一种延缓心肌细胞衰老的益气活血养阴药物组合的制备方法及应用
1.本技术是申请日为2021年05月19日，申请号为cn202110542863.1，发明名称为具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物及其制备方法和用途的分案申请。
技术领域
2.本发明涉及医药领域，具体涉及中药组合物，尤其涉及一种延缓心肌细胞衰老的益气活血养阴药物组合的制备方法及应用。
背景技术：3.衰老是机体随着年龄的不断增长所呈现的一系列细胞、组织及器官等的退化现象，是多种慢性疾病的独立危险因素。心脏是机体非常重要的器官，随着年龄的增长，心肌细胞受到越来越多的损伤，衰老的心肌细胞会导致心脏出现结构和功能的变化，继而引发心血管疾病的发生，严重导致死亡。如何延缓心肌细胞衰老已成为老年人心血管疾病目前亟待解决的问题。
4.中医认为，随年龄增长，人体不断耗伤气阴，生理功能逐渐减退，脏腑虚损，气化失司，气虚无以行血，以致瘀血内停、脉络不通，引起机体整体功能障碍，加速衰老。衰老病机可理解为气阴两虚、瘀血阻滞，治当补虚泻实、标本兼顾，以益气滋阴活血为主要治则。有研究报道，益气、活血和养阴中药可通过抑制氧化应激、减轻炎症反应、保护线粒体功能、改善细胞增殖活性等多靶点、多途径地发挥延缓心肌细胞衰老作用，彰显了益气、活血和养阴中药在心肌衰老防治中的广阔前景。因此，很有必要基于此理论，研究一种延缓心肌细胞衰老的中药组合物，解决上述发生的问题。
5.例如，cn110452948a公开了鹿心蛋白水解物及其制备方法和应用，制备方法包括以下步骤：前处理：取鹿心制得酶解原液；酶解得酶解液；纯化取3kd-15kd的多肽，即得。经实验证实所得鹿心蛋白水解物对缓解心肌细胞衰老具有较好的活性。
6.再例如，cn105125613a公开了一种三七和淫羊藿提取物的混合制剂的应用，所述的三七提取物为三七总皂苷，所述的淫羊藿的提取物为淫羊藿总黄酮，且三七总皂苷与淫羊藿总黄酮的重量比为0.2-5：1。进而得出tpns与tfe可通过调节线粒体结构与功能进而延缓h9c2心肌细胞衰老的作用机制。
7.目前仍需要开发一种中药制剂，尤其是用于延缓心肌细胞衰老的中药组合物以及基于该中药组合物的制备方法。
技术实现要素：8.为解决现有技术中的至少部分技术问题，本发明提供延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物及其制备方法和用途。基于中药有效组分的科学配伍，发明人经过深入研究发现，本发明的中药组合物能够通过调控线粒体，尤其是调控端粒酶d-乳糖诱导心肌细胞的衰老的效应机制，并且具有协同效应。具体地，本发明包括以下内容。
9.本发明的第一方面，提供一种具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物，其由活性成分和药用辅料组成，其中，所述活性成分包括：人参、三七、川芎和石斛。
10.根据本发明的具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物，优选地，所述活性成分包括：人参1-12克、三七1-18克、川芎1-24克和石斛1-24克。
11.根据本发明的具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物，优选地，所述药用辅料包括但不限于增溶剂、乳化剂、黏合剂、稳定剂、包衣材料、缓冲剂或增稠剂。
12.本发明的第二方面，提供一种具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物的制备方法，优选地，其包括以下步骤：
13.(1)三七破碎成粗粉，与人参、川芎混合得到混合物，加入乙醇回流分别进行第一次提取和第二次提取，合并提取的滤液，浓缩后减压干燥得到第一提取物，其中第一次提取加入的乙醇和所述混合物的比为10：1，第二次加入的乙醇和所述混合物的比为8：1；
14.(2)将石斛加水分别进行第一次煎煮和第二次煎煮，合并滤液，浓缩后减压干燥得到第二提取物，其中，第一次煎煮加入的水和所述石斛的比为10：1，第二次煎煮加入的水和所述石斛的比为10：1；
15.(3)混合第一提取物和第二提取物，得到所述中药组合物。
16.根据本发明的具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物的制备方法，优选地，步骤(1)和步骤(2)的浓缩是指在60℃条件下，浓缩至相对密度为1.20-1.30。
17.根据本发明的具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物的制备方法，优选地，所述提取时间为0.5-4h。
18.本发明的第三方面，提供根据本发明第一方面所述的中药组合物或根据第二方面提供的制备方法得到的中药组合物在调节线粒体功能中的应用。
19.优选地，所述调节是指能够调节mtros水平。
20.优选地，所述调节是指调节线粒体膜电位水平。进一步优选地，所述调节是指提高线粒体膜电位水平。
21.优选地，所述调节是指调节线粒体电子呼吸链活性。进一步优选地，所述调节是指调节线粒体复合体ⅱ、复合体ⅲ、复合体ⅳ、复合体
ⅴ
的活性。还优选地，所述调节是指提高线粒体复合体ⅱ、复合体ⅲ、复合体ⅳ、复合体
ⅴ
的活性。
22.本发明的第四方面，提供根据本发明第一方面所述的中药组合物或根据第二方面提供的制备方法得到的中药组合物在调控端粒和端粒酶干预d-半乳糖诱导心肌细胞衰老中的应用。
23.根据本发明所述的应用，优选地，所述调控是指增加或促进端粒长度和/或端粒酶活性。
24.根据本发明所述的应用，优选地，所述调控是指降低或抑制ages和/或p53标志物的表达。
25.本发明的第五方面，提供第一方面所述的中药组合物在制备具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物制剂中的用途。
26.本发明的第六方面，提供一种用于增加体外心肌细胞端粒长度、提高端粒酶活性的方法，其包括使用根据本发明所述的中药组合物的步骤。
27.本发明的中药组合物基于中药有效活性组分的科学配伍，基于其有效活性组分的
协同作用，其能够通过调控线粒体，尤其是调控端粒酶d-乳糖诱导心肌细胞的衰老的效应机制，进而有效的延缓心肌细胞衰老，同时，本发明的中药组合物组分具有协同效应。另外，通过实验验证，本发明的重要组合物具有较好的延缓心肌细胞衰老效果。
附图说明
28.图1为小鼠心肌组织he染色结果。
29.图2为小鼠心肌组织衰老相关标志物免疫组化检测结果。
30.图3为各组小鼠心脏mtros水平比较。
31.图4为各组小鼠心脏mmp水平比较。
具体实施方式
32.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
33.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
34.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“％”为基于重量的百分数。
35.本领域技术人员可通过已知手段对本发明提取过程中得到的中药提取物的指标成分进行测定，测定方法包括高效液相色谱法(hplc)、质谱法(ms)或气相色谱-质谱联用(gc-ms)法。其中所示指标成分包括人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1、三七皂苷r1和阿魏酸。
36.[中药组合物]
[0037]
本发明的中药组合物(本文有时也称为“本发明的组合物”)由活性成分和药用辅料组成，其中，所述活性成分包括：人参、三七、川芎和石斛。优选地，活性成分包括：人参1-12克、三七1-18克、川芎1-24克和石斛1-24克。还优选地，所述活性成分由人参、三七、川芎和石斛组成。进一步优选地，活性成分由人参1-12克、三七1-18克、川芎1-24克和石斛1-24克组成。
[0038]
优选地，人参为2-10克、三七为2-15克、川芎为3-18克，石斛为3-18克。还优选地，人参为4-8克、三七为5-11克、川芎为8-14克，石斛为8-14克。进一步优选地，人参为5-7克、三七为7-10克、川芎为10-13克，石斛为10-13克。其中，原材料过多或过少均影响延缓心肌细胞衰老的效果，而特定的上述原料配比具有理想的协同效果。
[0039]
药用辅料不特别限定，只要能够用于添加而形成有效、稳定和安全的制剂均可用于本发明的组合物。本发明的中药组合物，其药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些
剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。
[0040]
本发明的中药组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。
[0041]
适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
[0042]
口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。
[0043]
对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。
[0044]
本发明的中药组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素c、edta二钠、edta钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β－环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
[0045]
[制备方法]
[0046]
本发明的中药组合物的制备步骤包括步骤(1)-(3)，需要说明的是，中药原材料的加入顺序以及提取过程对本发明是重要的。首先将三七破碎成粗粉后与人参、川芎，加入乙醇回流提取二次。第一次加10倍量，提取1小时，第二次加8倍量，提取1小时，滤过，合并滤液，并浓缩至相对密度1.20～1.30(60℃)。石斛加水煎煮二次，第一次加10倍量，提取1小时，第二次加8倍量，提取1小时，滤过，合并滤液，浓缩至1.20～1.30(60℃)；将制备得到的干膏合并，粉碎，混匀，制成制剂。
[0047]
本领域技术人员应理解，只要能够实现本发明的目的，在本发明制备方法步骤(1)-(3)前后，或步骤之间还可包含其他步骤或操作，例如进一步优化和/或改善本发明所述的方法。
[0048]
实施例1
[0049]
本实施例为本发明中药组合物的制备例，其包括以下步骤：
[0050]
一、制备中药提取物
[0051]
中药原料：人参940克、三七1410克、川芎1880克、铁皮石斛1880克四味药。
[0052]
(1)三七破碎成粗粉，与人参、川芎等三味，加入70％乙醇回流提取二次，第一次加10倍量，提取1小时，第二次加8倍量，提取1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.20～1.30(60℃)，备用；
[0053]
(2)铁皮石斛加水煎煮二次，第一次加10倍量，提取1小时，第二次加8倍量，提取1小时，滤过，合并滤液，浓缩至1.20～1.30(60℃)，备用；
[0054]
(3)将上述备用稠膏合并，干燥，粉碎，制成制剂。
[0055]
实施例2
[0056]
本实施例为中药提取物的指标成分含量测定，具体如下。
[0057]
(1)人参皂苷rg1、人参皂苷re和人参皂苷rb1的含量测定：
[0058]
对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷rg1对照品、人参皂苷re对照品及人参皂苷rb1对照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，摇匀，即得。
[0059]
供试品溶液的制备：取本提取物粉末约0.6g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，置80℃水浴上保持微沸2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件：色谱柱waterssymmetryrc18(5μm,4.6*250mm)；以流动相a(乙腈)，以流动相b(水)，梯度洗脱0～12分钟，19％a，12～60分钟，19％
→
36％a；检测波长203nm；流速1ml/min；柱温35℃；进样量：对照5μl，供试品10μl。
[0060]
(2)三七皂苷r1的含量测定：
[0061]
对照品溶液的制备：精密称取三七皂苷r1对照品适量，加甲醇制成每1ml含三七皂苷r10.1mg的对照品溶液，即得。
[0062]
供试品溶液的制备：同“人参皂苷rg1、人参皂苷re和人参皂苷rb1”供试品溶液的制备。
[0063]
色谱条件：同“人参皂苷rg1、人参皂苷re和人参皂苷rb1”色谱条件。
[0064]
(3)阿魏酸的含量测定：
[0065]
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
[0066]
供试品溶液的制备：取本提取物粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
[0067]
色谱条件：色谱柱waterssymmetryrc18(5μm,4.6*250mm)；流动相为甲醇-1％醋酸溶液(30：70)；检测波长321nm；流速1ml/min；柱温35℃；进样量10μl。
[0068]
(4)提取物含量测定结果如下表所示：
[0069]
表1-提取物含量测定结果
[0070][0071]
实施例3
[0072]
本实施例为中药组合提取物(实施例1得到)在调控端粒和端粒酶干预d-半乳糖(d-gal)诱导衰老小鼠心肌细胞衰老的效应机制试验。
[0073]
d-gal诱导的亚急性衰老动物模型，结果稳定，简便易行，大剂量持续给予动物d-gal溶剂颈背部注射，可短时间内引起全身多种组织器官病变，与自然衰老类似。d-gal致衰老的机制与氧化应激、端粒缩短、线粒体功能障碍、炎症反应等有关。
[0074]
1.实验材料
[0075]
1.1实验动物
[0076]
8周龄spf级雄性c57bl/6小鼠(动物许可证：scxk(京)2016-006)购自北京维通利华有限公司。于中国中医科学院分笼饲养，室内温度、湿度恒定，循环通风换气，明暗交替周期12/12h。所有动物饲养条件和实验操作流程均严格遵循动物中心福利伦理委员会所提供的操作指南，编号为2020-011。
[0077]
1.2实验药物
[0078]
1.2.1中药组
[0079]
由人参6克，三七9克，川芎12克，石斛12克。按实施例1方法制备而成。
[0080]
1.2.2西药组
[0081]
盐酸二甲双胍，白色粉末，纯度≥98％，购自北京索莱宝科技有限公司，货号：d9351。
[0082]
2.实验方法
[0083]
2.1模型制备、动物分组及给药
[0084]
spf级c57bl/6小鼠适应性喂养4周，小鼠颈背部皮下注射d-gal 150mg/kg/d(g0750，sigma-aldrich)，连续注射8周，得到亚急性衰老模型小鼠，并随机分为模型组、中药组和西药组，每组15只。同周龄c57bl/6小鼠皮下注射生理盐水作为空白对照组。
[0085]
具体用药剂量参照《中药药理研究方法学第3版》，根据60kg成人体重与小鼠的等效剂量计算，中药组灌胃剂量：39g/60kg*9.1/5.99g＝0.988g/kg/d。二甲双胍灌胃剂量为150mg/kg/d。空白组和模型组给予蒸馏水。每只小鼠每日灌胃体积为0.2ml。造模2周后灌胃给药，连续干预6周。
[0086]
3.实验结果
[0087]
3.1 he染色
[0088]
染色具体结果见图1，小鼠心脏病理组织学结果显示，与正常小鼠相比，模型组小鼠心肌细胞间隙增宽、排列紊乱，可见部分心肌纤维断裂溶解，出现不同程度的空炮变性；与模型组相比，中药组和西药组小鼠心肌结果均有不同程度的改善，心肌细胞排布较致密有序，心肌纤维断裂和溶解数量减少。
[0089]
3.2免疫组化法检测衰老相关标志物表达(ages、p53)
[0090]
晚期糖基化终末产物(ages)是人体内的还原糖和蛋白质或脂质发生不可逆反应所形成的，研究表明，ages在人类和动物的多种组织中随着年龄的增长不断的积聚。p53是调节细胞周期的关键蛋白，可加速细胞衰老和心脏老化，进而影响机体整体寿命。因此，ages和p53可作为研究衰老的重要指标。结果如图2所示，结果显示，与正常组比较，d-gal诱导衰老小鼠心肌组织中ages和p53的表达均明显增加；较之模型组，中药组和西药组小鼠心脏组织中ages和p53的表达受到抑制，心肌组织中棕黄色颗粒显著减少。
[0091]
3.3 quantitativereal-timepcr法检测端粒长度和端粒酶活性
[0092]
端粒是位于真核生物线性染色体末端的核蛋白体结构，通过保护染色体末端dna免于损伤而维持基因组的完整性和稳定性，与细胞以及器官的衰老有关。端粒酶是一种位于染色体末端的有逆转录酶活性的核糖核蛋白酶复合体，通过逆转录维持端粒的稳定。二者构成端粒-端粒酶系统，被认为是导致细胞和机体衰老的重要机制。qpcr结果显示，与正常组比较，衰老小鼠心肌组织中端粒长度和端粒酶活性均降低，其中端粒长度减少具有显著差异(p《0.01)。经本发明中药组合物干预后，小鼠心肌组织中端粒和端粒酶的表达均显著增加(p《0.05，p《0.01)，与西药组相比无统计学差异(p》0.05)。具体结果见下表。
[0093]
表2-小鼠心肌组织端粒长度和端粒酶活性结果
[0094][0095]
注：与正常组比较，*p《0.05，**p《0.01；与模型组比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01。
[0096]
3.4线粒体氧化应激活性氧(mtros)
[0097]
线粒体氧化应激活性氧实验结果如图3所示，与空白对照组相比，模型组小鼠心脏组织中的ros含量显著增加(p《0.01)；与模型组相比，中药各组ros含量均减少，但差异没有统计学意义。在图3中，c.空白对照组；m.模型组；e.二甲双胍组；d.中药低剂量组；z.中药中剂量组；g.中药高剂量组。与空白对照组比较，#p《0.05，##p《0.01；与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01。
[0098]
3.5线粒体膜电位(mmp)
[0099]
线粒体膜电位是衡量线粒体功能的重要指标之一，其稳定有助于保证线粒体的正常功能。实验结果如图4所示，与空白对照组相比，模型组红/绿荧光比例显著下降(p《0.01)；与模型组相比，中药低剂量组红/绿荧光比例显著上升(p《0.01)，提示中剂量的益气活血养阴方可以提高线粒体膜电位水平。在图4中，c.空白对照组；m.模型组；e.二甲双胍组；d.中药低剂量组；z.中药中剂量组；g.中药高剂量组。与空白对照组比较，#p《0.05，##p《0.01；与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01。
[0100]
如图3所示，与空白对照组相比，模型组小鼠主动脉组织中的ros含量增加(p《0.05)；与模型组相比，中药高剂量组小鼠主动脉组织中的ros含量减少(p《0.05)。
[0101]
3.6线粒体电子呼吸链活性
[0102]
实验结果如下表所示，与空白对照组相比，模型组小鼠复合体ⅰ的活性显著降低(p《0.01)，复合体ⅱ、复合体ⅲ、复合体ⅳ、复合体
ⅴ
的活性降低(p《0.05)；与模型组相比，二甲双胍组的复合体ⅱ、复合体ⅲ、复合体ⅳ的活性有所升高(p《0.05)，中药低剂量组的复合体ⅲ活性升高(p《0.05)，中药中剂量组复合体ⅱ活性显著升高(p《0.01)、复合体ⅲ、复合体ⅳ的活性有所升高(p《0.05)，中药高剂量组复合体ⅱ活性所升高(p《0.05)。
[0103]
表3-各组小鼠线粒体电子呼吸链活性水平(x
±
s，n＝6)
[0104][0105]
注：与空白对照组比较，#p《0.05，##p《0.01；与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01。
[0106]
4.结论
[0107]
综上所述，本发明中药组合可改善衰老小鼠心肌细胞排布，减少心肌纤维断裂和溶解数量，抑制心肌组织中衰老标记物ages和p53的表达，其机制可能与增加心肌细胞端粒长度、提高端粒酶活性有关。此外，本发明的中药组合物通过调节线粒体功能，尤其是调节mtros水平，提高线粒体膜电位水平以及调节线粒体电子呼吸链活性，进而延缓心肌细胞衰老。
[0108]
尽管已经参考示例性实施方案对本发明进行了描述，但应理解本发明不限于公开的示例性实施方案。在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对示例性实施方案做多种调整或变化。本发明的范围应基于最宽的解释以涵盖所有修改和等同结构与功能。
技术特征：1.一种具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物，其特征在于，由活性成分和药用辅料组成，其中，所述活性成分包括：人参、三七、川芎和石斛。2.根据权利要求1所述的具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物，其特征在于，所述活性成分包括：人参1-12克、三七1-18克、川芎1-24克和石斛1-24克。3.根据权利要求2所述的具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物，其特征在于，所述药用辅料包括但不限于增溶剂、乳化剂、黏合剂、稳定剂、包衣材料、缓冲剂或增稠剂。4.根据权利要求1-3任一项所述的具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)三七破碎成粗粉，与人参、川芎混合得到混合物，加入乙醇回流分别进行第一次提取和第二次提取，合并提取的滤液，浓缩后减压干燥得到第一提取物，其中第一次提取加入的乙醇和所述混合物的比为10：1，第二次加入的乙醇和所述混合物的比为8：1；(2)将石斛加水分别进行第一次煎煮和第二次煎煮，合并滤液，浓缩后减压干燥得到第二提取物，其中，第一次煎煮加入的水和所述石斛的比为10：1，第二次煎煮加入的水和所述石斛的比为10：1；(3)混合第一提取物和第二提取物，得到所述中药组合物。5.根据权利要求4所述的具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)的浓缩是指在60℃条件下，浓缩至相对密度为1.20-1.30，其中，所述提取时间为0.5-4h。6.根据权利要求1-3任一项所述的具有延缓心肌细胞衰老功效的中药组合物在制备用于调节线粒体功能的药物中的应用。7.根据权利要求1-3任一项所述的中药组合物在制备用于调控端粒或端粒酶干预d-半乳糖诱导心肌细胞衰老的药物中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述调控是指增加或促进端粒长度和/或端粒酶活性。9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述调控是指降低或抑制ages和/或p53标志物的表达。10.一种用于增加体外心肌细胞端粒长度、提高端粒酶活性的方法，其特征在于，使用根据权利要求1-3任一项所述的中药组合物的步骤。
技术总结本发明公开一种延缓心肌细胞衰老的益气活血养阴药物组合的制备方法及应用。该组合由活性成分和药用辅料组成，其中，所述活性成分包括：人参、三七、川芎和石斛。本发明的组合物能够调控端粒和端粒酶干预D-半乳糖诱导心肌细胞衰老，尤其是涉及调控AGEs和/或p53标志物的表达。此外，本发明的组合物基于中药有效组分的科学配伍，组分间具有协同作用，进而有效的延缓心肌细胞衰老。的延缓心肌细胞衰老。的延缓心肌细胞衰老。
技术研发人员：王雪 杨静 修成奎 胡艳红 雷燕 刘奕清
受保护的技术使用者：中国中医科学院医学实验中心
技术研发日：2021.05.19
技术公布日：2022/11/1
