1.本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法。
背景技术：2.青霉素钠其化学名称为(2s，5r，6r)-3，3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-甲酸钠盐，分子量为356.38，具体结构式如下所示：
[0003][0004]
现有关于青霉素钠有关物质的研究报道较多。例如专利cn106404953a中公开了一种青霉素皮试冻干粉剂的质量检测方法，采用高效液相色谱法，其中色谱柱采用nova pak c18，5μm，3.9mm
×
150nm；色谱柱温度30℃，流动相流速1.0ml/min，检测波长235nm，进样量20μl，流动相为甲醇-乙腈-水(63:12:25)，进行等度洗脱。该检测方法主要是确保辅料乳糖及甘露醇能与青霉素达到较好的分离，保证青霉素的含量检测，未研究此色谱条件下能否将青霉素有关物质项下的各国药典12个杂质有效分离。
[0005]
此外，青霉素钠及注射用青霉素钠标准在usp药典、ep药典、bp药典、印度药典ip、chp也均已收载。采用原有药典方法检测时发现一些ep杂质无法达到有效分离，且chp2020方法中液相运行时间较长，采用bp/ep药典方法，柱温50℃，导致青霉素在色谱柱中洗脱过程中发生降解(约15分钟～24分钟基线一直上移)，供试品溶液有一较大明显降解未知杂质(保留时间为23.952分钟)，色谱图见图1。
[0006]
此杂质为药典未收载杂质，通过对此杂质进行制备和结构解析，其结构确证和解析结构推测该未知明显降解杂质为青霉素钠水解开环生成开环杂质，开环杂质苯乙酰羰基进攻五元环氨基，进一步脱水生成ep杂质d，ep杂质d异构化生成该杂质。青霉素钠溶液在酸、高温、光照条件下较易生成该杂质，固体状态不易产生。
[0007]
因此，需要完善分析检测方法，以减小青霉素钠在色谱柱流动相中降解程度，更真实、有效、准确的检测青霉素钠有关物质，改变过去样品中本来不含相应杂质，因为分析检测条件的限制在色谱柱中降解产生杂质归为样品杂质的误判现象，更真实反应样品实际质量状况。
技术实现要素：[0008]
本发明要解决的技术问题是：提供一种青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，减小了青霉素钠在色谱柱流动相中降解程度，避免了因分析检测条件的限制，将在色谱柱中降解产生杂质归为样品杂质的误判现象，更真实地反应样品实际质量状况，且缩
短了分析时间，减少了溶剂用量，降低了分析成本。
[0009]
本发明所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，采用超高效液相色谱法，色谱柱为c
18
色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以缓冲盐溶液为流动相a，以乙腈或甲醇为流动相b，梯度洗脱。
[0010]
优选地，所述c
18
色谱柱为ymc c18。
[0011]
优选地，所述色谱柱规格为2.1
×
100mm，1.9μm。
[0012]
优选地，所述流动相a与流动相b的体积比为(100～0):(0～100)；进一步优选地，流动相a与流动相b的体积比为(95～50):(5～50)。
[0013]
优选地，所述梯度洗脱为线性梯度洗脱，洗脱条件为：
[0014]
第一梯度洗脱时间0min，取流动相a占比100～90％，流动相b占比0～10％；
[0015]
第二梯度洗脱时间4.6min，取流动相a占比85～75％，流动相b占比15～25％；
[0016]
第三梯度洗脱时间11.6min，取流动相a占比85～75％，流动相b占比15～25％；
[0017]
第四梯度洗脱时间14.0min，取流动相a占比45～55％，流动相b占比45～55％；
[0018]
第五梯度洗脱时间14.5min，取流动相a占比100～90％，流动相b占比0～10％；
[0019]
第五梯度洗脱时间18.5min，取流动相a占比100～90％，流动相b占比0～10％。
[0020]
进一步优选地，所述梯度洗脱为线性梯度洗脱，洗脱条件为：
[0021]
第一梯度洗脱时间0min，取流动相a占比95％，流动相b占比5％；
[0022]
第二梯度洗脱时间4.6min，取流动相a占比80％，流动相b占比20％；
[0023]
第三梯度洗脱时间11.6min，取流动相a占比80％，流动相b占比20％；
[0024]
第四梯度洗脱时间14.0min，取流动相a占比50％，流动相b占比50％；
[0025]
第五梯度洗脱时间14.5min，取流动相a占比95％，流动相b占比5％；
[0026]
第五梯度洗脱时间18.5min，取流动相a占比95％，流动相b占比5％。
[0027]
优选地，高效液相使用紫外检测器检测，检测波长为210～254nm；进一步优选为225nm。
[0028]
优选地，所述缓冲盐水溶液为磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的混合水溶液，或磷酸氢二钾与磷酸二氢钾的混合水溶液；优选为磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的混合水溶液。
[0029]
优选地，所述缓冲盐水溶液的浓度为0.002～0.02mol/l；进一步优选为0.01mol/l。
[0030]
优选地，流动相流速为0.25～0.35ml/min；进一步优选为0.3ml/min。
[0031]
优选地，色谱柱温度为20～40℃；进一步优选为30℃。
[0032]
优选地，进样量为2～5μl；进一步优选为2.5μl。
[0033]
在一个优选的试验方案中，所述测定方法包括如下步骤：
[0034]
(1)杂质对照品定位溶液配制：
[0035]
杂质a对照品定位溶液：取杂质a，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；
[0036]
杂质b对照品定位溶液：取杂质b，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度20μg/ml的溶液；
[0037]
杂质c对照品定位溶液：取杂质c，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；
[0038]
杂质d对照品定位溶液：取杂质d，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；
[0039]
杂质e对照品定位溶液：取杂质e，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度80μg/ml的溶
液；
[0040]
杂质f对照品定位溶液：取杂质f，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度40μg/ml的溶液；
[0041]
杂质h对照品定位溶液：取杂质h，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；
[0042]
杂质j对照品定位溶液：取杂质j，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；
[0043]
杂质l对照品定位溶液：取杂质l，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；
[0044]
杂质ⅰ对照品定位溶液：取杂质ⅰ，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；
[0045]
杂质ⅱ对照品定位溶液：取杂质ⅱ，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；
[0046]
(2)混合溶液的配制：
[0047]
取杂质a、杂质c、杂质d、杂质h、杂质j、杂质l、杂质ⅰ、杂质ⅱ各1.6mg，精密称定，分置10ml量瓶中，加入甲醇使溶解，并用水稀释至刻度，摇匀；取杂质b 2mg，精密称定，置5ml量瓶中，加入甲醇使溶解，并用水稀释至刻度，摇匀；分别作为杂质a、杂质c、杂质d、杂质h、杂质j、杂质l、杂质ⅰ、杂质ⅱ、杂质b贮备溶液；
[0048]
取青霉素钠40mg、杂质e0.8mg、杂质f0.4mg置同一10ml量瓶中，并精密加入杂质a、杂质c、杂质d、杂质h、杂质j、杂质l、杂质ⅰ、杂质ⅱ、杂质b贮备溶液各0.5ml，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀；
[0049]
(3)系统适用性溶液的配制：
[0050]
取青霉素系统适用性对照品，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度5mg/ml的溶液；
[0051]
(4)供试品溶液的配制：
[0052]
取青霉素钠供试品，加水溶解并稀释制成浓度4mg/ml的溶液；
[0053]
(5)自身对照溶液：
[0054]
精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；
[0055]
(6)采用超高效液相色谱仪分析制得的待测样品，其色谱条件为：色谱柱，ymc c18，2.1
×
100mm，1.9μm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；进样量为2～5μl；检测波长，210～254nm；柱温，20～40℃；流速，0.25～0.35ml/min；以磷酸氢二钠与磷酸二氢钠的混合水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，进行梯度洗脱；
[0056]
记录色谱图，由定位溶液及混合溶液中各杂质的保留时间定性，以加校正因子的自身对照法计算各杂质的含量。
[0057]
优选地，在上述方法中，配制溶液时所用溶剂为水或者体积比为35:65的甲醇与水的混合溶液。
[0058]
各杂质具体如下：
[0059]
杂质a：(2s，5r，6r)-6-氨基-3，3-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸，分子式c8h
12
n2o3s，分子量216.26，结构式：
[0060][0061]
杂质b：苯乙酸，分子式c8h8o2，分子量136.15，结构式：
[0062][0063]
杂质c：(2s，5r，6r)-6-[[(4-羟基苯基)乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸，分子式c
16h18
n2o5s，分子量350.39，结构式：
[0064][0065]
杂质d：(3s，7r，7ar)-5-苯基-2，2-二甲基-2，3，7，7a-四氢咪唑并[5，1-b]噻唑-3，7-二羧酸，分子式c
16h18
n2o4s，分子量334.39，结构式：
[0066][0067]
杂质e：(4s)-2-[羧基[(苯乙酰基)氨基]甲基]-5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸，分子式c
16h20
n2o5s，分子量352.40，结构式：
[0068][0069]
杂质f：(2rs，4s)-2-[[(苯乙酰基)氨基]甲基]-5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸，分子式c
15h20
n2o3s，分子量308.40，结构式：
[0070][0071]
杂质h：(2s,5r,6r)-6-(己酰氨基)3,3-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚烷-2-羧酸钾，分子式c
14h21
kn2o4s，分子量352.09，结构式：
[0072][0073]
杂质j：2-[羧基[(苯乙酰基)氨基]甲基]-3-甲酰基-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸，分子式c
17h20
n2o6s，分子量380.10，结构式：
[0074][0075]
杂质l：2-[羧基[(苯乙酰基)氨基]甲基]-3-[2-[(苯乙酰基)氨基]乙酰基]-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸，分子式c
26h29
n3o7s，分子量527.17，结构式：
[0076][0077]
杂质ⅰ：2-羟基-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸，分子式c6h
14
no3s，分子量177.218，结构式：
[0078][0079]
杂质ⅱ：2-[(苯乙酰基)氨基]-乙酸，分子式c
10h11
no3，分子量193.07，结构式：
[0080][0081]
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
[0082]
(1)本发明提供的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，针对青霉素钠溶液在高温、酸性及碱性条件均不稳定的特性，将流动相调节为中性，降低柱温，采用超高效液相色谱法缩短检测时间，减小了青霉素钠在色谱柱流动相中降解程度，避免了因分析检测条件的限制，将在色谱柱中降解产生杂质归为样品杂质的误判现象，更真实地反应样品实际质量状况，且缩短了分析时间，减少了溶剂用量，降低了分析成本；
[0083]
(2)本发明的测定方法，能够快速有效的检测青霉素钠有关物质，不仅减小青霉素钠在检测过程中降解程度，且各杂质间分离度较佳，系统适用性良好，线性关系良好，精密度高，准确度良好，重复性好，结果更准确真实。
附图说明
[0084]
图1为bp/ep有关物质典型图谱；
[0085]
图2为本发明方法检测空白溶剂图谱；
[0086]
图3为本发明方法检测杂质a定位图谱；
[0087]
图4为本发明方法检测杂质c定位图谱；
[0088]
图5为本发明方法检测杂质d定位图谱；
[0089]
图6为本发明方法检测杂质e定位图谱；
[0090]
图7为本发明方法检测杂质f定位图谱；
[0091]
图8为本发明方法检测杂质h定位图谱；
[0092]
图9为本发明方法检测杂质j定位图谱；
[0093]
图10为本发明方法检测杂质l定位图谱；
[0094]
图11为本发明方法检测杂质ⅰ定位图谱；
[0095]
图12为本发明方法检测杂质ⅱ定位图谱；
[0096]
图13为本发明方法检测混合溶液图谱；
[0097]
图14为本发明方法检测系统适用性图谱；
[0098]
图15为本发明方法检测供试品溶液图谱；
[0099]
图16为本发明方法检测自身对照溶液图谱。
具体实施方式
[0100]
下面结合实施例对本发明做出进一步说明，但本发明的保护范围不仅限于此，该领域专业人员对本发明技术方案所作的改变，均应属于本发明的保护范围内。
[0101]
实施例使用的青霉素钠原料来源于：瑞阳制药股份有限公司，批号892101102。其他试剂如无特别说明，均为市售常规原料。
[0102]
实施例中所使用的测定方法包括：样品的配制、样品的测定和杂质含量计算，具体见表1。
[0103]
表1测定方法
[0104][0105]
实施例1
[0106]
专属性试验：
[0107]
通过进样各杂质定位溶液及含有杂质的混合溶液作为专属性溶液，考察方法的专属性，通过专属性试验确定该潜在杂质在测定条件下相对保留时间、分离度、确定所关注的杂质能被有效分离。
[0108]
专属性试验结果见表2。
[0109]
表2有关物质检查专属性实验结果
[0110][0111]
从表2可以得出结论：青霉素与相邻杂质间的最小分离度为1.283(不得小于1.2)，符合要求，各已知杂质均能有效分离，专属性强。
[0112]
实施例2
[0113]
检测限、定量限试验：
[0114]
取青霉素钠及各杂质对照品适量，采用逐步稀释法，当信噪比s/n≥3时的浓度作为检测限浓度；当信噪s/n≥10的浓度作为定量限浓度，定量限溶液6针保留时间的rsd应不大于1％，峰面积的rsd应不大于10％。
[0115]
检测限、定量限试验结果见表3、表4。
[0116]
表3有关物质检查检测限、定量限试验结果-1
[0117][0118]
表4有关物质检查检测限、定量限试验结果-2
[0119][0120]
[0121]
从表3-4可以得出结论：青霉素及各杂质的定量限最大检出浓度相当于供试品浓度的0.0203％(不大于0.05％)，均符合要求，青霉素及各杂质6针定量限溶液保留时间的rsd最大为0.40％(不大于1％)，峰面积的rsd最大为8.02％(不大于10％)，定量限、检测限良好。
[0122]
实施例3
[0123]
线性与范围试验：
[0124]
方法的线性通过5～8个不同浓度溶液的线性来实现，以测得峰面积对浓度作图，呈现良好的线性(线性相关系数≥0.99)，并同时确定测定的范围。
[0125]
青霉素线性实验结果见表5。
[0126]
表5有关物质检查青霉素线性关系试验结果
[0127][0128][0129]
杂质a线性实验结果见表6。
[0130]
表6有关物质检查杂质a线性关系试验结果
[0131][0132]
杂质b线性实验结果见表7。
[0133]
表7有关物质检查杂质b线性关系试验结果
[0134][0135]
杂质c线性实验结果见表8。
[0136]
表8有关物质检查杂质c线性关系试验结果
[0137][0138][0139]
杂质d线性实验结果见表9。
[0140]
表9有关物质检查杂质d线性关系试验结果
[0141][0142]
杂质e线性实验结果见表10。
[0143]
表10有关物质检查杂质e线性关系试验结果
[0144][0145]
杂质f线性实验结果见表11。
[0146]
表11有关物质检查杂质f线性关系试验结果
[0147][0148]
杂质h线性实验结果见表12。
[0149]
表12有关物质检查杂质f线性关系试验结果
[0150][0151]
杂质j线性实验结果见表13。
[0152]
表13有关物质检查杂质j线性关系试验结果
[0153][0154][0155]
杂质l线性实验结果见表14。
[0156]
表14有关物质检查杂质l线性关系试验结果
[0157][0158]
根据上述线性试验结果，计算测得已知杂质的相对校正因子(f＝k
主
/k
杂质
)，具体结果见表15。
[0159]
表15有关物质检查杂质的校正因子试验结果
[0160]
名称相对校正因子青霉素/杂质a1.4杂质b0.9杂质c0.5杂质d0.8杂质e1.7杂质f1.8杂质h1.9杂质j0.9杂质l0.8
[0161]
从表5-15可以得出结论：青霉素及各杂质的线性与范围的相关系数均大于0.99，线性关系良好。
[0162]
实施例4
[0163]
准确度试验：
[0164]
准确度是指用该方法测定与真实值的接近程度，用回收率表示，通过考察样品中加入不同浓度的杂质的准确度来实现。本法要求各杂质平均回收率在85％-110％范围内；rsd＜10％。
[0165]
各杂质准确度实验结果见表16。
[0166]
表16有关物质检查准确度试验结果
[0167]
名称平均回收率(％)rsd(％)杂质a99.253.37杂质b103.91.01杂质c99.160.98杂质d106.22.06杂质e94.671.03杂质f97.811.37杂质h98.060.89杂质j92.053.25杂质l95.782.24杂质ⅰ96.493.63杂质ⅱ102.52.53
[0168]
从表16可以得出结论：各杂质回收率的平均值均在85％-110％范围内，各杂质回收率的平均值的rsd最大为3.63％(rsd＜10％)，符合要求，准确度良好。
[0169]
实施例5
[0170]
耐用性试验：
[0171]
通过改变不同的色谱条件，系统适用性均符合标准规定，不同条件下有关物质测定结果一致，耐用性良好。
[0172]
不同色谱条件下测得结果见表17。
[0173]
表17有关物质检查耐用性试验结果
[0174]
[0175][0176]
从表17可以得出结论：通过改变不同的色谱条件，系统适用性溶液中杂质e与其异构体的分离度最小为1.391(＞1.2)符合要求，最大单杂检出基本一致，总杂质变化的rsd为6.66％(rsd＜10％)，符合要求。本法耐用性良好。
[0177]
从以上验证结果可以得知，本发明的测定方法，使用中性流动相，降低柱温，缩短检测时间，可以有效的减少青霉素钠在色谱柱中的降解程度，改变了过去样品中本来不含相应杂质，因为分析检测条件的限制在色谱柱中降解产生杂质归为样品杂质的误判现象，能更真实反应样品实际质量状况。而且该方法灵敏度高、专属性强，准确度高，耐用性好、适用性强、结果稳定可靠，从而可用于青霉素钠的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障，填补了利用液相色谱仪检测青霉素钠有关物质的空白。
技术特征：1.一种青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：采用超高效液相色谱法，色谱柱为c
18
色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以缓冲盐溶液为流动相a，以乙腈或甲醇为流动相b，梯度洗脱。2.根据权利要求1所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：所述c
18
色谱柱为ymc c18，色谱柱规格为2.1
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100mm，1.9μm。3.根据权利要求1所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：所述流动相a与流动相b的体积比为(100～0):(0～100)。4.根据权利要求1所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：所述梯度洗脱为线性梯度洗脱，洗脱条件为：第一梯度洗脱时间0min，取流动相a占比100～90％，流动相b占比0～10％；第二梯度洗脱时间4.6min，取流动相a占比85～75％，流动相b占比15～25％；第三梯度洗脱时间11.6min，取流动相a占比85～75％，流动相b占比15～25％；第四梯度洗脱时间14.0min，取流动相a占比45～55％，流动相b占比45～55％；第五梯度洗脱时间14.5min，取流动相a占比100～90％，流动相b占比0～10％；第五梯度洗脱时间18.5min，取流动相a占比100～90％，流动相b占比0～10％。5.根据权利要求4所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：所述梯度洗脱为线性梯度洗脱，洗脱条件为：第一梯度洗脱时间0min，取流动相a占比95％，流动相b占比5％；第二梯度洗脱时间4.6min，取流动相a占比80％，流动相b占比20％；第三梯度洗脱时间11.6min，取流动相a占比80％，流动相b占比20％；第四梯度洗脱时间14.0min，取流动相a占比50％，流动相b占比50％；第五梯度洗脱时间14.5min，取流动相a占比95％，流动相b占比5％；第五梯度洗脱时间18.5min，取流动相a占比95％，流动相b占比5％。6.根据权利要求1所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：高效液相使用紫外检测器检测，检测波长为210～254nm。7.根据权利要求1所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：所述缓冲盐水溶液为磷酸二氢钠与磷酸氢二钠的混合水溶液，或磷酸氢二钾与磷酸二氢钾的混合水溶液；所述缓冲盐水溶液的浓度为0.002～0.02mol/l。8.根据权利要求1所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：超高效液相色谱法的流动相流速为0.25～0.35ml/min。9.根据权利要求1所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：色谱柱温度为20～40℃。10.根据权利要求1所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：超高效液相色谱法的进样量为2～5μl；进一步优选为2.5μl。11.根据权利要求1所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)杂质对照品定位溶液配制：杂质a对照品定位溶液：取杂质a，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；杂质b对照品定位溶液：取杂质b，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度20μg/ml的溶液；
杂质c对照品定位溶液：取杂质c，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；杂质d对照品定位溶液：取杂质d，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；杂质e对照品定位溶液：取杂质e，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度80μg/ml的溶液；杂质f对照品定位溶液：取杂质f，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度40μg/ml的溶液；杂质h对照品定位溶液：取杂质h，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；杂质j对照品定位溶液：取杂质j，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；杂质l对照品定位溶液：取杂质l，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；杂质ⅰ对照品定位溶液：取杂质ⅰ，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；杂质ⅱ对照品定位溶液：取杂质ⅱ，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度8μg/ml的溶液；(2)混合溶液的配制：取杂质a、杂质c、杂质d、杂质h、杂质j、杂质l、杂质ⅰ、杂质ⅱ各1.6mg，精密称定，分置10ml量瓶中，加入甲醇使溶解，并用水稀释至刻度，摇匀；取杂质b 2mg，精密称定，置5ml量瓶中，加入甲醇使溶解，并用水稀释至刻度，摇匀；分别作为杂质a、杂质c、杂质d、杂质h、杂质j、杂质l、杂质ⅰ、杂质ⅱ、杂质b贮备溶液；取青霉素钠40mg、杂质e0.8mg、杂质f0.4mg置同一10ml量瓶中，并精密加入杂质a、杂质c、杂质d、杂质h、杂质j、杂质l、杂质ⅰ、杂质ⅱ、杂质b贮备溶液各0.5ml，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀；(3)系统适用性溶液的配制：取青霉素系统适用性对照品，加甲醇溶解并用水稀释制成浓度5mg/ml的溶液；(4)供试品溶液的配制：取青霉素钠供试品，加水溶解并稀释制成浓度4mg/ml的溶液；(5)自身对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；(6)采用超高效液相色谱仪分析制得的待测样品，其色谱条件为：色谱柱，ymc c18，2.1
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100mm，1.9μm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；进样量为2～5μl；检测波长，210～254nm；柱温，20～40℃；流速，0.25～0.35ml/min；以磷酸氢二钠与磷酸二氢钠的混合水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，进行梯度洗脱；记录色谱图，由定位溶液及混合溶液中各杂质的保留时间定性，以加校正因子的自身对照法计算各杂质的含量。
技术总结本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法。所述的青霉素钠有关物质的超高效液相色谱法测定方法，采用超高效液相色谱法，色谱柱为C
技术研发人员：苗得足 胡清文 王芳 郑海香 孟秀芬 付鹏 王向华 刘德杰 杨书华
受保护的技术使用者：瑞阳制药股份有限公司
技术研发日：2022.07.11
技术公布日：2022/11/1
