＝(胁迫后测定值/对照测定值)*100％；总叶绿素含量耐低温系数x2＝(胁迫后测定值/对照测定值)*100％；根尖数耐低温系数x3＝(胁迫后测定值/对照测定值)*100％；
11.(5)计算耐低温性综合评价值＝0.220+0.090x1+0.580x2+0.095x3；耐低温性综合评价值评分越高，且x1、x2和x3均不为零时，为越耐低温品种。
12.本发明步骤(1)剪取园林小菊的插穗可以按照本领域的常规方法，在一种具体的实例中，剪取园林小菊8～10cm的顶梢为插穗，留上部2～3片叶，扦插于穴盘中。
13.本发明步骤(2)的园林小菊生长期是指扦插后26～28天。
14.本发明步骤(2)测定园林小菊插穗根总表面积和根尖数可以按照本领域常用的根系扫描系统，例如根系表型分析系统gxy-a、根系表型分析软件win-rhizo等根系扫描分析软件。
15.本发明步骤(3)测定园林小菊插穗总叶绿素含量可以按照本领域的常规方法，为了使测定结果更具统一和准确性，本技术提供一种具体的测定方法：分别取胁迫组和对照组的待测园林小菊鲜样，洗净表面污物，剪碎混匀，各称取剪碎鲜样0.1g，共3份，分别置于10ml离心管中；每个离心管中加入5ml 95％的乙醇，使样品完全浸泡在乙醇溶液中；置于暗处浸泡24h后，将叶绿素提取液倒入比色皿中，以95％乙醇溶液作为对照并进行调零，测定波长665nm和649nm下的吸光度。
16.本发明步骤(5)耐低温性综合评价值评分越高，为越耐低温品种，通常当评分≥0.85时，为耐低温园林小菊品种，即在10℃～25℃的温度下扦插均能够生长的品种。
17.在一些实施例中，本发明所述的园林小菊具体为金陵粉玉兰、金陵红荷、金陵礼花、金陵笑靥、金陵一品红或金陵潋滟。
18.本发明相对于现有技术的有益效果：
19.本发明针对高原地区园林小菊耐低温品种的筛选提供了一种简便有效的方法，通过园林小菊2个根系指标和1个光合色素指标的测定，可进行园林小菊低温适应性评价，从而筛选园林小菊的耐低温品种。本发明所述的方法只需通过测定3个指标，就能进行园林小菊耐低温品种的鉴定，不仅鉴定成本低，而且操作简单，十分易于推广。
20.本发明所述的方法，建立了较可靠的综合评价方法，能够有效的筛选出耐扦插期低温品种，为高原地区园林小菊引进和产业具有重要意义。
具体实施方式
21.以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
22.若无特别说明，以下实施例的实验材料如下：由南京农业大学引进的6个园林小菊品种作为试材，分别为金陵潋滟(粉紫)、金陵笑靥(紫色)、金陵一品红(红色)、金陵礼花(复色)、金陵粉玉兰(粉紫色)、金陵红荷(红色)。花期为8月中旬至9月下旬与青海的旅游季有交集。6个园林小菊品种扦插苗定植于青海大学园艺所试验地大棚内，采用随机区组，株行距为40
×
40cm，并且采取相同的常规水肥管理方法。
23.实施例1
24.本发明对引进的6个南京农业大学的园林小菊品种进行耐低温品种筛选，具体供
试材料如表1所示。
25.表1园林小菊品种信息表
[0026][0027]
供试材料于2021年5月定植于青海省农林科学院园艺所试验田，种植株距为40cm，行距为40cm，随机排列，采取相同的常规水肥管理方法。试验选择生长健壮、无病虫害的母株并剪取8～10cm的顶梢为插穗，留上部2～3片叶，扦插于50孔穴盘中，共设2个温度处理：昼/夜15℃/15℃和25℃/20℃，将材料分别置于不同温度条件下，其中以25℃作为对照，每个处理50根插穗。
[0028]
耐低温园林小菊品种的筛选，包含以下步骤：
[0029]
(1)园林小菊根总表面积和根尖数的测定：
[0030]
在园林小菊生长期，通过根系表型分析系统gxy-a测定其根总表面积和其根尖数，根总表面积以cm2为单位，根尖数以根为单位。
[0031]
(2)园林小菊总叶绿素含量的测定：在园林小菊生长期，测定其叶片中的总叶绿素含量：选取各品种在不同温度处理下的顶梢，洗净顶梢表面污物，剪碎混匀后，各称取剪碎鲜样0.1g，共3份，分别置于10ml离心管中。每个离心管中加入5ml 95％的乙醇，使样品完全浸泡在乙醇溶液中。置于暗处浸泡24h后，将叶绿素提取液倒入比色皿中，以95％乙醇溶液作为对照并进行调零，测定波长665nm和649nm下的吸光度。按公式计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素浓度，以此获得组织中色素的含量。(叶绿素a浓度＝13.95a
665-6.88a
649
；叶绿素b浓度＝24.96a
649-7.32a
665
；总叶绿素浓度＝叶绿素a浓度+叶绿素b浓度；叶绿体色素的含量＝(色素浓度*提取液体积)/样品鲜重)
[0032]
(3)计算步骤(1)和步骤(2)测定的指标的耐低温系数α：根总表面积耐低温系数x1＝(胁迫后测定值/对照测定值)*100％；总叶绿素含量耐低温系数x2＝(胁迫后测定值/对照测定值)*100％；根尖数耐低温系数x3＝(胁迫后测定值/对照测定值)*100％。
[0033]
(4)园林小菊低温适应性评价：通过以园林小菊各单项指标的耐低温系数作为自变量建立的最优回归方程进行低温适应性评价，按照以下公式计算：
[0034]
耐低温性综合评价值＝0.220+0.090x1+0.580x2+0.095x3。
[0035]
园林小菊耐低温性状筛选结果如表2所示，耐低温性综合评价值评分(d值)越高，表明材料的耐低温性越强，其中
‘
金陵潋滟’的d值最大，表明该品种耐低温性最强，经验证其评分排序与实际耐低温性相符(孙东雷等，2021)，其中
‘
金陵潋滟’、
‘
金陵红荷’为一类，属高度耐低温类型，是在10℃～25℃的温度下扦插能够生长的品种。
[0036]
表2园林小菊耐低温性综合评价值结果
[0037][0038][0039]
本技术发明人还研究了不同温度下6个园林小菊的形态差异，进一步验证了本技术所述方案的可靠性。
[0040]
实施例1的六个田园小菊品种分别选择生长健壮、无病虫害的母株并剪取8～10cm的顶梢为插穗，留上部2～3片叶，扦插于50孔穴盘中，共设4个温度处理：5℃、10℃、15℃、25℃。将材料分别置于不同温度条件下，每个处理50根插穗，分别于扦插后28d进行采样，观察生根发育情况。
[0041]
结果发现，各品种在正常培养下(25℃)根系均能正常生长；15℃处理下除
‘
金陵礼花’外各品种均生根；在10℃下仅有
‘
金陵红荷’、
‘
金陵潋滟’有根系产生，其余品种均未生根；这也与实施例1所述方法筛选的结果一致，进一步证明本技术所述方法的可靠性。
技术特征：1.一种高原地区耐低温园林小菊品种的筛选方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)剪取园林小菊插穗，扦插于穴盘中，设2个温度进行扦插处理：胁迫组昼/夜15℃/15℃和对照组25℃/20℃；(2)测定园林小菊插穗根总表面积和根尖数：在园林小菊生长期，测定其根总表面积和根尖数，分别以cm2和根为单位；(3)测定园林小菊插穗总叶绿素含量：取待测园林小菊鲜样用乙醇提取叶绿素，将叶绿素提取液倒入比色皿中，以乙醇溶液作为对照并进行调零，测定波长665nm和649nm下的吸光度；按公式计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素浓度，以获得组织中总叶绿素含量；其中：叶绿素a浓度＝13.95a
665-6.88a
649
；叶绿素b浓度＝24.96a
649-7.32a
665
；总叶绿素浓度＝叶绿素a浓度+叶绿素b浓度；叶绿体色素的含量＝(色素浓度*提取液体积)/样品鲜重；(4)计算步骤(2)和步骤(3)测定的指标的耐低温系数：根总表面积耐低温系数x1＝(胁迫后测定值/对照测定值)*100％；总叶绿素含量耐低温系数x2＝(胁迫后测定值/对照测定值)*100％；根尖数耐低温系数x3＝(胁迫后测定值/对照测定值)*100％；(5)计算耐低温性综合评价值＝0.220+0.090x1+0.580x2+0.095x3；耐低温性综合评价值评分越高，且x1、x2和x3均不为零时，为越耐低温品种。2.根据权利要求1所述的耐低温园林小菊品种的筛选方法，其特征在于，步骤(1)剪取园林小菊8～10cm的顶梢为插穗，留上部2～3片叶，扦插于穴盘中。3.根据权利要求1所述的耐低温园林小菊品种的筛选方法，其特征在于，步骤(2)的园林小菊生长期是指扦插后26～28天。4.根据权利要求1所述的耐低温园林小菊品种的筛选方法，其特征在于，步骤(2)测定园林小菊插穗根总表面积和根尖数使用根系扫描系统进行测定。5.根据权利要求4所述的耐低温园林小菊品种的筛选方法，其特征在于，根系扫描系统为根系表型分析系统gxy-a或根系表型分析软件win-rhizo。6.根据权利要求1所述的耐低温园林小菊品种的筛选方法，其特征在于，步骤(3)测定园林小菊插穗总叶绿素含量的方法具体为：分别取胁迫组和对照组的待测园林小菊鲜样，洗净表面污物，剪碎混匀，各称取剪碎鲜样0.1g，共3份，分别置于10ml离心管中；每个离心管中加入5ml 95％的乙醇，使样品完全浸泡在乙醇溶液中；置于暗处浸泡24h后，将叶绿素提取液倒入比色皿中，以95％乙醇溶液作为对照并进行调零，测定波长665nm和649nm下的吸光度。7.根据权利要求1所述的耐低温园林小菊品种的筛选方法，其特征在于，当评分≥0.85时，为耐低温园林小菊品种。8.根据权利要求7所述的耐低温园林小菊品种的筛选方法，其特征在于，耐低温园林小菊品种是指在10℃～25℃的温度下扦插均能够生长的品种。9.根据权利要求1所述的耐低温园林小菊品种的筛选方法，其特征在于，所述的园林小菊具体为金陵粉玉兰、金陵红荷、金陵礼花、金陵笑靥、金陵一品红或金陵潋滟。
技术总结本发明公开了一种耐低温园林小菊品种的筛选方法，所述方法通过园林小菊2个根系指标和1个光合色素指标的测定，可进行园林小菊低温适应性评价，从而筛选园林小菊的耐低温品种。本发明所述的方法只需通过测定3个指标，就能进行园林小菊耐低温品种的鉴定，不仅鉴定成本低，而且操作简单，十分易于推广。十分易于推广。
技术研发人员：田洁 唐有林 钟启文
受保护的技术使用者：青海省农林科学院
技术研发日：2022.07.04
技术公布日：2022/11/1
