevier inc.)。肽激素生物合成的此最后一步涉及双功能酶即肽酰甘氨酸α-酰胺
化单加氧酶(pam)的作用，所述酶特异性识别其底物中的c端甘氨酸(ct-gly)残基。pam在两步酶促反应中从肽ct-gly残基上切割乙醛酸，导致形成c端α-酰胺化肽激素，其中所产生的α-酰胺基团源自切割的ct-gly(prigge等人,2000.cellular and molecular life sciences 57(8):1236-59)。这种酰胺化反应在酰胺化产物胞吐之前发生在分泌颗粒的内腔中(martinez等人,1996.am j pathol149(2):707-16)。
12.1993年adm的发现和表征引发了密集的研究活动，其结果已在各种综述文章中进行了总结，在本说明书的上下文中，特别提到了将在“肽”期刊中找到的特别专注于adm的文章(takahashi2001.peptides22:1691；eto2001.peptides22:1693-1711)。另一篇综述是hinson等人,2000(hinson等人,2000.endocrine reviews21(2):138-167)。在迄今为止的科学研究中，尤其已发现adm可以被视为多功能调节肽。如上所述，它以通过甘氨酸延伸的非活性形式释放到循环中(kitamura等人,1998.biochem biophys res commun 244(2):551-555)。还存在一种结合蛋白(pio等人,2001.the journal of biological chemistry276(15):12292-12300)，它对adm具有特异性并且可能同样调节adm的效应。在迄今为止的研究中最为重要的adm以及pamp的那些生理效应是影响血压的效应。
13.因此，adm是一种有效的血管扩张剂，因此有可能将降压作用与adm的c端部分的特定肽段相关联。此外还发现，上述由pre-proadm形成的生理活性肽pamp同样表现出降压作用，即使它似乎具有与adm不同的作用机制(除了上面提到的综述文章，eto等人,2001和hinson等人,2000，也参见kuwasaki等人,1997.febs lett 414(1):105-110；kuwasaki等人,1999.ann.clin.biochem.36:622-628；tsuruda等人,2001life sci.69(2):239-245和ep-a2 0 622 458)。此外还发现，可以在循环和其他生物液体中测量的adm浓度，在许多病理状态下明显高于在健康对照受试者中发现的浓度。因此，充血性心力衰竭、心肌梗塞、肾脏疾病、高血压障碍、糖尿病、休克急性期以及脓毒症和脓毒性休克患者的adm水平显著升高，尽管程度不同。pamp浓度在一些所述病理状态中也增加，但血浆水平相对于adm较低(eto 2001.peptides 22: 1693-1711)。据报道，在脓毒症中观察到高浓度的adm，并且在脓毒性休克中浓度最高(eto 2001.peptides 22:1693-1711；hirata等人,journal of clinical endocrinology and metabolism81(4):1449-1453；ehlenz等人,1997.exp clin endocrinol diabetes105:156-162；tomoda等人,2001.peptides 22:1783-1794；ueda等人,1999.am.j.respir.crit.care med.160:132-136；和wang等人,2001.peptides22:1835-1840)。此外，心力衰竭患者的血浆adm浓度升高并与疾病严重程度相关(hirayama等人,1999.j endocrinol 160:297-303；yu等人,2001.heart 86:155-160)。在这些受试者中，高血浆adm是一个独立的负面预后指标(poyner等人,2002.pharmacol rev54:233-246)。
14.kitamura及其同事表明，与健康志愿者相比，高血压患者的血浆中成熟adm和adm-gly的浓度显著升高(kitamura等人,1998.biochem biophys res comm 244(2):551-5)。在两组中，成熟adm远低于adm-gly。然而，成熟adm与adm-gly的比率在高血压受试者和非高血压受试者之间没有显著差异。
15.据报道，对于脓毒症的早期阶段，adm可改善心脏功能以及肝脏、脾脏、肾脏和小肠的血液供应。抗adm中和性抗体在脓毒症早期阶段期间中和前述作用(wang等人,2001.peptides 22:1835-1840)。对于其他疾病，阻断adm在一定程度上可能是有益的。然
而，如果adm被完全中和，则也可能是有害的，因为若干生理功能可能需要一定量的adm。在许多报告中都强调，adm的施用可能对某些疾病有益。与此相反，在其他报告中，adm被报告为在某些条件下施用时会危及生命。
16.wo2013/072510描述了一种用于治疗患者的严重慢性或急性疾病或急性病状以降低所述患者的死亡风险的非中和性n端抗adm抗体。
17.wo2013/072511描述了一种用于治疗患者的慢性或急性疾病或急性病状以预防或减少器官功能障碍或器官衰竭的非中和性n端抗adm抗体。
18.wo2013/072513描述了一种用于治疗患者的急性疾病或病状以稳定化循环的n端抗adm抗体。
19.wo2013/072514描述了一种用于调节患有慢性或急性疾病或急性病状的患者的体液平衡的n端抗adm抗体。
20.wo2019/154900描述了一种用于治疗和预防痴呆症的非中和性n端抗adm抗体。此外，wo2019/154900描述了一种通过确定成熟adm水平与肾上腺髓质素原或其片段的水平的比率来诊断和监测痴呆症的(预防性)治疗的方法。
21.wo2013/072512描述了一种非中和性n端抗adm抗体，它是一种adm稳定化抗体，可提高血清、血液、血浆中的肾上腺髓质素的半衰期(t
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半保留时间)。
22.在clp诱发脓毒症小鼠的存活研究中研究了针对adm的n端的非中和性抗体的功效。用非中和性抗体进行预治疗导致降低的儿茶酚胺输注率、肾功能障碍，并最终提高存活率(struck等人,2013.intensive care med exp1(1):22；wagner等人,2013.intensive care med exp1(1):21)。此外，针对adm中段部分的抗体(mr-adm抗体)也显著提高了患有clp诱发脓毒症的小鼠的存活率，但与n端抗adm抗体相比，程度较低(struck等人,2013.intensive care med exp 1(1):22)。
23.由于这些积极的结果，一种名为adrecizumab的n端抗adm抗体的人源化形式已被开发用于进一步的临床开发。最近在全身性炎症和脓毒症的临床前模型中证实了adrecizumab对血管屏障功能和存活率的有益影响(geven等人,2018.shock 50(6):648-654)。在这项研究中，用adrecizumab预治疗可减轻内毒素血症大鼠以及患有clp诱发脓毒症的小鼠中的肾血管渗漏，这与保护性肽ang-1的肾脏表达增加和有害肽血管内皮生长因子的表达减少相吻合。此外，用adrecizumab预治疗可提高clp诱发脓毒症小鼠的7天存活率，对于单剂量施用从10％提高到50％，而对于重复剂量施用从0提高到40％。此外，在i期研究中，证明了优异的安全性和耐受性：未观察到严重的不良事件，未检测到在adrecizumab治疗的受试者中更频繁地发生不良事件的信号，并且未发现其他安全性参数的相关变化(geven等人,2017.intensive care med exp 5(增刊2):0427)。特别令人感兴趣的是所提出的adrecizumab的作用机制。动物和人类数据均揭示了在施用该抗体后循环adm的有效的剂量依赖性增加。根据药代动力学数据和mr-proadm(与adm相同的激素原衍生的非活性肽片段)没有增加，循环adm水平较高不能由产量增加来解释。
24.这种增加的机制解释可能是循环中过量的抗体可能会将adm从间质排出到循环中，因为adm小到足以穿过内皮屏障，而抗体却不能(geven等人,2018.shock.50(2):132-140)。此外，抗体与adm的结合会导致adm的半衰期延长。尽管nt-adm抗体部分抑制adm介导的信号传导，但循环adm的大量增加导致血液隔室中adm活性的整体“净”增加，其中它对ec
infected pneumonia in wuhan,china).jama323(11):1061-1069；chen等人,2020.中国武汉的99例2019年新型冠状病毒肺炎的流行病学和临床特征：描述性研究(epidemiological and clinical characteristics of99cases of2019novel coronavirus pneumonia in wuhan,china:a descriptive study).lancet395:507-13)。
30.最近，提出了年龄较大、d-二聚体水平升高和sofa评分高可帮助临床医生在早期阶段识别那些预后不良的covid-19患者(zhou等人,2020.中国武汉的成年covid-19住院患者死亡的临床病程和危险因素：一项回顾性队列研究(clinical course and risk factors for mortality of adult inpatients with covid-19 in wuhan,china:a retrospective cohort study).the lancet,395(10229):1054-1062)。
31.本发明的主题是一种在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，所述方法包括：
32.·
测定所述患者的体液样品中的肾上腺髓质素原(seq id no.31)或其片段的水平，
33.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与预定阈值或与肾上腺髓质素原或其片段的先前测量水平进行比较，以及
34.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述危及生命的恶化或不良事件的风险相关联，或
35.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述严重程度相关联，或
36.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述治疗或干预的成功相关联，或
37.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与某种治疗或干预相关联，或
38.·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述患者的管理相关联，
39.其中所述肾上腺髓质素原或其片段选自pamp(seq id no.32)、mr-proadm(seq id no.33)、adm-nh2(seq id no.20)、adm-gly(seq id no.21)和ct-proadm(seq id no.34)。
40.本发明的主题是一种在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中所述冠状病毒选自sars-cov-1、sars-cov-2、mers-cov，特别是sars-cov-2。
41.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中所述不良事件选自死亡、器官功能障碍、休克、ards和ali(急性肺损伤)。
42.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平高于预定阈值。
43.在本发明的一个具体实施方式中，至少两次测定所述肾上腺髓质素原或其片段的水平。
44.在本发明的另一个具体实施方式中，肾上腺髓质素原或其片段的水平的所述至少
第二次测定在2小时内，优选在4小时内，更优选在6小时内，甚至更优选在12小时内，甚至更优选在24小时内，最优选在48小时内测定。
45.这意味着根据术语“肾上腺髓质素原或其片段的先前测量水平”，在本发明的所有主题中应理解为，所述先前测量水平是在2小时内、优选在4小时内、更优选在6小时内、甚至更优选在12小时内、甚至更优选在24小时内、最优选在48小时内测量的水平。测量值和先前测量值之间的差异是在不同时间点取自所述患者的不同样品中的所述肾上腺髓质素原或其片段的水平之间的相对差异。
46.bio-adm≥70pg/ml或≥25％增加直到第二天结束(在所有时间点最少50pg/ml)。
47.在本发明的另一个具体实施方式中，在不同时间点取自所述患者的不同样品中测定所述肾上腺髓质素原或其片段的水平。
48.在本发明的另一个具体实施方式中，测定在不同时间点取自所述患者的不同样品中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平之间的差异。可以将所述差异确定为绝对差异或相对差异。
49.在本发明的另一个具体实施方式中，当在不同时间点取自所述患者的不同样品中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平之间的所述相对差异为100％或以上、更优选75％或以上、甚至更优选50％或以上、最优选25％或以上时，开始治疗。
50.在本发明的另一个具体实施方式中，当在所述第二次或另外的测定中所述肾上腺髓质素原或其片段的相对水平为至少25％并且肾上腺髓质素原或其片段的绝对水平为至少50pg/ml并且所述肾上腺髓质素原的片段为成熟adm(adm-nh2)时，开始治疗。
51.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中所述片段是mr-proadm(seq id no.33)，并且所述受试者的体液样品中mr-proadm的预定阈值介于0.5和2nmol/l之间，优选介于0.7和1.5nmol/l之间，优选介于0.8和1.2nmol/l之间，最优选应用1nmol/l的阈值。
52.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中所述片段是adm-nh2(seq id no.20)，并且所述受试者的体液样品中adm-nh2(seq id no.20)的预定阈值介于40和100pg/ml之间，更优选介于50和90pg/ml之间，甚至更优选介于60和80pg/ml之间，最优选所述阈值为70pg/ml。
53.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中所述患者的sofa评分等于或大于3，优选等于或大于7，或者快速sofa评分等于或大于1，优选等于或大于2。
54.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中所述患者的d-二聚体水平等于或大于0.5μg/ml，优选等于或大于1μg/ml。
55.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中肾上腺髓质素原或其片段的水平通过使所述体液样品与特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂接触来测定。
56.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中所述测定包括使用特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非igg支架。
57.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中在所述受试者的体液样品中测定肾上腺髓质素原或其片段的水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂是抗体。
58.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中在所述受试者的体液样品中测定肾上腺髓质素原或其片段的水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段水平的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂固定在表面上。
59.本发明的主题是一种根据本发明在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，其中所述患者用抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架治疗，其中所述抗adm抗体或抗adm片段或抗adm非ig支架结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端和/或中段部分(aa 1-42)：
60.yrqsmnnfqglrsfgcrfgtctvqklahqiyqftdkdkdnva(seq id no.23)。
61.本发明的主题是一种用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架。
62.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述冠状病毒选自sars-cov-1、sars-cov-2、mers-cov，特别是sars-cov-2。
63.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中当通过根据如上所述方法的方法测定时，在所述受试者的体液样品中，所述患者的肾上腺髓质素原或其片段的水平高于预定阈值或高于肾上腺髓质素原或其片段的先前测量水平。
64.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者的sofa评分等于或大于3，优选等于或大于7，或者快速sofa评分等于或大于1，优选等于或大于2。
65.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上
腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者的d-二聚体水平等于或大于0.5μg/ml，优选等于或大于1μg/ml。
66.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗adm抗体或抗adm片段或抗adm非ig支架结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端部分(氨基酸1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.14)。
67.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架对肾上腺髓质素原或其片段表现出等于或小于10-7
m的最小结合亲和力。
68.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段或支架阻断adm的生物活性不超过80％，优选不超过50％。
69.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体是单克隆抗体或单克隆抗体片段。
70.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中重链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：
71.cdr1:seq id no:1
72.gytfsryw
73.cdr2:seq id no:2
74.ilpgsgst
75.cdr3:seq id no:3
76.tegyeydgfdy
77.并且轻链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：
78.cdr1:seq id no:4
79.qsivysngnty
80.cdr2:
81.rvs
82.cdr3:seq id no:5
83.fqgshipyt。
84.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段包含选自以下的序列或分别与以下各序列具有》80％同一性的序列作为vh区：
85.seq id no:6(am-vh-c)
86.qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgcl
vkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
87.seq id no:7(am-vh1)
88.qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
89.seq id no:8(am-vh2-e40)
90.qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
91.seq id no:9(am-vh3-t26-e55)
92.qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
93.seq id no:10(am-vh4-t26-e40-e55)
94.qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk，
95.并且
96.包含选自以下的序列或与以下各序列具有》80％同一性的序列作为vl区：
97.seq id no:11(am-vl-c)
98.dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
99.seq id no:12(am-vl1)
100.dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
101.seq id no:13(am-vl2-e40)
102.dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
103.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段包含以下序列或与其具有》95％同一性的序列作为重链：
104.seq id no:35
105.qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeq
ynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk，
106.并且包含以下序列或与其具有》95％同一性的序列作为轻链：
107.seq id no:36
108.dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
109.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述单克隆抗体或抗体片段是人源化单克隆抗体或人源化单克隆抗体片段。
110.本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是单克隆抗体，并且是adrecizumab或其生物类似物，并且包含以下序列作为重链：
111.seq id no:35
112.qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
113.并且包含以下序列作为轻链：
114.seq id no:36
115.dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
116.根据本发明的体液在一个特定实施方式中是血液样品。血液样品可以选自全血、血清和血浆。在诊断方法的一个具体实施方式中，所述样品选自人柠檬酸盐血浆、肝素血浆和edta血浆。
117.可以通过免疫测定法测量如d-二聚体、如肾上腺髓质素原或其片段的生物标志物浓度，其中所述免疫测定法可以是夹心免疫测定法，优选全自动测定法。
118.在一个实施方式中，针对adm-gly的所述测定法的测定灵敏度能够量化健康受试者的adm-gly并且为20pg/ml，优选15pg/ml并且更优选10pg/ml。
119.在一个实施方式中，针对pamp的所述测定法的测定灵敏度能够量化健康受试者的pamp并且为《0.5pmol/l，优选《0.25pmol/l并且更优选《0.1pmol/l。
120.在一个实施方式中，用于检测ct-proadm的所述测定法的测定灵敏度能够量化健康受试者的ct-proadm并且为《100pmol/l，优选《75pmol/l并且更优选《50pmol/l。
121.在一个实施方式中，用于检测adm-nh2的所述测定法的测定灵敏度能够量化健康受试者的adm-nh2并且为《70pg/ml，优选《40pg/ml并且更优选《10pg/ml。
122.在一个实施方式中，所述测定法的测定灵敏度能够量化健康受试者的mr-proadm并且为《0.5nmol/l，优选《0.4nmol/l并且更优选《0.2nmol/l。
123.除了肾上腺髓质素原和/或其片段之外，还可以测量另外的生物标志物。所述另外的生物标志物可以选自d-二聚体、降钙素原(pct)、c反应蛋白(crp)、乳酸盐、dpp3、penkid、nt-probnp、白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、血红蛋白、血小板计数、白蛋白、丙氨酸转氨酶、肌酐、血尿素、乳酸脱氢酶、肌酐激酶、心肌肌钙蛋白i、凝血酶原时间、血清铁蛋白、白细胞介素-6(il-6)、il-10、il-2、il-7、肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、粒细胞集落刺激因子(gcsf)、ip-10、mcp-1、mip-1α。
124.本技术的另一个实施方式涉及一种用于治疗患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗adm抗体或抗adm片段或抗adm非ig支架结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端和/或中段部分(氨基酸1-42)：
125.yrqsmnnfqglrsfgcrfgtctvqklahqiyqftdkdkdnva(seq id no.23)。
126.本技术的一个实施方式涉及一种用于治疗感染冠状病毒的患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig蛋白支架
127.a.用于治疗患者以稳定化所述患者的体循环，其中所述患者需要稳定化体循环并且表现出》100次/分钟的心率和/或《65mm hg平均动脉压，并且其中稳定化体循环意味着平均动脉压增加至超过65mmhg，或
128.b.用于预防感染冠状病毒的患者的心率增快至》100次/分钟和/或平均动脉压降至《65mm hg。
129.本技术的另一个实施方式涉及一种用于治疗感染冠状病毒的患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig蛋白支架用于治疗所述患者以预防或减少所述患者的器官功能障碍或预防器官衰竭，并且其中所述器官选自心脏、肾脏、肝脏、肺、胰腺、小肠和脾脏。
130.在本发明的一个具体实施方式中，所述患者已被诊断患有或疑似患有冠状病毒感染。
131.术语“冠状病毒感染”被定义为冠状病毒(冠状病毒科(coronaviridae))的感染，冠状病毒科是一个有包膜的、正义的、单链rna病毒家族。病毒基因组的长度为26-32千碱基。颗粒通常装饰有大的(～20nm)、棒状或花瓣状的表面投影(“包膜粒(peplomer)”或“刺突(spike)”)，在球形颗粒的电子显微照片中，它们会产生让人想起日冕的图像。冠状病毒会导致哺乳动物和鸟类的疾病。在人类中，所述病毒引起呼吸道感染，包括普通感冒，这些感染通常是轻微的，但罕见形式如sars、mers和covid-19可能是致命的。最新增添的是sars-cov-2。
132.在一个具体实施方式中，所述冠状病毒感染选自sars-cov-1、sars-cov-2、mers-cov，特别是sars-cov-2的感染。
133.根据who，疑似sars-cov-2感染的严重急性呼吸道感染(sari)目前被定义为有发热史或测量温度≥38℃和咳嗽的急性呼吸道感染(ari)，发病时间在最近～10天内，并且需要住院。然而，没有发热并不排除病毒感染。
134.sars-cov感染可能呈现轻度、中度或重度疾病；后者包括重症肺炎、ards、脓毒症
和脓毒性休克。早期识别具有严重表现的患者(参见表1)允许根据机构或国家方案立即优化支持性护理治疗并安全、快速地入住(或转诊)到重症监护病房。对于病情较轻的那些患者，除非担心迅速恶化，否则可能不需要住院。如果所有出院回家的患者出现任何病情恶化，应指示他们返回医院。
135.表1.按严重程度分类的与2019-ncov感染相关的临床综合征(根据who指南)
136.[0137][0138]
氧合指数；osi，使用spo2的氧合指数；pao2，氧气分压；peep，呼气末正压；sbp，收缩压；sd，标准差；sirs，全身炎症反应综合征；spo2，氧饱和度。*如果海拔高于1000m，则修正系数应计算如下：pao2/fio2×
气压计压力/760。
[0139]
脓毒性休克是一种潜在的致命医疗状况，当作为对感染作出的反应的器官损伤或损害的脓毒症导致危险的低血压和细胞代谢异常时发生。脓毒症和脓毒性休克的第三次国际共识定义(sepsis-3)将脓毒性休克定义为脓毒症的一个子集，其中特别严重的循环、细胞和代谢异常与单独的脓毒症相比具有更高的死亡风险。在没有低血容量的情况下，脓毒性休克患者可以通过需要血管加压药以维持平均动脉压为65mm hg或更高并且血清乳酸水平大于2mmol/l(》18mg/dl)来进行临床识别。这种组合与超过40％的医院死亡率相关(singer等人,2016.jama.315(8):801-10)。原发性感染最常由细菌引起，但也可能由真菌、病毒或寄生虫引起。它可能位于身体的任何部位，但最常见于肺部、大脑、泌尿道、皮肤或腹部器官。它可以导致多器官功能障碍综合征(以前称为多器官衰竭)和死亡。通常，脓毒性休克患者在重症监护病房接受护理。它最常影响儿童、免疫功能低下的个体和老年人，因为他们的免疫系统无法像健康成年人那样有效地应对感染。脓毒性休克的死亡率为约25-50％。
[0140]
疾病的严重程度定义为患者器官系统紊乱或生理失代偿的程度。可以使用例如评
分系统将严重程度分类为不同阶段。
[0141]
如本文所用，器官功能障碍表示器官不执行其预期功能的健康状况或状态。“器官衰竭”表示在没有外部临床干预的情况下无法维持正常体内平衡的程度的器官功能障碍。所述器官衰竭可以涉及选自肾脏、肝脏、心脏、肺、神经系统的器官。相比之下，器官功能代表了各个器官在生理范围内的预期功能。本领域技术人员在医学检查期间了解器官的相应功能。
[0142]
器官功能障碍可以通过序贯器官衰竭评估评分(sofa评分)或其组成部分来定义。sofa评分，以前称为脓毒症相关器官衰竭评估评分(singer等人,2016.jama 315(8):801-10)，用于跟踪一个人在重症监护病房(icu)停留期间的状态以确定一个人的器官功能或衰竭率的程度。所述评分是基于六种不同的评分，呼吸、心血管、肝脏、凝血、肾脏和神经系统的每一者各评分为0至4，评分增大反映器官功能障碍的恶化。例如在lamden等人中描述了评估sofa评分的标准(关于综述，参见lambden等人,2019.critical care23:374)。传统上，sofa评分可以在入住icu时和随后的每个24小时时期计算。特别地，所述器官功能障碍选自肾功能减退、心脏功能障碍、肝功能障碍或呼吸道功能障碍。
[0143]
快速sofa评分(quicksofa或qsofa)由sepsis-3团队于2016年2月引入，作为sofa评分的简化版本，作为鉴定感染结果不良的高风险患者的初始方法(angus等人,2016.critical care medicine.44(3):e113-e121)。qsofa通过仅包括其3个临床标准并包括“任何改变的心理状态”而不是要求gcs《15，从而大大简化了sofa评分。qsofa可以轻松且快速地对患者连续重复。评分范围为0至3分。以下情形给予一分：低血压(sbp≤100mmhg)、高呼吸频率(≥22次呼吸/分钟)和精神状态改变(gcs≤15)。在感染开始附近存在qsofa为2分或更高分与更大的死亡风险或延长的重症监护病房停留时间相关。这些结果在可能是脓毒症的感染患者中比无并发症感染的感染患者中更常见。基于这些发现，脓毒症第三次国际共识定义推荐qsofa作为识别icu外可能是脓毒症的感染患者的简单提示(seymour等人,2016.jama315(8):762-774)。
[0144]
危及生命的恶化被定义为与高死亡风险相关的患者状况，其涉及重要器官系统衰竭，包括中枢神经系统衰竭、肾衰竭、肝衰竭、代谢衰竭或呼吸衰竭。
[0145]
不良事件定义为死亡、器官功能障碍或休克、ards和ali(急性肺损伤)。
[0146]
在本发明中，术语“预后(prognosis)”或“预后(prognosing)”表示对受试者(例如，患者)的医疗状况将如何进展的预测。这可以包括对所述受试者的康复机会或不良事件或结果的机会的估计。
[0147]
包括死亡在内的不良事件的所述预后可以在限定的时间段内进行，例如至多1年，优选至多6个月，更优选至多3个月，更优选至多90天，更优选至多60天，更优选至多28天，更优选至多14天，更优选至多7天，更优选至多3天。
[0148]
在一个具体实施方式中，对包括死亡在内的不良事件的所述预后进行长达28天的时间段。
[0149]
本发明上下文中的术语“治疗监测”是指监测和/或调整所述患者的治疗性处理，例如通过获得关于治疗功效的反馈。
[0150]
如本文所用，术语“治疗指导”是指基于一种或多种生物标志物和/或临床参数和/或临床评分的值施用某些治疗或医学干预。
[0151]
所述临床参数或临床评分选自低血压史、血管加压剂需求、插管、机械通气、horovitz指数、sofa评分、快速sofa评分。
[0152]
术语“治疗分层”特别涉及将患者分组或分类为不同组，例如根据其分类接受或不接受治疗措施的治疗组。
[0153]
所述疗法或干预可以选自药物疗法、无创通气、机械通气、体外膜氧合(ecmo)、透析或肾脏替代疗法。
[0154]
无创通气是使用通过面罩、鼻罩或头盔施用的呼吸支持。在正压下通过面罩提供通常添加氧气的空气。
[0155]
机械通气或辅助通气，是人工通气的医学术语，其中使用机械手段来辅助或替代自主呼吸。这可能涉及称为呼吸机的机器，或者呼吸可以由适当合格的专业人员例如麻醉师、呼吸治疗师(rt)、注册护士或护理人员，通过压缩袋阀面罩装置进行手动辅助。如果机械通气涉及通过口腔进入气管内的任何器械，例如气管内插管，或通过皮肤进入气管内的任何器械，例如气管切开插管，则它被称为“有创”。在适当选择的有意识患者中，使用面罩或鼻罩进行无创通气。
[0156]
体外膜氧合(ecmo)，也称为体外生命支持(ecls)，是一种为心脏和肺部无法提供足够量的气体交换或灌注以维持生命的人提供延长的心脏和呼吸支持的体外技术。ecmo的技术主要来源于心肺转流术，它提供短期支持并抑制自然循环。ecmo的工作原理是从人体内移出血液并从患者的红细胞中人工去除二氧化碳并向其添加氧气。通常，它用于心肺转流术后或对严重心力衰竭和/或肺衰竭的人的晚期治疗，尽管它现在在某些中心被用作心脏骤停的治疗方法，从而允许在支持循环和氧合的同时治疗引起骤停的根本原因。在人工通气不足以维持血氧合水平的情况下，ecmo还用于支持与covid-19相关的急性病毒性肺炎患者。
[0157]
所述药物疗法可以选自抗adm抗体、抗adm抗体片段、抗adm非ig支架、抗病毒药物、来自治愈的covid-19肺炎患者的免疫球蛋白、靶向冠状病毒的中和性单克隆抗体、免疫增强剂、甲磺酸卡莫司他(camostat mesylate)、冠状病毒蛋白酶抑制剂(例如糜蛋白酶样抑制剂、木瓜蛋白酶样蛋白酶抑制剂)、刺突(s)蛋白-血管紧张素转化酶2(ace2)阻滞剂(例如氯喹、羟氯喹、大黄素、丙嗪)、血管紧张素受体激动剂和/或其前体。
[0158]
所述靶向sars-cov和mers-cov的中和性单克隆抗体可以选自如shanmugaraj等人(shanmugaraj等人,2020.asian pac j.allergy immunol 38:10-18)中概述的组。
[0159]
所述抗病毒药物可以选自洛匹那韦(lopinavir)、利托那韦(ritonavir)、瑞德西韦(remdesivir)、那法莫司他(nafamostat)、利巴韦林(ribavirin)、奥司他韦(oseltamivir)、喷昔洛韦(penciclovir)、阿昔洛韦(acyclovir)、更昔洛韦(ganciclovir)、法匹拉韦(favipiravir)、硝唑尼特(nitazoxanide)、奈非那韦(nelfinavir)、阿比多尔(arbidol)。
[0160]
所述免疫增强剂可以选自干扰素、静脉内丙种球蛋白、胸腺素α-1、左旋咪唑、环孢菌素-a的非免疫抑制性衍生物。
[0161]
在一个实施方式中，所述血管紧张素受体激动剂和/或其前体选自血管紧张素i、血管紧张素ii、血管紧张素iii、血管紧张素iv。
[0162]
horowitz指数(同义词：horowitz后的氧合、horowitz商、p/f比)是用于评估患者、
特别是那些使用呼吸机的患者的肺功能的比率。它可用于评价对肺部的损害程度。horowitz指数定义为血液中的氧分压(pao2)(以毫米汞柱计)与吸入空气中的氧分数(fio2)的比率，即pao2/fio2比率。在健康肺部中，horowitz指数取决于年龄并且通常落在介于350和450之间。低于300的值是轻度肺损伤的阈值，而200指示中度严重的肺损伤。低于100的值作为严重损伤的标准。horowitz指数在急性呼吸窘迫综合征(ards)的诊断中起重要作用。根据柏林定义(matthay等人,2012.j clin invest.122(8):2731-2740)，使用horowitz指数根据低氧血症程度对ards的三种严重程度进行分类。
[0163]
急性呼吸窘迫综合征(ards)是一种呼吸衰竭，其特征是肺部迅速出现广泛的炎症。症状包括呼吸浅短、呼吸急促和皮肤呈蓝色。对于那些存活下来的人来说，生活质量下降是常见的。原因可能包括脓毒症、胰腺炎、外伤、肺炎和误吸。潜在的机制涉及对形成肺部微观气囊屏障的细胞的弥漫性损伤、表面活性剂功能障碍、免疫系统的激活以及身体对凝血的调节功能障碍。实际上，ards损害了肺交换氧气和二氧化碳的能力。诊断是基于尽管呼气末正压(peep)超过5cm h2o，但pao2/fio2比率(动脉氧分压与吸入氧分数的比率)小于300mm hg。主要治疗包括机械通气以及针对根本原因的治疗。通气策略包括使用低容量和低压。如果氧合仍然不足，则可以使用肺复张操作和神经肌肉阻滞剂。如果这还不够，则体外膜氧合(ecmo)可能是一种选择。所述综合征的死亡率介于35％和50％之间。
[0164]
如本文所用的术语“患者”是指正在接受医疗护理或因疾病而应接受医疗护理的活的人类或非人类生物体。这包括没有明确疾病但正在接受病理学迹象研究的人。因此，本文所述的方法和测定法适用于人类疾病和兽医疾病。
[0165]
本发明上下文中的术语“患者管理”是指：
[0166]
·
入住医院或重症监护病房的决定，
[0167]
·
将患者转移到专科医院或专科医院单位的决定，
[0168]
·
早期从重症监护病房或医院出院的评价，
[0169]
·
资源分配(例如，医生和/或护理人员、诊断学家、治疗学家)，
[0170]
·
治疗性处理的决定。
[0171]
例如可以从kaplan-meier分析中获得阈值水平，其中疾病的发生与人群中生物标志物的四分位数相关。根据该分析，生物标志物水平高于第75个百分位数的受试者患上根据本发明的疾病的风险显著增加。对经典风险因素进行全面调整的cox回归分析进一步支持了该结果：与所有其他受试者相比，最高四分位数与患上根据本发明的疾病的风险增加高度显著相关。
[0172]
其他优选的截止值是例如正常人群的第90个、第95个或第99个百分位数。通过使用比第75个百分位数更高的百分位数，可以减少识别出的假阳性受试者的数量，但可能会错过识别处于中等风险尽管风险仍然增加的受试者。因此，人们可能会根据以下标准来采用截止值：是否认为更适合以也识别“假阳性”为代价来识别大多数处于风险中的受试者，或者是否认为更适合以错过若干中等风险的受试者为代价来主要识别处于高风险中的受试者。
[0173]
如果上述阈值的校准与本发明中使用的测定系统不同，则所述阈值在其他测定法中可能不同。因此，考虑到校准的差异，上述阈值应相应地适用于此类不同校准的测定法。量化校准差异的一种可能性是通过使用两种方法测量相应的生物标志物(例如bio-adm)，
将所讨论的测定法(例如bio-adm测定法)与本发明中使用的相应生物标志物测定法进行比较分析(相关性)的方法。另一种可能性是使用所讨论的测定法，假定该测试具有足够的分析灵敏度，确定代表性正常人群的中位生物标志物水平，将结果与文献(例如weber等人,2017.jalm 2(2):222-233)中描述的中位生物标志物水平进行比较，并根据通过这种比较获得的差异重新计算校准。利用本发明中使用的校准，已测量来自正常(健康)受试者的样品：中位血浆bio-adm(成熟adm-nh2)为13.7pg/ml(四分位距[iqr]9.6-18.7pg/ml)(weber等人,2017.jalm2(2):222-233)。
[0174]
在整个说明书中，根据本发明的“抗体”或“抗体片段”或“非ig支架”能够结合adm，并因此针对adm，因此可以称为“抗adm抗体”、“抗adm抗体片段”或“抗adm非ig支架”。
[0175]
成熟adm、bio-adm和adm-nh2在本技术中同义使用并且是根据seq id no.:20的分子。
[0176]
在诊断方法的一个具体实施方式中，所述结合剂对肾上腺髓质素原或其片段(并非根据seq id no.:20的adm-nh2)和adm-nh2表现出至少107m-1
、优选108m-1
的结合亲和力，优选的亲和力大于109m-1
，最优选大于10
10
m-1
。本领域技术人员知道，可以考虑通过施用较高剂量的化合物来补偿较低的亲和力，并且该措施不会导致超出本发明的范围。
[0177]
为了确定抗体对肾上腺髓质素的亲和力，使用biacore 2000系统(ge healthcare europe gmbh，德国弗莱堡)通过无标记表面等离子体共振测定肾上腺髓质素与固定化抗体的结合动力学。根据制造商的说明(小鼠抗体捕获试剂盒；ge healthcare)使用以高密度共价偶联到cm5传感器表面的抗小鼠fc抗体进行抗体的可逆固定化(lorenz等人,2011.antimicrob agents chemother.55(1):165-173)。
[0178]
在诊断方法的一个具体实施方式中，使用测定法来测定肾上腺髓质素原或其片段和adm-nh2的水平，其中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平选自pamp(seq id no.32)、mr-proadm(seq id no.33)、adm-gly(seq id no.21)和ct-proadm(seq id no.34)，并且其中这种测定法是夹心测定法，优选全自动测定法。
[0179]
在本发明的一个实施方式中，它可以是所谓的poc测试(point-of-care)，它是一种测试技术，其允许在患者附近不到1小时内执行测试，而不需要全自动测定系统。该技术的一个实例是免疫色谱测试技术。
[0180]
在诊断方法的一个实施方式中，这种测定法是使用任何种类的检测技术的夹心免疫测定法，包括但不限于酶标记、化学发光标记、电化学发光标记，优选全自动测定法。在诊断方法的一个实施方式中，这种测定法是酶标记的夹心测定法。自动或全自动测定法的实例包括可以用于以下系统之一的测定法：rocheabbottsiemensbrahmsbiomerieuxalere
[0181]
多种免疫测定法是已知的并且可以用于本发明的测定法和方法，这些包括：放射免疫测定法(“ria”)、均相酶倍增免疫测定法(“emit”)、酶联免疫吸附测定法(“elisa”)、脱辅基酶再活化免疫测定法(“aris”)、试纸免疫测定法和免疫色谱测定法。
[0182]
在诊断方法的一个具体实施方式中，所述两种结合剂中的至少一种被标记以便被检测到。
[0183]
单特异性是指所述抗体或抗体片段或非ig支架结合于靶adm内涵盖至少4个氨基酸的一个特定区域。根据本发明的单特异性抗体或片段或非ig支架是对相同抗原均具有亲
和力的抗体或片段或非ig支架。单克隆抗体是单特异性的，但单特异性抗体也可以通过其他方式产生，而不是从共同胚细胞中产生。
[0184]
所述结合于adm的抗adm抗体或抗体片段或结合于adm的非ig支架可以是结合于adm的非中和性抗adm抗体或抗体片段或结合于adm的非ig支架。
[0185]
根据本发明的抗体或片段是包括一种或多种基本上由免疫球蛋白基因编码的多肽的蛋白质，其特异性结合抗原。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α(iga)、γ(igg1、igg2、igg3、igg4)、δ(igd)、ε(ige)和μ(igm)恒定区基因，以及无数种免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白轻链的长度通常为约25kd或214个氨基酸。
[0186]
全长免疫球蛋白重链的长度通常为约50kd或446个氨基酸。轻链在nh2末端由可变区基因(长度约110个氨基酸)并且在cooh末端由κ或λ恒定区基因编码。重链类似地由可变区基因(长度约116个氨基酸)和其他恒定区基因之一编码。
[0187]
抗体的基本结构单元通常是由两对相同的免疫球蛋白链组成的四聚体，每对具有一条轻链和一条重链。在每对中，轻链和重链可变区与抗原结合，并且恒定区介导效应子功能。免疫球蛋白还以多种其他形式存在，包括例如fv、fab和(fab')2，以及双功能杂合抗体和单链(例如，lanzavecchia等人,1987.eur.j.immunol.17:105；huston等人,1988.proc.natl.acad.sci.u.s.a.,85:5879-5883；bird等人,1988.science242:423-426；hood等人,1984,immunology,benjamin,n.y.,第2版；hunkapiller和hood 1986.nature323:15-16)。免疫球蛋白轻链或重链可变区包括被三个高变区(也称为互补决定区(cdr))中断的框架区(参见sequences of proteins of immunological interest,e.kabat等人,1983,u.s.department of health and human services)。如上所述，cdr主要负责与抗原的表位结合。免疫复合物是与抗原特异性结合的抗体，例如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人类抗体，或功能性抗体片段。
[0188]
嵌合抗体是其轻链和重链基因通常通过基因工程从属于不同物种的免疫球蛋白可变区和恒定区基因构建的抗体。例如，来自小鼠单克隆抗体的基因的可变区段可以连接到人类恒定区段，例如κ和γ1或γ3。在一个实例中，治疗性嵌合抗体因此是由来自小鼠抗体的可变或抗原结合结构域和来自人类抗体的恒定或效应结构域组成的杂合蛋白，尽管可以使用其他哺乳动物物种，或者可以通过分子技术产生可变区。制备嵌合抗体的方法是本领域众所周知的，例如参见美国专利第5,807,715号。“人源化”免疫球蛋白是包括人框架区和来自非人(例如小鼠、大鼠或合成的)免疫球蛋白的一个或多个cdr的免疫球蛋白。提供cdr的非人免疫球蛋白被称为“供体”，而提供框架的人免疫球蛋白被称为“受体”。在一个实施方式中，在人源化免疫球蛋白中，所有cdr都来自供体免疫球蛋白。恒定区不一定存在，但如果存在，它们必须与人免疫球蛋白恒定区基本上同一，即至少约85-90％，例如约95％或更大的同一性。因此，人源化免疫球蛋白的所有部分，可能除了cdr之外，与天然人免疫球蛋白序列的相应部分基本上同一。“人源化抗体”是包含人源化轻链和人源化重链免疫球蛋白的抗体。人源化抗体与提供cdr的供体抗体结合相同的抗原。人源化免疫球蛋白或抗体的受体框架可以具有有限数量的取自供体框架的氨基酸替换。人源化或其他单克隆抗体可以具有额外的保守氨基酸替换，这对抗原结合或其他免疫球蛋白功能基本上没有影响。示例性的保守取代是例如以下的那些：gly、ala；val、ile、leu；asp、glu；asn、gln；ser、thr；lys、arg；以及phe、tyr。可以通过基因工程构建人源化免疫球蛋白(例如，参见美国专利第5,
585,089号)。人类抗体是其中轻链和重链基因具有人类来源的抗体。可以使用本领域已知的方法生成人类抗体。人类抗体可以通过使分泌目标抗体的人b细胞永生化来产生。例如，可以通过ebv感染或通过将人b细胞与骨髓瘤或杂交瘤细胞融合以产生三源瘤细胞来实现永生化。人类抗体也可以通过噬菌体展示方法产生(参见例如wo91/17271；wo92/001047；wo92/20791)，或选自人类组合单克隆抗体文库(参见morphosys网站)。人类抗体也可以通过使用携带人免疫球蛋白基因的转基因动物来制备(例如，参见wo93/12227；wo 91/10741)。
[0189]
因此，所述抗adm抗体可以具有本领域已知的形式。实例是人类抗体、单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、cdr移植抗体。在一个优选的实施方式中，根据本发明的抗体是重组产生的抗体，例如igg，一种典型的全长免疫球蛋白，或至少含有重链和/或轻链的f可变结构域的抗体片段，例如化学偶联抗体(抗原结合片段)，包括但不限于fab片段，包括fab微抗体、单链fab抗体、具有表位标签的单价fab抗体，例如fab-v5sx2；用ch3结构域二聚化的二价fab(微型抗体)；二价fab或多价fab，例如借助于异源结构域经由多聚化，例如经由dhlx结构域的二聚化形成，例如fab-dhlx-fsx2；f(ab')2片段、scfv片段、多聚化多价或/和多特异性scfv片段、二价和/或双特异性双体抗体、(双特异性t细胞接合剂)、三功能抗体、多价抗体，例如来自与g不同的类别；单域抗体，例如来自骆驼科或鱼类免疫球蛋白的纳米抗体，等等。
[0190]
除了抗adm抗体之外，在本领域中是众所周知其他生物聚合物支架与靶分子复合，并且已经用于生成高度靶特异性的生物聚合物。实例是适配体、镜像异构体(spiegelmer)、抗运载蛋白(anticalin)和芋螺毒素。有关抗体形式的说明，请参见图1a、图1b和图1c。
[0191]
在一个优选的实施方式中，所述抗adm抗体形式选自fv片段、scfv片段、fab片段、scfab片段、f(ab)2片段和scfv-fc融合蛋白。在另一个优选的实施方式中，所述抗体形式选自scfab片段、fab片段、scfv片段及其生物利用度优化的缀合物，例如聚乙二醇化片段。最优选的形式之一是scfab形式。
[0192]
非ig支架可以是蛋白质支架并且可以用作抗体模拟物，因为它们能够结合于配体或抗原。非ig支架可以选自基于四连接素(tetranectin)的非ig支架(例如描述于us 2010/0028995)，纤连蛋白支架(例如描述于ep 1 266 025)；基于脂质运载蛋白的支架(例如描述于wo 2011/154420)；泛素支架(例如描述于wo 2011/073214)，转铁蛋白支架(例如描述于us 2004/0023334)，蛋白a支架(例如描述于ep 2 231 860)，基于锚蛋白重复的支架(例如描述于wo 2010/060748)，微蛋白(优选形成半胱氨酸结的微蛋白)支架(例如描述于ep 2314308)，基于fyn sh3结构域的支架(例如描述于wo 2011/023685)，基于egfr-a结构域的支架(例如描述于wo 2005/040229)和基于kunitz结构域的支架(例如描述于ep 1 941 867)。
[0193]
在本发明的一个实施方式中，根据本发明的抗adm抗体可以如实施例1所概述通过合成adm片段作为抗原来产生。此后，使用下述方法或本领域已知的其他方法鉴定所述片段的结合剂。
[0194]
鼠类抗体的人源化可以根据以下程序进行：对于鼠源抗体的人源化，分析抗体序列的框架区(fr)与互补决定区(cdr)和抗原的结构相互作用。基于结构建模，选择适当的人源fr，并将鼠类cdr序列移植到人类fr中。可以引入cdr或fr的氨基酸序列的变异以重新获
得被fr序列的物种转换所消除的结构相互作用。这种结构相互作用的恢复可以通过使用噬菌体展示文库的随机方法或经由分子建模指导的定向方法来实现(almagro和fransson 2008.front biosci.13:1619-33)。
[0195]
在另一个实施方式中，所述抗adm抗体、抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是全长抗体、抗体片段或非ig支架。
[0196]
在一个实施方式中，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架针对并且可以结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端和/或中段部分(氨基酸1-42)的长度为优选至少4个或至少5个氨基酸的表位：
[0197]
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtctvqklahqiyqftdkdkdnva(seq id no.23)。
[0198]
表位，也称为抗原决定簇，是抗原(例如肽或蛋白质)中被免疫系统、特别是被抗体识别的部分。例如，表位是抗体结合的抗原的特定片段。与表位结合的抗体部分称为互补位。蛋白质抗原的表位根据其结构和与互补位的相互作用分为两类：构象表位和线性表位。
[0199]
线性或连续表位是抗体通过其氨基酸的线性序列或一级结构识别并由连续氨基酸残基的相互作用采用的3-d构象形成的表位。构象和线性表位基于表位采用的3-d构象与互补位相互作用，这由所涉及的表位残基的表面特征和抗原其他区段的形状或三级结构决定。构象表位由不连续氨基酸残基的相互作用所采用的3-d构象形成。
[0200]
在本发明的一个具体实施方式中，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架针对并且可以结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端部分(氨基酸1-21)内的优选至少4个或至少5个氨基酸：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.:14)。
[0201]
在另一个优选的实施方式中，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架针对并且可以结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端部分(氨基酸1-14)内的优选至少4个或至少5个氨基酸：yrqsmnnfqglrsf(seq id no.:25)。
[0202]
在另一个实施方式中，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架针对并且可以结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端部分(氨基酸1-10)内的优选至少4个或至少5个氨基酸：yrqsmnnfqg(seq id no.:26)。
[0203]
在一个非常具体的实施方式中，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架针对并且可以结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端部分(氨基酸1-6)内的优选至少4个或至少5个氨基酸：yrqsmn(seq id no.:27)，并且需要adm和/或adm-gly的游离n端(氨基酸1)进行结合。
[0204]
在本发明的另一个非常具体的实施方式中，所述抗adm抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架识别并结合于adm-gly和/或adm-nh2的n末端(氨基酸1)。n末端意指氨基酸1，即seq id no.14、20、22、23、25、26、27的“y”对于抗体结合是必需的。抗体或片段或支架既不结合n端延伸adm也不结合n端修饰adm，也不结合n端降解的adm-gly和/或adm-nh2。这意味着所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架仅结合于adm的n末端是游离的情况下的adm-gly和/或adm-nh2的序列内的区域。如果所述序列例如包含在pro-adm中，则所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架不结合于adm-gly和/或adm-nh2的序列内的区域。
[0205]
为了清楚起见，用于adm的特定区域的括号中的数字如“n端部分(氨基酸1-21)”由本领域技术人员理解为adm的n端部分由adm-gly和/或adm-nh2序列的氨基酸1-21组成。
[0206]
在根据本发明的另一个具体实施方式中，本文提供的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架不结合于adm的c端部分，即adm的aa 43
–
52(seq id no.:24)。
[0207]
在一个具体实施方式中，优选使用根据本发明的抗adm抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素抗体或所述抗肾上腺髓质素抗体片段或非ig支架导致血清、血液、血浆中adm-nh2水平或adm-nh2免疫反应性增加至少10％，优选至少50％，更优选》50％，最优选》100％。
[0208]
可以用于测定血清、血液、血浆中肾上腺髓质素的半衰期(半保留时间)的测定法描述于实施例3中。
[0209]
在本发明的一个具体实施方式中，所述抗体是单克隆抗体或其片段。在本发明的一个实施方式中，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段是人类或人源化抗体或衍生自它们。在一个具体实施方式中，将一个或多个(鼠类)cdr移植到人类抗体或抗体片段中(“人源化”)。
[0210]
在一个方面，本发明的主题是用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的人源化cdr移植抗体或其抗体片段，其中所述抗体识别或结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端部分，其中所述人源化cdr移植抗体或其抗体片段包含抗体重链(h链)，其包含：
[0211]
seq id no.:1
[0212]
gytfsryw
[0213]
seq id no.:2
[0214]
ilpgsgst
[0215]
和/或
[0216]
seq id no.:3
[0217]
tegyeydgfdy
[0218]
和/或进一步包含抗体轻链(l链)，其包含：
[0219]
seq id no.:4
[0220]
qsivysngnty
[0221]
序列“rvs
””
(并非序列表的一部分)：
[0222]
rvs
[0223]
和/或
[0224]
seq id no.:5
[0225]
fqgshipyt。
[0226]
本发明的一个具体实施方式是用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的人源化和/或人类单克隆抗体或其抗体片段，其中所述抗体识别或结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端部分(氨基酸1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.:14)，其中重链包含至少一个选自以下的cdr：
[0227]
seq id no.:1
[0228]
gytfsryw
[0229]
seq id no.:2
[0230]
ilpgsgst
[0231]
seq id no.:3
[0232]
tegyeydgfdy
[0233]
并且其中轻链包含至少一个选自以下的cdr：
[0234]
seq id no.:4
[0235]
qsivysngnty
[0236]
序列“rvs”(并非序列表的一部分)：
[0237]
rvs
[0238]
seq id no.:5
[0239]
fqgshipyt。
[0240]
在本发明的一个更具体的实施方式中，本发明的主题是用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的人源化和/或人类单克隆抗体或其抗体片段，其中所述抗体识别或结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端部分(氨基酸1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.:14)，其中重链包含以下序列：
[0241]
seq id no.:1
[0242]
gytfsryw
[0243]
seq id no.:2
[0244]
ilpgsgst
[0245]
seq id no.:3
[0246]
tegyeydgfdy
[0247]
并且其中轻链包含以下序列：
[0248]
seq id no.:4
[0249]
qsivysngnty
[0250]
序列“rvs”(并非序列表的一部分)：
[0251]
rvs
[0252]
seq id no.:5
[0253]
fqgshipyt。
[0254]
在一个非常具体的实施方式中，所述抗adm抗体具有选自以下的序列：seq id no.6、7、8、9、10、11、12、13、35和36。
[0255]
根据本发明的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架表现出对人类adm-gly和/或adm-nh2的亲和力，使得亲和常数大于10-7
m、优选10-8
m，优选的亲和力大于10-9
m，最优选大于10-10
m。本领域技术人员知道可以考虑通过施用更高剂量的化合物来补偿较低的亲和力，并且该措施不会超出本发明的范围。亲和常数可以根据实施例1中描述的方法确定。
[0256]
本发明的主题是一种用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的结合于adm-gly和/或adm-nh2的人类或人源化单克隆抗体或片段，其中所述抗体或片段结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端(氨基酸1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.:14)，其中所述抗体或片段包含选自以下的序列：
[0257]
seq id no.:6(am-vh-c)
[0258]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0259]
seq id no.:7(am-vh1)
[0260]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0261]
seq id no.:8(am-vh2-e40)
[0262]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0263]
seq id no.:9(am-vh3-t26-e55)
[0264]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0265]
seq id no.:10(am-vh4-t26-e40-e55)
[0266]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0267]
seq id no.:11(am-vl-c)
[0268]
dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0269]
seq id no.:12(am-vl1)
[0270]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0271]
seq id no.:13(am-vl2-e40)
[0272]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0273]
seq id no.:35(重链ham8101)
[0274]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0275]
seq id no.:36(轻链ham 8101)
[0276]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0277]
本发明的主题进一步是用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的结合于adm-gly和/或adm-nh2的人类和/或人源化单克隆抗体或片段，其中所述抗体或片段结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端部分(氨基酸1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.:14)，其中所述抗体或片段包含以下序列作为重链：
[0278]
seq id no.:35
[0279]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0280]
并且包含以下序列作为轻链：
[0281]
seq id no.:36
[0282]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0283]
在本发明的一个具体实施方式中，所述抗体包含以下序列或与其具有》95％、优选》98％、优选》99％同一性的序列作为重链：
[0284]
seq id no.:35
[0285]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk，
[0286]
并且包含以下序列或与其具有》95％、优选》98％、优选》99％同一性的序列作为轻链：
[0287]
seq id no.:36
[0288]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0289]
为了评估两个氨基酸序列之间的同一性，进行了成对比对。同一性定义了比对中直接匹配的氨基酸百分比。
[0290]
术语“药物制剂”是指与至少一种药学上可接受的赋形剂组合的药物成分，其形式容许其中所含药物成分的生物活性有效，并且其不含对施用制剂的受试者有不可接受的毒性的额外组分。术语“药物成分”是指可以任选地与药学上可接受的赋形剂组合以提供药物制剂或剂型的治疗组合物。
[0291]
本发明的主题是一种用于在患者中治疗或干预感染冠状病毒的患者的药物制剂，其包含根据本发明的抗体或片段或支架。
[0292]
本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的药物制剂，其中所述药物制剂是溶液，优选为即用型溶液。
[0293]
本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的药物制剂，其中所述药物制剂处于冷冻干燥状态。
[0294]
本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的药物制剂，其中所述药物制剂是肌肉内施用的。
[0295]
本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的药物制剂，其中所述药物制剂是血管内施用的。
[0296]
本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的药物制剂，其中所述药物制剂是经由输注施用的。
[0297]
本发明的主题是一种根据本发明用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的药物制剂，其中所述药物制剂被全身施用。
[0298]
实施方式
[0299]
1.一种在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，所述方法包括：
[0300]
·
测定所述患者的体液样品中的肾上腺髓质素原(seq id no.31)或其片段的水平，
[0301]
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与预定阈值或与肾上腺髓质素原或其片段的先前测量水平进行比较，以及
[0302]
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述危及生命的恶化或不良事件的风险相关联，或
[0303]
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述严重程度相关联，或
[0304]
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述治疗或干预的成功相关联，或
[0305]
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与某种治疗或干预相关联，或
[0306]
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述患者的管理相关联，
[0307]
其中所述肾上腺髓质素原或其片段选自pamp(seq id no.32)、mr-proadm(seq id no.33)、adm-nh2(seq id no.20)、adm-gly(seq id no.21)和ct-proadm(seq id no.34)。
[0308]
2.根据实施方式1所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述冠状病毒选自sars-cov-1、sars-cov-2、mers-cov，特别是sars-cov-2。
[0309]
3.根据实施方式1或2所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述不良事件选自死亡、器官功能障碍、休克。
[0310]
4.根据实施方式1至3所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平高于预定阈值。
[0311]
5.根据实施方式1至4所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功
的方法，其中所述片段是mr-proadm(seq id no.33)，并且所述受试者的体液样品中mr-proadm的预定阈值介于0.5和2nmol/l之间，优选介于0.7和1.5nmol/l之间，优选介于0.8和1.2nmol/l之间，最优选应用1nmol/l的阈值。
[0312]
6.根据实施方式1至4所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述片段是adm-nh2(seq id no.20)，并且所述受试者的体液样品中adm-nh2(seq id no.20)的预定阈值介于40和100pg/ml之间，更优选介于50和90pg/ml之间，甚至更优选介于60和80pg/ml之间，最优选所述阈值为70pg/ml。
[0313]
7.根据实施方式1至6所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述患者的sofa评分等于或大于3，优选等于或大于7，或者所述患者的快速sofa评分等于或大于1，优选等于或大于2。
[0314]
8.根据实施方式1至7所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述患者的d-二聚体水平等于或大于0.5μg/ml，优选等于或大于1.0μg/ml。
[0315]
9.根据实施方式1至8所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平通过使所述体液样品与特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂接触来测定。
[0316]
10.根据实施方式1至9所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述测定包括使用特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非igg支架。
[0317]
11.根据实施方式1至10所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中在所述受试者的体液样品中测定肾上腺髓质素原或其片段的水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂是抗体。
[0318]
12.根据实施方式1至11所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中在所述受试者的体液样品中测定所述肾上腺髓质素原或其片段的水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段水平的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂固定在表面上。
[0319]
13.根据实施方式1至12所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述患者用抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架治疗，其中所述抗adm抗体或抗adm片段或抗adm非ig支架结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端和/或中段部分(aa 1-42)：
[0320]
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtctvqklahqiyqftdkdkdnva(seq id no.23)。
[0321]
14.一种用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架。
[0322]
15.根据实施方式14所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述冠状病毒选自sars-cov-1、sars-cov-2、mers-cov，特别是sars-cov-2。
[0323]
16.根据实施方式14或15所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中当通过根据权利要求1至12中任一项所述的方法测定时，在所述受试者的体液样品中，所述患者的肾上腺髓质素原或其片段的水平高于预定阈值或高于肾上腺髓质素原的先前测量水平。
[0324]
17.根据实施方式14至16所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者的sofa评分等于或大于3，优选等于或大于7，或者所述患者的快速sofa评分等于或大于1，优选等于或大于2。
[0325]
18.根据实施方式14至17所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者的d-二聚体水平等于或大于0.5μg/ml，优选等于或大于1.0μg/ml。
[0326]
19.根据实施方式14至18所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗adm抗体或抗adm片段或抗adm非ig支架结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端(氨基酸1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.14)。
[0327]
20.根据实施方式14至19所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架对肾上腺髓质素原或其片段表现出等于或小于10-7
m的最小结合亲和力。
[0328]
21.根据实施方式14至20所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段或支架阻断adm的生物活性不超过80％，优选不超过50％。
[0329]
22.根据实施方式14至21所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体是单克隆抗体或单克隆抗体片段。
[0330]
23.根据实施方式22所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中重链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：
[0331]
cdr1:seq id no:1
[0332]
gytfsryw
[0333]
cdr2:seq id no:2
[0334]
ilpgsgst
[0335]
cdr3:seq id no:3
[0336]
tegyeydgfdy
[0337]
并且轻链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：
[0338]
cdr1:seq id no:4
[0339]
qsivysngnty
[0340]
cdr2:
[0341]
rvs
[0342]
cdr3:seq id no:5
[0343]
fqgshipyt。
[0344]
24.根据实施方式23所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段包含选自以下的序列或分别与以下各序列具有》80％同一性的序列作为vh区：
[0345]
seq id no:6(am-vh-c)
[0346]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0347]
seq id no:7(am-vh1)
[0348]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0349]
seq id no:8(am-vh2-e40)
[0350]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0351]
seq id no:9(am-vh3-t26-e55)
[0352]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0353]
seq id no:10(am-vh4-t26-e40-e55)
[0354]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk，
[0355]
并且
[0356]
包含选自以下的序列或与以下各序列具有》80％同一性的序列作为vl区：
[0357]
seq id no:11(am-vl-c)
[0358]
dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0359]
seq id no:12(am-vl1)
[0360]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfyp
reakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0361]
seq id no:13(am-vl2-e40)
[0362]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0363]
25.根据实施方式23至24中任一项所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段包含以下序列或与其具有》95％同一性的序列作为重链：
[0364]
seq id no:35
[0365]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk，
[0366]
并且包含以下序列或与其具有》95％同一性的序列作为轻链：
[0367]
seq id no:36
[0368]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0369]
26.根据实施方式23至25中任一项所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述单克隆抗体或抗体片段为人源化单克隆抗体或人源化单克隆抗体片段。
[0370]
27.根据实施方式14至26所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是单克隆抗体，并且是adrecizumab或其生物类似物，并且包含以下序列作为重链：
[0371]
seq id no:35
[0372]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0373]
并且包含以下序列作为轻链：
[0374]
seq id no:36
[0375]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0376]
28.一种用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架。
[0377]
29.根据实施方式28所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者的horowitz指数低于300，特别是低于200，特别是低于100和/或所述患者需要机械通气。
[0378]
30.根据实施方式28或29所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中当通过根据权利要求1至12中任一项所述的方法测定时，在所述受试者的体液样品中，所述患者的肾上腺髓质素原或其片段的水平高于预定阈值或高于肾上腺髓质素原的先前测量水平。
[0379]
31.根据实施方式28至30所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者的sofa评分等于或大于3，优选等于或大于7，或者所述患者的快速sofa评分等于或大于1，优选等于或大于2。
[0380]
32.根据实施方式28至31所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者的d-二聚体水平等于或大于0.5μg/ml，优选等于或大于1.0μg/ml。
[0381]
33.根据实施方式28至32所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗adm抗体或抗adm片段或抗adm非ig支架结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端(氨基酸1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.14)。
[0382]
34.根据实施方式28至33所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架对肾上腺髓质素原或其片段表现出等于或小于10-7
m的最小结合亲和力。
[0383]
35.根据实施方式28至34所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段或支架阻断adm的生物活性不超过80％，优选不超过50％。
[0384]
36.根据实施方式28至35所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体是单克隆抗体或单克隆抗体片段。
[0385]
37.根据实施方式36所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中重链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：
[0386]
cdr1:seq id no:1
[0387]
gytfsryw
[0388]
cdr2:seq id no:2
[0389]
ilpgsgst
[0390]
cdr3:seq id no:3
[0391]
tegyeydgfdy
[0392]
并且轻链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：
[0393]
cdr1:seq id no:4
[0394]
qsivysngnty
[0395]
cdr2:
[0396]
rvs
[0397]
cdr3:seq id no:5
[0398]
fqgshipyt。
[0399]
38.根据实施方式37所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段包含选自以下的序列或分别与以下各序列具有》80％同一性的序列作为vh区：
[0400]
seq id no:6(am-vh-c)
[0401]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0402]
seq id no:7(am-vh1)
[0403]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0404]
seq id no:8(am-vh2-e40)
[0405]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0406]
seq id no:9(am-vh3-t26-e55)
[0407]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0408]
seq id no:10(am-vh4-t26-e40-e55)
[0409]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk，
[0410]
并且
[0411]
包含选自以下的序列或与以下各序列具有》80％同一性的序列作为vl区：
[0412]
seq id no:11(am-vl-c)
[0413]
dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfyp
reakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0414]
seq id no:12(am-vl1)
[0415]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0416]
seq id no:13(am-vl2-e40)
[0417]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0418]
39.根据实施方式37至38中任一项所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段包含以下序列或与其具有》95％同一性的序列作为重链：
[0419]
seq id no:35
[0420]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk，
[0421]
并且包含以下序列或与其具有》95％同一性的序列作为轻链：
[0422]
seq id no:36
[0423]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0424]
40.根据实施方式37至39中任一项所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述单克隆抗体或抗体片段是人源化单克隆抗体或人源化单克隆抗体片段。
[0425]
41.根据实施方式28至40所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是单克隆抗体，并且是adrecizumab或其生物类似物，并且包含以下序列作为重链：
[0426]
seq id no:35
[0427]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0428]
并且包含以下序列作为轻链：
[0429]
seq id no:36
[0430]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
实施例
[0431]
应该强调的是，根据本发明的实施例部分的抗体、抗体片段和非ig支架与adm结合，因此应该被认为是抗adm抗体/抗体片段/非ig支架。
[0432]
实施例1-抗体的生成和它们的亲和常数的测定
[0433]
产生了若干抗人类和抗鼠类adm抗体，并测定了它们的亲和常数(参见表2和表3)。
[0434]
用于免疫接种的肽/缀合物：
[0435]
合成了用于免疫接种的肽，参见表2，(jpt technologies，德国柏林)，带有一个额外的n端半胱氨酸(如果在选定的adm序列中不存在半胱氨酸)残基，用于将肽与牛血清白蛋白(bsa)缀合。通过使用sulfolink偶联凝胶(perbio-science，德国波恩)将肽共价连接到bsa。根据perbio的手册进行偶联程序。
[0436]
小鼠单克隆抗体产生：
[0437]
在第0天和第14天用100μg肽-bsa缀合物(在100μl完全弗氏佐剂中乳化)以及在第21天和第28天用50μg肽-bsa缀合物(在100μl不完全弗氏佐剂中)对balb/c小鼠进行免疫接种。在进行融合实验之前三天，动物接受了溶解在100μl盐水中的50μg缀合物，作为一次腹膜内注射和一次静脉内注射给药。将来自免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系sp2/0的细胞与1ml 50％聚乙二醇在37℃下融合30s。洗涤后，将细胞接种在96孔细胞培养板中。通过在hat培养基[补充有20％胎牛血清和hat补充剂的rpmi 1640培养基]中生长来选择杂交克隆。两周后，将hat培养基更换为ht培养基进行三次传代，接着恢复为正常细胞培养基。
[0438]
融合后三周，对细胞培养上清液进行抗原特异性igg抗体的初步筛选。将阳性测试的微培养物转移到24孔板中进行繁殖。重新测试后，使用限制稀释技术克隆和重新克隆所选培养物并确定同种型(还参见lane,r.d.1985.j.immunol.meth.81:223-228；ziegler等人,1996.horm.metab.res.28:11-15)。
[0439]
抗体经由标准抗体产生方法(marx等人,1997.monoclonal antibody production,atla 25,121)产生并经由蛋白a纯化。根据sds凝胶电泳分析，抗体纯度》95％。
[0440]
通过噬菌体展示产生人类抗体：
[0441]
人类幼稚抗体基因文库hal7/8用于分离针对肾上腺髓质素肽的重组单链f可变结构域(scfv)。所述抗体基因文库采用淘选策略进行筛选，所述策略包括使用含有生物素标签的肽，所述生物素标签经由两种不同的间隔物与肾上腺髓质素肽序列连接。使用非特异性结合抗原和链霉亲和素结合抗原的淘选轮的混合来最小化非特异性结合剂的背景。来自第三轮淘选的洗脱噬菌体已用于生成表达单克隆scfv的大肠杆菌(e.coli)菌株。这些克隆菌株的培养上清液已直接用于抗原elisa测试(还参见hust等人,2011.journal of biotechnology152,159-170；sch
ü
tte等人,2009.plos one 4,e6625)。
[0442]
已根据抗原的阳性elisa信号和链霉亲和素包被的微量滴定板的阴性elisa信号
选择阳性克隆。为了进一步表征，已将scfv开放阅读框克隆到表达质粒pope107(hust等人,j.biotechn.2011)中，经由固定化金属离子亲和色谱从培养上清液中捕获并通过尺寸排阻色谱纯化。
[0443]
亲和常数：
[0444]
为了确定抗体对肾上腺髓质素的亲和力，使用biacore 2000系统(ge healthcare europe gmbh，德国弗莱堡)通过无标记表面等离子体共振测定肾上腺髓质素与固定化抗体的结合动力学。根据制造商的说明(小鼠抗体捕获试剂盒；ge healthcare)，使用以高密度共价偶联到cm5传感器表面的抗小鼠fc抗体进行抗体的可逆固定。(lorenz等人,2011.antimicrob agents chemother.55(1):165-173)。
[0445]
分别针对以下描述的人类和鼠类adm的adm区域产生单克隆抗体。下表代表在进一步实验中使用的所得抗体的选择。选择是基于目标区域：
[0446]
表2：
[0447][0448]
以下是进一步获得的单克隆抗体的列表：
[0449]
表3：
[0450]
[0451][0452]
通过酶消化生成抗体片段：
[0453]
fab和f(ab)2片段的生成是通过鼠类全长抗体nt-m的酶消化进行的。使用a)基于胃蛋白酶的f(ab)2制备试剂盒(pierce 44988)和b)基于木瓜蛋白酶的fab制备试剂盒(pierce 44985)消化抗体nt-m。片段化程序根据供应商提供的说明进行。在f(ab)2片段化的情况下，在37℃下进行消化8h。fab片段化消化相应地进行16h。
[0454]
fab生成和纯化程序：
[0455]
通过用0.5ml消化缓冲液洗涤树脂并以5000
×
g离心柱1分钟来平衡固定的木瓜蛋白酶。然后弃去缓冲液。脱盐柱是通过如下制备：除去储存溶液并用消化缓冲液洗涤，然后每次以1000
×
g离心2分钟。将0.5ml制备的igg样品添加到含有平衡的固定木瓜蛋白酶的离心柱管中。消化反应的温育时间在37℃下在桌面摇动槽上进行16h。将柱以5000
×
g离心1分钟以将消化物与固定的木瓜蛋白酶分离。然后用0.5ml pbs洗涤树脂并以5000
×
g离心1分钟。将洗涤级分添加到总样品体积为1.0ml的消化抗体中。nab蛋白a柱在室温下用pbs和igg洗脱缓冲液平衡。将柱离心1分钟以除去储存溶液(含有0.02％叠氮化钠)并通过加入2ml pbs平衡，再次离心1分钟并弃去流穿液。将样品施加到柱上并通过倒置重新悬浮。在室温下进行温育，上下颠倒混合10分钟。将柱离心1分钟，保留含fab片段的流穿液。(参考文献：coulter和harris1983.j.immunol.meth.59,199-203.；lindner等人,2010.cancerres.70,277-87；kaufmann等人,2010.pnas.107,18950-5.；chen等人,2010.pnas.107,14727-32；uysal等人,2009j.exp.med.206,449-62；thomas等人,2009.j.exp.med.206,1913-27；kong等人,2009j.cellbiol.185,1275-840)。
[0456]
f(ab')2片段的生成和纯化程序：
[0457]
通过用0.5ml消化缓冲液洗涤树脂并以5000
×
g离心柱1分钟来平衡固定的胃蛋白酶。然后弃去缓冲液。脱盐柱是通过如下制备：除去储存溶液并用消化缓冲液洗涤，然后每次以1000
×
g离心2分钟。将0.5ml制备的igg样品添加到含有平衡的固定胃蛋白酶的离心柱管中。消化反应的温育时间在37℃下在桌面摇动槽上进行16h。将柱以5000
×
g离心1分钟以将消化物与固定的木瓜蛋白酶分离。然后用0.5ml pbs洗涤树脂并以5000
×
g离心1分钟。将洗涤级分添加到总样品体积为1.0ml的消化抗体中。nab蛋白a柱在室温下用pbs和igg洗脱缓冲液平衡。将柱离心1分钟以除去储存溶液(含有0.02％叠氮化钠)并通过加入2ml pbs平
衡，再次离心1分钟并弃去流穿液。将样品施加到柱上并通过倒置重新悬浮。在室温下进行温育，上下颠倒混合10分钟。将柱离心1分钟，保留含fab片段的流穿液。(参考文献：mariani等人,1991.mol.immunol.28:69-77；beale 1987.exp comp immunol11:287-96；ellerson等人,1972.febs letters 24(3):318-22；kerbel和elliot1983.meth enzymol 93:113-147；kulkarni等人,1985.cancer immunol immunotherapy19:211-4；lamoyi1986.meth enzymol121:652-663；parham等人,1982.j immunol meth 53:133-73；raychaudhuri等人,1985.mol immunol22(9):1009-19；rousseaux等人,1980.mol immunol 17:469-82；rousseaux等人,1983.j immunol meth64:141-6；wilson等人,1991.j immunol meth 138:111-9)。
[0458]
nt-h抗体片段人源化：
[0459]
通过cdr移植方法将抗体片段人源化(jones等人,1986.nature321,522-525)。进行以下步骤以实现人源化序列：
[0460]
使用qiagen试剂盒从nt-h杂交瘤中提取总rna。对于第一轮rt-pcr，使用了onestep rt-pcr试剂盒(目录号210210)。使用对重链和轻链特异的引物组进行rt-pcr。对于每个rna样品，使用覆盖可变区前导序列的简并正向引物混合物建立了12个单独的重链和11个轻链rt-pcr反应。反向引物位于重链和轻链的恒定区中。没有将限制性位点工程化设计到引物中。
[0461]
反应设置如下：5xonestep rt-pcr缓冲液5.0μl，dntp混合物(含有10mm的各dntp)0.8μl，引物组0.5μl，onestep rt-pcr酶混合物0.8μl，模板rna 2.0μl，无rna酶的水至20.0μl，总体积20.0μl，pcr条件：逆转录：50℃，30min；初始pcr激活：95℃，15min；循环：20个循环的94℃持续25sec、54℃持续30sec、72℃持续30sec；最终延伸：72℃，10min第二轮半套式pcr：来自第一轮反应的rt-pcr产物在第二轮pcr中进一步扩增。使用对抗体可变区特异的半套式引物组建立了12个单独的重链和11个轻链rt-pcr反应。
[0462]
反应设置如下：2x pcr混合物10μl；引物组2μl；第一轮pcr产物8μl；总体积20μl；杂交瘤抗体克隆报告pcr条件：在95℃初始变性5min；25个循环的95℃持续25sec、57℃持续30sec、68℃持续30sec；最终延伸为10min 68℃。
[0463]
pcr完成后，将pcr反应样品运行到琼脂糖凝胶上，以显现扩增的dna片段。在对通过套式rt-pcr扩增的超过15个克隆dna片段进行测序后，若干小鼠抗体重链和轻链已被克隆并显示正确。蛋白质序列比对和cdr分析鉴定出一条重链和一条轻链。与同源人框架序列比对后，所得的可变重链的人源化序列如下：参见图5。由于可变重链中第26、40和55位的氨基酸和可变轻链中第40位的氨基酸对结合特性至关重要，因此它们可以恢复为鼠源的。所得的候选者如下所示。(padlan1991.mol.immunol.28,489-498；harris和bajorath.1995.proteinsci.4,306-310)。
[0464]
抗体片段序列(seq id no.:7-13、35和36)的注释：粗体和下划线是按时间顺序排列的cdr 1、2、3。
[0465]
seq id no.:6(am-vh-c)
[0466][0467]
seq id no.:7(am-vh1)
[0468][0469]
seq id no.:8(am-vh2-e40)
[0470][0471]
seq id no.:9(am-vh3-t26-e55)
[0472][0473][0474]
seq id no.:10(am-vh4-t26-e40-e55)
[0475][0476]
seq id no.:11(am-vl-c)
[0477][0478]
seq id no.:12(am-vl1)
[0479][0480]
seq id no.:13(am-vl2-e40)
[0481][0481][0482]
seq id no.:35
[0483][0484]
seq id no.:36
[0485][0486]
实施例2
–
选定的抗adm抗体对抗adm生物活性的影响
[0487]
在人重组肾上腺髓质素受体camp功能测定法(肾上腺髓质素生物测定法)中测试了选定的adm抗体对adm生物活性的影响。使用了以下材料：细胞系cho-k1、肾上腺髓质素受体(crlr+ramp3)、受体登录号细胞系(crlr:u17473；ramp3:aj001016)。在测试前在不含抗生素的培养基中生长的表达人重组肾上腺髓质素受体(fast-027c)的cho-k1细胞通过用pbs-edta(5mm edta)温和冲洗分离，通过离心回收并重新悬浮在测定缓冲液(krh:5mm kcl、1.25mm mgso4、124mm nacl、25mm hepes、13.3mm葡萄糖、1.25mm kh2po4、1.45mm cacl2、0.5g/l bsa)中。剂量反应曲线与参考激动剂(hadm或madm)平行进行。
[0488]
拮抗剂测试(96孔)：
[0489]
对于拮抗剂测试，将6μl参考激动剂(人类(5.63nm)或小鼠(0.67nm)肾上腺髓质素)与6μl不同拮抗剂稀释度的测试样品；或与6μl缓冲液混合。在室温下温育60min后，添加12μl细胞(2,500个细胞/孔)。将板在室温下温育30min。加入裂解缓冲液后，使用来自cis-bio international(cat n
°
62am2 peb)的htrf试剂盒，根据制造商的说明估算δf的百分比，其中hadm 22-52作为参考拮抗剂。
[0490]
抗体测试camp-htrf测定：
[0491]
在5.63nm人adm 1-52(seq id no.20)存在下，在下列最终抗体浓度：100μg/ml、20μg/ml、4μg/ml、0.8μg/ml、0.16μg/ml下，在人重组肾上腺髓质素受体(fast-027c)camp功能测定中，测试抗h-adm抗体(nt-h、mr-h、ct-h)的拮抗剂活性。在0.67nm小鼠adm 1-50(seq id no.22)存在下，在下列最终抗体浓度：100μg/ml、20μg/ml、4μg/ml、0.8μg/ml、0.16μg/ml下，在人重组肾上腺髓质素受体(fast-027c)camp功能测定中，测试抗m-adm抗体(nt-m、mr-m、ct-m)的拮抗剂活性。将数据绘制成相对抑制与拮抗剂浓度的关系图(参见图2a至图2l)。单个抗体的最大抑制见于表4。
[0492]
表4：adm抗体的最大抑制
[0493]
抗体adm生物活性的最大抑制(adm-生物测定)(％)nt-h38mr-h73ct-h100nt-m fab26nt-m fab228nt-m45mr-m66ct-m100
非特异性小鼠igg0
[0494]
实施例3-通过抗adm抗体稳定化hadm
[0495]
使用hadm免疫测定法测试人adm抗体对人adm的稳定化作用。所使用的技术是基于吖啶酯标记的夹心包被管发光免疫测定法。
[0496]
标记化合物(示踪剂)：将100μg(100μl)ct-h(1mg/ml于pbs中，ph 7.4，adrenomed ag，德国)与10μl吖啶nhs-酯(1mg/ml于乙腈中，invent gmbh，德国)(ep 0353971)混合并在室温下温育20min。标记的ct-h在sec 400-5(bio-rad laboratories公司，美国)上通过凝胶过滤hplc纯化。纯化的ct-h在(300mmol/l磷酸钾、100mmol/lnacl、10mmol/l na-edta、5g/l牛血清白蛋白，ph 7.0)中稀释。最终浓度为每200μl约800.000相对光单位(rlu)的标记化合物(约20ng标记抗体)。通过使用autolumat lb 953(berthold technologies gmbh&co.kg)测量吖啶酯化学发光。
[0497]
固相：聚苯乙烯管(greiner bio-one international ag，奥地利)用mr-h(adrenomed ag，德国)(1.5μg mr-h/0.3ml 100mmol/l nacl、50mmol/l tris/hcl，ph 7.8)包被(室温下18h)。用5％牛血清白蛋白封闭后，用ph 7.4的pbs洗涤管并真空干燥。
[0498]
校准：使用hadm(bachem ag，瑞士)在250mmol/l nacl、2g/ltriton x-100、50g/l牛血清白蛋白、20片/l蛋白酶抑制剂混合液(roche diagnostics ag，瑞士)中的稀释液校准测定。
[0499]
hadm免疫测定法：将50μl样品(或校准物)移液到包被管中，在添加标记的ct-h(200μl)后，将管在4℃下温育4h。通过用洗涤溶液(20mm pbs，ph 7.4，0.1％triton x-100)洗涤5次(每次1ml)去除未结合的示踪剂。通过使用lb 953(berthold，德国)测量管结合化学发光。图3显示了典型的hadm剂量/信号曲线。以及在100μg/ml抗体nt-h存在下的hadm剂量信号曲线。nt-h不影响所描述的hadm免疫测定法。
[0500]
人类肾上腺髓质素的稳定性：人adm在人柠檬酸盐血浆中稀释(最终浓度10nm)并在24℃下温育。在选定的时间点，通过在-20℃下冷冻来停止hadm的降解。在nt-h(100μg/ml)不存在和存在的情况下进行温育。通过使用上述hadm免疫测定法对剩余的hadm进行量化。图4显示了在nt-h抗体不存在和存在的情况下hadm在人血浆(柠檬酸盐)中的稳定性。单独hadm的半衰期为7.8h，而在nt-h存在下，半衰期为18.3h(稳定性高2.3倍)。
[0501]
实施例4-脓毒症死亡率
[0502]
a)脓毒症的早期治疗
[0503]
动物模型：12-15周龄的雄性c57bl/6小鼠(charles river laboratories，德国)用于研究。在轻度异氟醚麻醉下通过手术诱发腹膜炎。在腹膜腔的左上象限(盲肠的正常位置)进行切口。盲肠被暴露并在盲肠周围放置紧密的结扎线，缝合线远离小肠的插入。用一根24号针头在盲肠中作一个穿刺伤口，并通过所述伤口压出少量的盲肠内容物。将盲肠再放回到腹膜腔中并闭合剖腹手术部位。最后，将动物放回笼子，自由取用食物和水。皮下给予500μl盐水作为补液。
[0504]
化合物(nt-m、mr-m、ct-m)的施用和剂量：clp后立即处理小鼠(早期处理)。clp是盲肠结扎和穿刺(clp)的缩写。
[0505]
研究组：相对于以下测试了三种化合物：媒介物和对照化合物治疗。每个组含有5只小鼠，1天后抽血用于bun(血清血尿素氮测试)测定。在4天的时期内，跟踪每个组另外10
只小鼠。
[0506]
组治疗(10μl/g体重)剂量/跟踪：
[0507]
1nt-m，0.2mg/ml，4天存活率
[0508]
2mr-m，0.2mg/ml，4天存活率
[0509]
3ct-m，0.2mg/ml，4天存活率
[0510]
4非特异性小鼠igg，0.2mg/ml，4天存活率
[0511]
5对照-pbs 10μl/g体重，4天存活率
[0512]
临床化学：在基线和clp后第1天测量用于评价肾功能的血尿素氮(bun)浓度。在轻度乙醚麻醉下用毛细管从海绵窦获得血液样品。通过使用au 400olympus多功能分析仪进行测量。表5给出了4天死亡率和平均bun浓度。
[0513]
表5：4天死亡率和bun浓度
[0514]
4天死亡率存活率(％)clp前的bun(mm)第1天bun(mm)pbs08.023.2非特异性小鼠igg07.915.5ct-m107.813.5mr-m308.124.9nt-m708.88.2
[0515]
从表4可以看出，nt-m抗体显著降低了死亡率。4天后，70％的小鼠在用nt-m抗体治疗时存活。当用mr-m抗体治疗时，30％的动物存活，并且当用ct-m抗体治疗时，10％的动物在4天后存活。与此相反，当用非特异性小鼠igg治疗4天后，所有小鼠均死亡。在向小鼠施用pbs(磷酸盐缓冲盐水)的对照组中获得了相同的结果。血尿素氮或bun测试用于评价肾功能，帮助诊断肾脏疾病，以及监测患有急性或慢性肾功能不全或衰竭的患者。s-bun测试结果揭示，nt-m抗体对肾脏的保护最有效。
[0516]
b) 脓毒症的晚期治疗
[0517]
动物模型：12-15周龄的雄性c57bl/6小鼠(charles river laboratories，德国)用于研究。在轻度异氟醚麻醉下通过手术诱发腹膜炎。在腹膜腔的左上象限(盲肠的正常位置)进行切口。盲肠被暴露并在盲肠周围放置紧密的结扎线，缝合线远离小肠的插入。用一根24号针头在盲肠中作一个穿刺伤口，并通过所述伤口压出少量的盲肠内容物。将盲肠再放回到腹膜腔中并闭合剖腹手术部位。最后，将动物放回笼子，自由取用食物和水。皮下给予500μl盐水作为补液。
[0518]
化合物(nt-m fab2)的施用和剂量：相对于以下测试nt-m fab2：媒介物和对照化合物处理。在脓毒症完全发展后，在clp(晚期治疗)后6小时进行治疗。每组含有4只小鼠，并在4天的时期内进行跟踪。
[0519]
组治疗(10μl/g体重)剂量/跟踪：
[0520]
1nt-m，fab2，0.2mg/ml，4天存活率
[0521]
2对照非特异性小鼠igg，0.2mg/ml，4天存活率
[0522]
3媒介物：-pbs 10μl/g体重，4天存活率
[0523]
表6：4天死亡率
[0524]
4天死亡率存活率(％)
pbs0非特异性小鼠igg0nt-m fab275
[0525]
从表6可以看出，nt-m fab 2抗体显著降低了死亡率。4天后，75％的小鼠在用nt-m fab 2抗体治疗时存活。与此相反，当用非特异性小鼠igg治疗4天后，所有小鼠均死亡。在向小鼠施用pbs(磷酸盐缓冲盐水)的对照组中获得了相同的结果。
[0526]
实施例5-在健康人类中施用nt-h
[0527]
研究在健康男性受试者中进行，作为一项随机、双盲、安慰剂对照研究，在各8名健康男性受试者的3个连续组(第1组0.5mg/kg、第2组2mg/kg、第3组8mg/kg)的健康男性受试者(每组n＝6活性物，n＝2安慰剂)中，以静脉内(i.v.)输注施用单一递增剂量的nt-h抗体。主要纳入标准是书面知情同意书、年龄18至35岁、同意使用可靠的避孕方式以及bmi介于18和30kg/m2之间。受试者在研究单位经1小时时期通过缓慢输注接受了单次i.v.剂量的nt-h抗体(0.5mg/kg；2mg/kg；8mg/kg)或安慰剂。4个组的基线adm值没有差异。安慰剂组的中位adm值为7.1pg/ml，第一个治疗组(0.5mg/kg)为6.8pg/ml，第二个治疗组(2mg/kg)为5.5pg/ml并且第三个治疗组(8mg/ml)为7.1pg/ml。结果表明，在健康人类个体中施用nt-h抗体后的前1.5小时内，adm值迅速增加，然后达到平稳并缓慢下降(图6)。
[0528]
实施例6-感染冠状病毒(sars-cov-2)的患者中的bio-adm
[0529]
对来自12名被诊断为感染冠状病毒(sars-cov-2)的患者的血浆样品进行bio-adm筛选。使用如weber等人,2017(weber等人,2017.jalm2(2):222-233)所述的免疫测定法测量bio-adm水平。此外，如最近(rehfeld等人,2019.jalm3(6):943-953)所述，使用免疫测定法(lia)测量dpp3水平。表7总结了各个样品中各自的bio-adm和dpp3浓度。
[0530]
表7：感染冠状病毒(sars-cov-2)的患者样品中的bio-adm和dpp3水平
[0531]
患者编号dpp3(ng/ml)bio-adm(pg/ml)1561332304537021441508552904376876679757983331749216351053919911275312162401中位数156,0109,0平均值244.6160.1
[0532]
感染冠状病毒(sars-cov-2)的患者样品中的bio-adm浓度范围介于35和437pg/ml之间，中位数(iqr)为109(56-210)pg/ml。来自(健康)受试者的样品中的中位血浆bio-adm
(成熟adm-nh2)为24.7pg/ml，最低值为11pg/ml并且第99个百分位数为43pg/ml(marino等人,2014.critical care18:r34)。与健康对照相比，感染冠状病毒(sars-cov-2)的患者的bio-adm显著升高。
[0533]
dpp3浓度范围介于27和975ng/ml之间，中位数(iqr)为156.0(59.5-322.3)ng/ml。与健康受试者相比，dpp3浓度显著升高。已测量来自5,400名正常(健康)受试者(瑞典单中心前瞻性基于人群的研究(mpp-res))的样品：血浆dpp3中位数(四分位距)为14.5ng/ml(11.3ng/ml-19ng/ml)。
[0534]
实施例7
–
具有受损肺功能的患者在nt-adm抗体治疗下的肺功能变化(adrenoss-2)
[0535]
adrenoss-2是一项双盲、安慰剂对照、随机、多中心、概念验证和剂量发现的ii期临床试验，旨在研究名为adrecizumab的n端adm抗体在具有脓毒性休克和升高的肾上腺髓质素的患者中的安全性、耐受性和功效(geven等人,bmj open2019；9:e024475)。总共有301名具有脓毒性休克和bio-adm浓度》70pg/ml的患者被随机分配(2:1:1)经约1小时用安慰剂(n＝152)、adrecizumab 2ng/kg(n＝72)或adrecizumab 4ng/kg(n＝77)进行单次静脉内输注。纳入后28(90)天内的全因死亡率为25.8％(34.8％)。平均年龄为68.4岁并且61％为男性。对于每个方案分析，n＝294名患者仍然符合条件，并且14天全因死亡率为18.5％。
[0536]
在用adrecizumab治疗的患者(两种剂量联合，每个方案人群)中，与安慰剂相比，观察到短期死亡率(入院后14天)降低的趋势(风险比(hr)0.701[0.408-1.21]，p＝0.200)。
[0537]
此外，还分析了群组的不同亚群。主要结果是28天死亡率、horovitz指数(pao2/fio2)变化(24h/48h/72h)、sofa评分变化(24h/48h/72h)或呼吸sofa评分成分变化(也基于pao2/fio2)(24h/48h/72h)。所有p值都是双侧的并且应将p值0.20视为显著的。
[0538]
分析了符合以下标准的休克患者亚群：horovitz指数《170和基线机械通气(n＝48)。该组模拟icu中需要机械通气的危重covid-19患者。与安慰剂相比，用adrecizumab治疗的患者的28天死亡率趋于降低(p＝0.37)(图7)。在用adrecizumab治疗的患者中，horovitz指数的变化在48小时(p＝0.09)和72小时(p＝0.11)后显著更高(图8b和图8c)，分别平均增加64.2和66.4，并且在24小时后趋于更高(0.48)(图8a)。与安慰剂组相比，在用adrecizumab治疗的患者中，24小时(p＝0.032)、48小时(p＝0.012)和72小时(p＝0.028)后sofa评分的变化分别显著降低(图9a、b和c)。
[0539]
进一步分析了经由入院时呼吸体格检查定义的具有ali/ards的休克患者亚群(n＝80)。与安慰剂组相比，在用adrecizumab治疗的患者中，sofa评分的变化分别在24小时(p＝0.005)和48小时(p＝0.025)后显著降低(图10a、b)，并且在72小时后趋于降低(p＝0.38)(图10c)。此外，与安慰剂组相比，在用adrecizumab治疗的患者中，具有ali/ards的患者的呼吸sofa评分变化分别在48小时后显著降低(p＝0.09)并且在24小时后趋于降低(p＝0.26)(图11a、b)。
[0540]
选择了另一个满足基线机械通气标准的休克患者亚群(n＝161)。与安慰剂相比，用adrecizumab治疗的患者的28天死亡率显著降低(p＝0.157)(图12)。在用adrecizumab治疗的患者中，horovitz指数的变化在24小时(p＝0.155)、48小时(p＝0.007)和72小时(p＝0.087)后分别显著升高(图13a、b和c)，其中在24小时的平均增加为56.2。此外，与安慰剂组相比，在用adrecizumab治疗的患者中，基线机械通气患者的sofa评分变化分别在24小时(p
＝0.002)和48小时(p＝0.109)后显著降低并且在72小时后趋于降低(p＝0.31)(图14a、b和c)。特别是，与安慰剂组相比，在用adrecizumab治疗的患者中，基线机械通气患者的呼吸sofa评分的变化分别在24小时(p＝0.021)、48小时(p＝0.011)和72小时(p＝0.066)后显著降低(图15a、b和c)。这些数据强烈支持nt-adm抗体能够改善具有受损肺功能的危重患者的内皮功能和血管完整性，并表明其适用于covid-19患者。
[0541]
实施例8-bio-adm在具有covid-19的危重患者中的预后价值
[0542]
本研究的目的是确定生物活性肾上腺髓质素(bio-adm)是否可以有助于危重covid-19患者的风险分层和临床管理。
[0543]
8.1.研究人群和数据收集
[0544]
经伦理批准(rwth大学伦理委员会，ek 100/20)后，这项前瞻性观察性研究于2020年3月13日至4月16日在德国亚琛工业大学医院(university hospital rwth aachen,germany)进行。所有患者或其法定代表均提供了书面知情同意书。sars-cov-2pcr结果阳性和入住icu的所有患者纳入本研究。排除标准是年龄《18岁、怀孕和姑息护理。使用实时逆转录pcr(rt-pcr)进行分析。患者的治疗遵循我们icu的护理标准，包括机械通气、静脉-静脉ecmo(veno-venous ecmo)，以及必要时的rrt和去甲肾上腺素。使用静脉-静脉ecmo治疗的决定是基于最近发布的体外生命支持组织(elso)共识指南(bartlett等人,2020.asaio journal 66:472-474)。从患者数据管理系统(intellispace critical care and anesthesia(icca)system，飞利浦，荷兰)中提取了所有参数，包括人口统计学、生命体征、实验室值、血气分析和器官支持。
[0545]
8.2.bio-adm测量
[0546]
在入院当天和每天采集血液样品，直到第7天，用于分析bio-adm和标准实验室参数。使用一步发光夹心免疫测定法在edta血浆中测量bio-adm(weber等人,2017.jalm2(2):222-233)。简而言之，在包被有针对中段bio-adm的单克隆抗体的微量滴定板中，将100μl样品与150μl针对bio-adm的c端的检测抗体在室温下搅拌温育一小时。合成的人bio-adm用作校准物。洗涤后，在微量滴定板发光读数器(centro lb960,berthold technologies，德国巴登-符腾堡)中测量化学发光信号。所述测定法的检测下限为3pg/ml。在200名健康个体的参考人群中，中位(第99个百分位数)bio-adm水平为20.7pg/ml(43pg/ml)(marino等人,2014.critical care 18:r34)。
[0547]
8.3.统计学
[0548]
值表示为中位数和四分位距(iqr)，或计数和百分比，视情况而定。使用kruskal-wallis检验进行连续变量的组比较。分类数据使用计数数据的pearson卡方检验进行比较。生物标志物数据进行了对数转换。箱线图用于说明bio-adm在分类变量中的差异。cox比例风险回归用于在单变量分析中分析(对数转换的)bio-adm对存活率的影响。检验了比例风险假设。通过模型似然比卡方统计量评估模型的预测值。一致性指数(c指数)作为效果度量给出。它等效于二元结果采用的auc概念。通过kaplan-meier方法绘制的存活曲线用于说明目的。所有统计检验都是双尾的并且双侧p值为0.05被认为是显著性的。使用r版本3.4.3(http://www.r-project.org,library rms,hmisc,rocr)和社会科学统计软件包(statistical package for the social sciences，spss)版本22.0(spss公司，美国伊利诺伊州芝加哥)进行统计分析。
[0549]
8.4.结果
[0550]
在这项群组研究中，53名covid-19患者在确诊sars-cov-2感染和需要入住icu后连续纳入(n＝40名男性[76％]，中位[iqr]年龄62[57-70]岁)(表7)。中位icu停留时长为16(7.5-20)天。32名患者(60％)在第28天之前从icu转出到正常病房，而8名患者(15％)留在icu并且13名患者(25％)死亡。全身炎症标志物示于表7中。
[0551]
表7. 53名covid-19危重患者的基线特征
[0552][0553][0554]
[0555][0556][0557][0558]
变量以中位数[四分位距]或数字(％)的形式给出。ards，急性呼吸窘迫综合征；bio-adm，生物活性肾上腺髓质素；copd，慢性阻塞性肺病；crp，c反应蛋白；ecmo，体外膜氧合；fio2，吸入氧气分数；icu，重症监护病房；il-6，白细胞介素-6；pco2，二氧化碳分压；pct，降钙素原；peep，呼气末正压；po2，氧气分压；rrt，肾脏替代疗法；spo2，外周毛细血管氧饱和度；sofa，序贯器官衰竭评估；wbc，白细胞计数
[0559]
高比例的38名患者(72％)呈现中度或重度ards(25％中度，47％重度)。bio-adm水平随着ards的严重程度而增加(p《.001，与无ards的患者相比，无ards、轻度ards、中度ards或重度ards的bio-adm分别为28.3[19.9-28.4]、39.0[29.2-54.5]、48.1[26.9-79.8]和101.9[67.0-201.1]pg/ml)(图16)。
[0560]
大多数患者(n＝44)在icu停留期间接受了有创通气(表7)。与自主呼吸患者相比，有创通气患者中的bio-adm水平显著增加(68.2[45.5-106.6]pg/ml对比31.8[18.6-48.4]pg/ml，p＝0.006)(图17a)。值得注意的是，与在研究期间适时需要机械通气的患者(n＝6)相比，入组时接受有创通气的患者(n＝38)的bio-adm水平类似地升高(69.8[44.1-107.3]pg/ml对比63.2[51.0-88.7]pg/ml)。
[0561]
与未接受ecmo治疗的患者相比，在用静脉-静脉ecmo治疗的患者(n＝9)中观察到
bio-adm水平升高(101.9[65.0-144.1]pg/ml对比53.3[29.2-91.0]pg/ml，p＝0.040)(图17b)。值得注意的是，在根据elso共识指南(bartlett等人,2020.asaio journal66:472-474)因呼吸衰竭的严重程度而符合ecmo治疗条件、但由于个别患者法令未接受ecmo治疗的患者(n＝7)中观察到最高的bio-adm水平(262.1[136.1-274.6]pg/ml，p《.001)(图17b)。此外，bio-adm水平与去甲肾上腺素的剂量显著相关(r＝0.47，p《0.001)。没有用去甲肾上腺素的患者的bio-adm水平最低(n＝15，中位数37.9pg/ml)，使用低剂量去甲肾上腺素(高达0.1μg/kg/min，n＝15)的患者的bio-adm水平略有升高(中位数53.8pg/ml)，而使用高剂量去甲肾上腺素(》0.1μg/kg/min，n＝23)的患者的bio-adm水平最高(中位数105.9pg/ml，p＝0.002)。
[0562]
在肾功能方面，bio-adm与血清肌酐之间存在显著相关性(r＝0.62，p《0.001)。与此相符，与未接受rrt的患者(n＝26)相比，在接受rrt的患者(n＝27)中的bio-adm水平显著升高(101.9[67.7-182.9]pg/ml对比40.2[27.2-53.5]pg/ml，p《0.001)(图17c)。
[0563]
非存活者(n＝13)的bio-adm水平高于存活者(n＝40)(107.6[51.0-262.1]pg/ml对比53.3[29.2-91.0]pg/ml，p＝0.010)。值得注意的是，bio-adm预测28天死亡率(c指数0.72，95％置信区间[ci]0.56-0.87，p《0.001)(图18a)。
[0564]
我们接下来阐明了bio-adm连续测量在预测28天死亡率方面的额外价值。根据之前的研究(mebazaa等人,2018.critical care22:354)，我们对bio-adm应用了70pg/ml的截止值，并对患者进行了相应分组。入组时呈现bio-adm水平高于70pg/ml(高)并保持在该值以上(高-高)的患者显示出最差的结果，而在48h内改善的患者(高-低)显示出有利的结果。同样，在48h显示bio-adm增加的患者(低-高)显示出不利的结果(图18b)。
[0565]
总之，bio-adm血浆水平与疾病严重程度、体外器官辅助的需求相关，并且结果突出bio-adm在covid-19患者的早期风险分层和管理中的有前景价值。此外，所述数据清楚地突出了内皮功能障碍在covid-19病理生理学中的作用，并为未来的随机试验开辟了道路，这些试验前瞻性地评价bio-adm作为风险分层和监测covid-19患者的新型客观工具。
附图说明
[0566]
图1a：
[0567]
抗体形式的说明-fv和scfv变体。
[0568]
图1b：
[0569]
抗体形式的说明-异源融合体和双功能抗体。
[0570]
图1c：
[0571]
抗体形式的说明-二价抗体和双特异性抗体。
[0572]
图2：
[0573]
a：人adm的剂量反应曲线。将最大camp刺激调整为100％激活。
[0574]
b：在5.63nm hadm存在下人adm 22-52(adm受体拮抗剂)的剂量/抑制曲线。
[0575]
c：在5.63nm hadm存在下ct-h的剂量/抑制曲线。
[0576]
d：在5.63nm hadm存在下mr-h的剂量/抑制曲线。
[0577]
e：在5.63nm hadm存在下nt-h的剂量/抑制曲线。
[0578]
f：小鼠adm的剂量反应曲线。将最大camp刺激调整为100％激活。
[0579]
g：在0.67nm madm存在下人adm 22-52(adm受体拮抗剂)的剂量/抑制曲线。
[0580]
h：在0.67nm madm存在下ct-m的剂量/抑制曲线。
[0581]
i：在0.67nm madm存在下mr-m的剂量/抑制曲线。
[0582]
j：在0.67nm madm存在下nt-m的剂量/抑制曲线。
[0583]
k：显示了f(ab)2nt-m和fab nt-m对adm的抑制作用。
[0584]
l：显示了f(ab)2nt-m和fab nt-m对adm的抑制作用。
[0585]
图3：
[0586]
该图显示了典型的hadm剂量/信号曲线。以及在100μg/ml抗体nt-h存在下的hadm剂量信号曲线。
[0587]
图4：
[0588]
该图显示了在不存在和存在nt-h抗体的情况下hadm在人血浆(柠檬酸盐)中的稳定性。
[0589]
图5：
[0590]
fab与同源人框架序列的比对。
[0591]
图6：在不同剂量的nt-h施用长达60天后，健康人受试者中的adm浓度。
[0592]
图7：horovitz指数《170和基线机械通气的患者(n＝48)的28天死亡率
[0593]
图8：horovitz指数《170和基线机械通气患者(n＝48)分别在24小时(a)、48小时(b)和72小时(c)后的horovitz指数变化。
[0594]
图9：horovitz指数《170和基线机械通气患者(n＝48)分别在24小时(a)、48小时(b)和72小时(c)后的sofa评分变化。
[0595]
图10：ali/ards患者(n＝80)分别在24小时(a)、48小时(b)和72小时(c)后sofa评分的变化。
[0596]
图11：ali/ards患者(n＝80)分别在24小时(a)和48小时(b)后呼吸sofa评分的变化。
[0597]
图12：基线机械通气患者(n＝161)的28天死亡率。
[0598]
图13：基线机械通气患者(n＝161)分别在24小时(a)、48小时(b)和72小时(c)后的horovitz指数变化。
[0599]
图14：基线机械通气患者(n＝161)分别在24小时(a)、48小时(b)和72小时(c)后的sofa评分变化。
[0600]
图15：基线机械通气患者(n＝161)分别在24小时(a)、48小时(b)和72小时(c)后的呼吸sofa评分变化。
[0601]
图16：53名covid-19患者基于ards的bio-adm的箱线图(p《0.001)。水平线为70pg/ml。
[0602]
图17：53名covid-19患者基于有创通气(a，p＝0.006)、ecmo(b，p《0.001)和rrt(c，p《0.001)的bio-adm水平的箱线图。水平线为70pg/ml。符合ecmo治疗标准但未接受ecmo治疗的患者称为“显示需要治疗”。
[0603]
图18：bio-adm的28天死亡率的kaplan-meier图。(a)曲线由bio-adm四分位数绘制(对于连续bio-adm：标准化hr 3.5(95％ci1.6-7.5)、c指数0.72(95％ci 0.56-0.87)，p《0.001)。(b)绘制曲线以说明bio-adm连续测量的潜在价值，入组和48h时》或《70pg/ml(右，p
＝n.s.)。入组时bio-adm高于70pg/ml且仍高于该值的患者(高-高)具有最差的结果，而48h内改善的患者(高-低)具有有利的结果。同样，显示bio-adm增加的患者(低-高)具有不利的结果。在48h缺少bio-adm数据的患者仍处于其初始类别中。
[0604]
序列
[0605]
seq id no.:1
[0606]
gytfsryw
[0607]
seq id no.:2
[0608]
ilpgsgst
[0609]
seq id no.:3
[0610]
tegyeydgfdy
[0611]
seq id no.:4
[0612]
qsivysngnty
[0613]
序列“rvs”(并非序列表的一部分)：
[0614]
rvs
[0615]
seq id no.:5
[0616]
fqgshipyt
[0617]
seq id no.:6(am-vh-c)
[0618]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0619]
seq id no.:7(am-vh1)
[0620]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0621]
seq id no.:8(am-vh2-e40)
[0622]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0623]
seq id no.:9(am-vh3-t26-e55)
[0624]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0625]
seq id no.:10(am-vh4-t26-e40-e55)
[0626]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk
[0627]
seq id no.:11(am-vl-c)
[0628]
dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfyp
reakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0629]
seq id no.:12(am-vl1)
[0630]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0631]
seq id no.:13(am-vl2-e40)
[0632]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0633]
seq id no.:14(人类adm 1-21)
[0634]
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc
[0635]
seq id no.:15(人类adm 21-32)
[0636]
ctvqklahqiyq
[0637]
seq id no.:16(人类adm c-42-52)
[0638]
caprskispqgy-conh2[0639]
seq id no.:17(鼠类adm 1-19)
[0640]
yrqsmnqgsrsngcrfgtc
[0641]
seq id no.:18(鼠类adm 19-31)
[0642]
ctfqklahqiyq
[0643]
seq id no.:19(鼠类adm c-40-50)
[0644]
caprnkispqgy-conh2[0645]
seq id no.:20(成熟人类肾上腺髓质素(成熟adm)；酰胺化adm；bio-adm)：氨基酸1-52或pro-adm的氨基酸95-146
[0646]
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtctvqklahqiyqftdkdkdnvaprskispqgy-conh2[0647]
seq id no.:21(肾上腺髓质素1-52-gly(adm 1-52-gly)：preproadm的氨基酸95-147)
[0648]
yrqsmn nfqglrsfgc rfgtctvqkl ahqiyqftdk dkdnvaprsk ispqgyg
[0649]
seq id no.:22(鼠类adm 1-50)
[0650]
yrqsmnqgsrsngcrfgtctfqklahqiyqltdkdkdgmaprnkispqgy-conh2[0651]
seq id no.:23(人类adm的1-42)：
[0652]
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtctvqklahqiyqftdkdkdnva
[0653]
seq id no.:24(人类adm的aa 43-52)
[0654]
prskispqgy-nh2[0655]
seq id no.:25(人类adm的aa 1-14)
[0656]
yrqsmnnfqglrsf
[0657]
seq id no.:26(人类adm的aa 1-10)
[0658]
yrqsmnnfqg
[0659]
seq id no.:27(人类adm的aa 1-6)
[0660]
yrqsmn
[0661]
seq id no.:28(人类adm的aa 1-32)
[0662]
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtctvqklahqiyq
[0663]
seq id no.:29(aa 1-40，鼠类adm)
[0664]
yrqsmnqgsrsngcrfgtctfqklahqiyqltdkdkdgma
[0665]
seq id no.:30(aa 1-31，鼠类adm)
[0666]
yrqsmnqgsrsngcrfgtctfqklahqiyql
[0667]
seq id no.:31(proadm：164个氨基酸(preproadm的22-185))
[0668]
arldvasef rkkwnkwals rgkrelrmss syptgladvk agpaqtlirp qdmkgasrsp edsspdaari rvkryrqsmn nfqglrsfgc rfgtctvqkl ahqiyqftdk dkdnvaprsk ispqgygrrr rrslpeagpg rtlvsskpqa hgapappsgs aphfl
[0669]
seq id no.:32(肾上腺髓质素原n-20端肽，pamp：preproadm的氨基酸22-41)
[0670]
arldvasef rkkwnkwals r
[0671]
seq id no.:33(中段肾上腺髓质素原，mr-proadm：preproadm的氨基酸45-92)
[0672]
elrmss syptgladvk agpaqtlirp qdmkgasrsp edsspdaari rv
[0673]
seq id no.:34(c端肾上腺髓质素原，ct-proadm：preproadm的氨基酸148-185)
[0674]
rrr rrslpeagpg rtlvsskpqa hgapappsgs aphfl
[0675]
seq id no.:35(重链，ham8101)
[0676]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0677]
seq id no.:36(轻链，ham 8101)
[0678]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0679]
seq id no.:37-ighv1-69*11
[0680]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssyaiswvrqapgqglewmgriipilgtanyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycaryyyyygmdvwgqgttvtvss
[0681]
seq id no.38:-hb3
[0682]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvss

技术特征：
1.一种在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)诊断或预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功或者(d)治疗指导或治疗分层或者(e)患者管理的方法，所述方法包括：
·
测定所述患者的体液样品中的肾上腺髓质素原(seq id no.31)或其片段的水平，
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与预定阈值或与肾上腺髓质素原或其片段的先前测量水平进行比较，以及
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述危及生命的恶化或不良事件的风险相关联，或
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述严重程度相关联，或
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述治疗或干预的成功相关联，或
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与某种治疗或干预相关联，或
·
将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述患者的管理相关联，其中所述肾上腺髓质素原或其片段选自pamp(seq id no.32)、mr-proadm(seq id no.33)、adm-nh2(seq id no.20)、adm-gly(seq id no.21)和ct-proadm(seq id no.34)。2.根据权利要求1所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述冠状病毒选自sars-cov-1、sars-cov-2、mers-cov，特别是sars-cov-2。3.根据权利要求1或2所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述不良事件选自死亡、器官功能障碍、休克。4.根据权利要求1至3所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平高于预定阈值。5.根据权利要求1至4所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述患者的d-二聚体水平等于或大于0.5μg/ml，优选等于或大于1.0μg/ml。6.根据权利要求1至5所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平通过使所述体液样品与特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂接触来测定。7.根据实施方式1至6所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述测定包括使用特异性结合于肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非igg支架。8.根据权利要求1至7所述的在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，其中所述患者用抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架治疗，其中所述抗adm抗体或抗adm片段或抗adm非ig支架结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端和/或中段部分(aa 1-42)：
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtctvqklahqiyqftdkdkdnva(seq id no.23)。9.一种用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架。10.根据权利要求9所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述冠状病毒选自sars-cov-1、sars-cov-2、mers-cov，特别是sars-cov-2。11.根据权利要求9或10所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中当通过根据权利要求1至8中任一项所述的方法测定时，在所述受试者的体液样品中，所述患者的肾上腺髓质素原或其片段的水平高于预定阈值或高于肾上腺髓质素原的先前测量水平。12.根据权利要求9至11所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者的d-二聚体水平等于或大于0.5μg/ml，优选等于或大于1.0μg/ml。13.根据权利要求9至12所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗adm抗体或抗adm片段或抗adm非ig支架结合于adm-gly和/或adm-nh2的n端(氨基酸1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.14)。14.根据权利要求9至13所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体是单克隆抗体或单克隆抗体片段。15.根据权利要求14所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中重链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：cdr1:seq id no:1gytfsrywcdr2:seq id no:2ilpgsgstcdr3:seq id no:3tegyeydgfdy并且轻链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：cdr1:seq id no:4qsivysngntycdr2:rvscdr3:seq id no:5fqgshipyt。16.根据权利要求15所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段包含选自以下的序列或分别与以下各序列具有>80％同一性的序列作为vh区：
seq id no:6(am-vh-c)qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkseq id no:7(am-vh1)qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkseq id no:8(am-vh2-e40)qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkseq id no:9(am-vh3-t26-e55)qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkseq id no:10(am-vh4-t26-e40-e55)qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk，并且包含选自以下的序列或与以下各序列具有>80％同一性的序列作为vl区：seq id no:11(am-vl-c)dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecseq id no:12(am-vl1)dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecseq id no:13(am-vl2-e40)dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。17.根据权利要求15至16中任一项所述的用于治疗或干预感染冠状病毒的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段包含以下序列或与其具有>95％同一性的序列作为重链：seq id no:35qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtita
dtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk，并且包含以下序列或与其具有>95％同一性的序列作为轻链：seq id no:36dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。18.一种用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架。19.根据权利要求18所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者的horowitz指数低于300，特别是低于200，特别是低于100和/或所述患者需要机械通气。20.根据权利要求18或19所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中当通过根据权利要求1至8中任一项所述的方法测定时，在所述受试者的体液样品中，所述患者的肾上腺髓质素原或其片段的水平高于预定阈值或高于肾上腺髓质素原的先前测量水平。21.根据权利要求18至20所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中重链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：cdr1:seq id no:1gytfsrywcdr2:seq id no:2ilpgsgstcdr3:seq id no:3tegyeydgfdy并且轻链中的互补决定区(cdr)包含以下序列：cdr1:seq id no:4qsivysngntycdr2:rvscdr3:seq id no:5fqgshipyt。22.根据权利要求21所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所
述抗体或片段包含选自以下的序列或分别与以下各序列具有>80％同一性的序列作为vh区：seq id no:6(am-vh-c)qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkseq id no:7(am-vh1)qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkseq id no:8(am-vh2-e40)qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkseq id no:9(am-vh3-t26-e55)qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkseq id no:10(am-vh4-t26-e40-e55)qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepk，并且包含选自以下的序列或与以下各序列具有>80％同一性的序列作为vl区：seq id no:11(am-vl-c)dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecseq id no:12(am-vl1)dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecseq id no:13(am-vl2-e40)dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。23.根据权利要求21至22中任一项所述的用于治疗或干预具有受损肺功能和/或急性呼吸窘迫综合征(ards)的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段包含以下序列或与其具有>95％同一性的序列作为重链：
seq id no:35qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk，并且包含以下序列或与其具有>95％同一性的序列作为轻链：seq id no:36dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。

技术总结
本发明的主题是一种在感染冠状病毒的患者中用于(a)诊断或预测危及生命的恶化或不良事件的风险或者(b)预后严重程度或者(c)预测或监测治疗或干预的成功的方法，所述方法包括：-测定所述患者的体液样品中的肾上腺髓质素原(SEQ ID No.31)或其片段的水平，-将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与预定阈值或肾上腺髓质素原或其片段的先前水平进行比较，以及-将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述危及生命的恶化或不良事件的风险相关联，或-将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述严重程度相关联，或-将所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述治疗或干预的成功相关联，其中所述肾上腺髓质素原或其片段选自PAMP(SEQ ID No.32)、MR-proADM(SEQ IDNo.33)、ADM-NH2(SEQ ID No.20)、ADM-Gly(SEQ ID No.21)和CT-proADM(SEQ ID No.34)。本发明的主题是一种抗肾上腺髓质素(ADM)抗体或抗ADM抗体片段或抗ADM非Ig支架，其用于在感染冠状病毒的患者中治疗或干预患者。病毒的患者中治疗或干预患者。


技术研发人员：安德烈亚斯
受保护的技术使用者：思芬构技术有限公司
技术研发日：2021.03.15
技术公布日：2022/11/1