1.本发明属于生物技术领域，特别是涉及自发性糖尿病猕猴的血液代谢标志物的筛选及其应用。
背景技术：2.糖尿病以高血糖为特征，是遗传因素和环境因素长期共同作用引起的慢性代谢性疾病。2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,t2dm)占糖尿患者群的90％以上，是糖尿病的最主要类型。国际糖尿病联合会发布数据显示：2019年全球糖尿病患病率为9.3％，2030年将上升到10.2％，2045年将上升到10.9％。随着经济的高速发展，这一数据仍在持续增长。糖尿病不仅降低患者的生活质量，加重家庭经济负担，还会造成国家经济损失，我国每年有超过6000亿人民币的医疗支出和糖尿病相关。糖尿病并发症也已成为非肿瘤疾病死亡的重要原因，因此糖尿病的防控仍面临着极大的挑战。自发性t2dm猕猴能够最大程度模拟人类t2dm的发病特征，因此，自发性t2dm猕猴生物标志物的筛选及应用为建立自发性t2dm的非人灵长类模型以及开展人类t2dm发病机制、病理机制、药物筛选等提供重要前提。
3.糖尿病发病原因非常复杂，而早期糖尿病血糖变化并不明显，单一的血糖检测仅能对糖尿病猕猴进行初步的筛选，且容易出现错筛和漏筛。因此，需要结合更准确的指标对猕猴是否患有糖尿病进行判断。
4.代谢物能体现细胞的凋亡，能量产生及存储等信息。目前，代谢组学技术已被应用于t2dm治疗的许多领域，例如药物治疗t2dm、生物活性的食物成分治疗t2dm、减重手术治疗t2dm及运动治疗t2dm等。但是还没有用代谢组学方法进行猕猴自发性糖尿病快速诊断的方法和产品。
技术实现要素：5.针对现有技术中单一的血糖检测仅能对糖尿病猕猴进行初步的筛选，且容易出现错筛和漏筛等技术问题，本发明通过采集正常猕猴与自发性糖尿病猕猴的血液样本及粪便，利用液相色谱-质谱联用分析的代谢组学方法对样本进行分析进而得到正常猕猴与自发性糖尿病猕猴的差异代谢物，进而辅助诊断t2dm、辅助对t2dm的患病风险或预后状况进行评估或辅助研究t2dm。本发明基于非靶向代谢组以及靶向中长链脂肪酸代谢组检测技术，寻找到了猕猴自发性t2dm相关的代谢物，并对代谢物进行处理、分析进而进行应用。
6.一方面，本发明提供了一种猕猴自发性糖尿病的诊断试剂或者试剂盒，所述诊断试剂或者试剂盒的诊断标志物为肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸中一种或者多种。
7.具体的，所述诊断试剂或者试剂盒的诊断标志物包括肉豆蔻烯酸(myristoleate，c14:1n5)、油酸(oleate，c18:1n9)和棕榈酸(palmitate，c16:0)三种。
8.本发明所述生物标志物来源于粪便或者离体血液样本。
9.更加优选的，本发明所述生物标志物的检出阈值分别是：肉豆蔻烯酸阈值为23.39ug/ml，油酸阈值为0.15ug/ml，棕榈酸阈值为219.41ug/ml。
10.本发明所述糖尿病为猕猴自发性糖尿病。
11.第二方面，本发明还提供了生物标志物肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸中一种或者多种在制备糖尿病辅助产品中的应用，所述糖尿病辅助产品包括辅助诊断2型糖尿病、辅助对2型糖尿病的患病风险或预后状况进行评估或辅助研究2型糖尿病的产品。
12.第三方面，本发明提供了生物标志物肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸中一种或者多种在制备糖尿病检测产品中的应用。
13.具体的，本发明所述检测产品包括2型糖尿病的检测芯片、2型糖尿病的检测试剂或2型糖尿病的检测试剂盒。
14.第四方面，本发明还提供了一种用于评价猕猴自发性糖尿病的组合标志物，所述组合物包括肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸。
15.第五方面，本发明提供了一种猕猴自发性糖尿病的生物标志物筛选方法，所述生物标志物通过基于液相色谱-质谱联用分析的代谢组学方法获得。
16.具体的，本发明猕猴自发性糖尿病的生物标志物筛选方法包括如下步骤：
17.1)自发糖尿病猕猴的初步筛选；
18.2)自发糖尿病猕猴的理化指标检测；
19.3)非靶向代谢组筛选标记物；
20.4)靶向中长链脂肪酸代谢组检测。
21.具体的，本发明所述的自发糖尿病猕猴的初步筛选如下：
22.根据糖尿病诊断标准和三个月内未使用抗生素的要求，记录所选猕猴体长，同时检测待测猕猴空腹血糖值(fasting plasma glucose，fpg)；t2dm组猕猴为1年内3次检测空腹血糖值均满足fpg≥7mmol/l的猕猴，对照组猕猴为1年内3次检测空腹血糖值均满足fpg≤6.1mmol/l的猕猴，将t2dm组猕猴和对照组猕猴分别编号并进行单笼饲养，便于后续采集粪样和血样。
23.具体的，本发明所述的自发糖尿病猕猴的理化指标检测如下：
24.将筛选的猕猴禁食不禁水饲养12h。使用生化管采集猕猴的静脉血液，并在管身注明采样时间、地点、样本编号等信息，然后置于放有冰袋的泡沫盒中运送回实验室。采集的血样立即进行生理生化指标空腹葡萄糖(fpg)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin a1c，hba1c)、空腹胰岛素(fasting plasma insulin，fpi)、总胆固醇(total cholesterol，tc)、甘油三酯(triglycerides，tg)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol，hdl)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol，ldl)的检测，再结合提供的体重数据计算得到实验猕猴的bmi值，具体公式为：
25.体重(kg)/身长(m)226.homa-ir是判断t2dm的标准之一，计算方式为：
27.(fpi
×
fpg)/22.5。
28.具体的，本发明非靶向代谢组筛选标记物包括如下步骤：
29.s1、粪样采集
30.佩戴两层无菌手套(内层为乳胶手套，外层为一次性pe手套)的采样人员采集单笼饲养猕猴排便十分钟内的粪便样品，剥离与接粪盘接触的外层，装入50ml无菌离心管中备用，并在采样管上记录采集时间、地点、样本编号等信息。在采集下一份粪样时，更换新的pe
手套，重复上述采集过程。最后将采集到的所有粪样于-80℃冰箱保存。
31.s2、粪样的处理及分析
32.将储存于-80℃的粪便样品取出置于4℃环境中缓慢解冻，将甲醇、乙腈和水溶液以2：2：1的比例混匀预冷备用，取解冻后样本加入混合液涡旋混合，并依次经过30min的低温超声，10min静置以及20min的离心(14000g，4℃)后取上清液进行色谱-质谱分析。采用agilent 1290infinity lc超高效液相色谱系统(uhplc)hilic色谱柱对上清液进行分离，分离参数为默认程序：0-0.5min，流动相组成为95％乙腈；0.5-7min，乙腈浓度线性下降为65％；7-8min，乙腈浓度线性下降为40％；8-9min，乙腈浓度维持在40％；9-9.1min，乙腈浓度从40％线性增加到95％；9.1-12min，乙腈浓度维持在95％；分离好的样品通过ab triple tof 6600质谱仪采用电喷雾电离(esi)分别对正离子和负离子模式对分离好的样品进行检测得到原始数据。
33.原始数据转换为.mzxml格式后使用xcms软件进行峰对齐、保留时间校正和峰面积提取。经xcms处理后的数据依次进行代谢物结构鉴定、数据预处理和数据质量评估，最后进行数据分析。结合单变量统计分析和多维统计分析筛选差异代谢物，通过聚类分析、相关性分析和kegg通路富集分析展示实验组于对照组代谢水平的差异，挖掘差异代谢物参与的生物过程以及调控通路。
34.s3、差异代谢物的筛选
35.在正、负离子模式下，t2dm组与对照组之间共计检测到14665种代谢物，在正、负离子模式下，t2dm组与对照组的代谢物有明显差异。
36.在t2dm组与对照组之间共计鉴定出1564种代谢物，其中116种为差异代谢物。
37.具体的，本发明所述的靶向中长链脂肪酸代谢组检测分析及标志物阈值确定包括如下步骤：
38.a1、血样采集
39.a2、血样的处理及分析
40.标准品配制
41.将40种脂肪酸甲酯混合标准品溶液制成总浓度分别为0.5mg/l，1mg/l,5mg/l，10mg/l，25mg/l，50mg/l，100mg/l，250mg/l，500mg/l，1000mg/l的十个混合标准品。将25μl浓度为500ppm的正十九酸甲酯作为内标加入500μl混合标准品中混匀后加入进样瓶。以进样量1μl，分流比10:1的标准，分流进样，进入gc-ms检测。然后将血浆样品冰上解冻，取100ul样品以及1ml的氯仿甲醇溶液加入2ml玻璃离心管中，并经过以下流程：超声30min——取上清液——加入2ml 1％的硫酸-甲醇溶液——80℃水浴30min——加1ml的正己烷萃取——加5ml的纯水洗涤——吸取上清液500μl——加入25μl的正十九酸甲酯混匀——加入进样瓶——进入gc-ms检测。
42.样品采用agilent db-wax毛细管柱(30m
×
0.25mm id
×
0.25μm)气相色谱系统进行分离，样本队列中每间隔一定数量的实验样本设置一个qc样本，用于检测和评价系统的稳定性及重复性，再使用agilent 7890/5975c气-质联用仪对样品进行质谱分析。
43.采用msd chemstation软件提取色谱峰面积及保留时间。绘制标准曲线,计算样品中中长链脂肪酸的含量。在使用wilcoxon检验进行差异分析，p value《0.05的代谢物被视为差异代谢物，数据结果均以平均值
±
标准差表示。
44.a3、临界值的确定
45.对筛选到的标志代谢物确定一个诊断的阈值。
46.和现有技术相比，本发明有如下有益效果：
47.本发明提供的猕猴自发性糖尿病生物标志物的筛选方法能够获得高效的生物组合标志物，利用该生物标志物能准确的判断猕猴是否患有糖尿病，进而对人类t2dm发病机制、病理机制、药物筛选等提供重要前提。
48.本发明提供的诊断试剂或者试剂盒中，生物标志物肉豆蔻烯酸(myristoleate，c14:1n5)、油酸(oleate，c18:1n9)和棕榈酸(palmitate，c16:0)灵敏度和特异性高，预测性好，可应用于辅助诊断2型糖尿病、辅助对2型糖尿病的患病风险及预后状况进行评估或辅助研究2型糖尿病等方面，对2型糖尿病的早期检测和预防具有重要的指导意义，可推广，在个体化、灵敏识别、筛查、遗传咨询中具有重要意义。
49.本发明提供的生物标志物肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸中一种或者多种在包括辅助诊断2型糖尿病、辅助对2型糖尿病的患病风险或预后状况进行评估或辅助研究2型糖尿病的糖尿病辅助产品中，在包括2型糖尿病的检测芯片、2型糖尿病的检测试剂或2型糖尿病的检测试剂盒等检测产品中都有广泛的用途。
附图说明
50.图1是正负离子模式下火山图；
51.图2是正负离子模式下pls-da图；
52.图3是正负离子模式下opls-da图
53.图4是kegg信号通路。
具体实施方式
54.以下面结合实例和附图对本发明的具体实施作进一步的说明，旨在说明本发明，而不应视为对本发明的限制。
55.若未特别指出，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，以下实施例所用产品、试剂及材料均为市售产品。
56.实施例1：猕猴自发性糖尿病的生物标志物筛选方法
57.1)自发糖尿病猕猴的初步筛选
58.根据糖尿病诊断标准和三个月内未使用抗生素的要求，记录所选猕猴体长，同时检测待测猕猴空腹血糖值(fastingplasma glucose，fpg)；t2dm组猕猴为1年内3次检测空腹血糖值均满足fpg≥7mmol/l的猕猴，对照组猕猴为1年内3次检测空腹血糖值均满足fpg≤6.1mmol/l的猕猴；符合要求的8只t2dm组猕猴及8只对照组猕猴均由四川省眉山市格林豪斯生物科技有限公司提供且8只t2dm组猕猴和8只对照组猕猴分别编号并进行单笼饲养，便于后续采集粪样和血样。
59.2)自发糖尿病猕猴的理化指标检测
60.将筛选的16只猕猴禁食不禁水饲养12h。使用生化管采集猕猴的静脉血液，并在管身注明采样时间、地点、样本编号等信息，然后置于放有冰袋的泡沫盒中运送回实验室。采集的血样立即进行生理生化指标空腹葡萄糖(fasting plasma glucose，fgp)、糖化血红蛋
白(glycosylated hemoglobin a1c，hba1c)、空腹胰岛素(fasting plasma insulin，fpi)、总胆固醇(total cholesterol，tc)、甘油三酯(triglycerides，tg)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol，hdl)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol，ldl)的检测，再结合公司提供的体重数据计算得到实验猕猴的值，具体公式为：
61.体重(kg)/身长(m)262.homa-ir是判断t2dm的标准之一，计算方式为：
63.(fpi
×
fpg)/22.5
64.下表为对照组与t2dm组个体的生理生化指标数值：
65.表1对照组与t2dm组个体的生理生化指标
[0066][0067]
*p《0.05，**p《0.01
[0068]
由表1可知，t2dm组相较于对照组fpg、fpi和homa-ir指标显著上升(p《0.01)；hba1c、tg、tc、hdl、ldl以及bmi指标无显著性变化(p《0.05)。
[0069]
3)非靶向代谢组筛选标记物
[0070]
s1、粪样采集
[0071]
佩戴两层无菌手套(内层为乳胶手套，外层为一次性pe手套)的采样人员采集单笼饲养猕猴排便十分钟内的粪便样品，剥离与接粪盘接触的外层，装入50ml无菌离心管中备用，并在采样管上记录采集时间、地点、样本编号等信息。在采集下一份粪样时，更换新的pe手套，重复上述采集过程。最后将采集到的所有粪样于-80℃冰箱保存。
[0072]
s2、粪样的处理及分析
[0073]
将储存于-80℃的粪便样品取出置于4℃环境中缓慢解冻，将甲醇、乙腈和水溶液
以2：2：1的比例混匀预冷备用，取解冻后样本加入混合液涡旋混合，并依次经过30min的低温超声，10min静置以及20min的离心(14000g，4℃)后取上清液进行色谱-质谱分析。采用agilent 1290infinity lc超高效液相色谱系统(uhplc)hilic色谱柱对上清液进行分离，分离参数为默认程序：0-0.5min，流动相组成为95％乙腈；0.5-7min，乙腈浓度线性下降为65％；7-8min，乙腈浓度线性下降为40％；8-9min，乙腈浓度维持在40％；9-9.1min，乙腈浓度从40％线性增加到95％；9.1-12min，乙腈浓度维持在95％；分离好的样品通过ab triple tof 6600质谱仪采用电喷雾电离(esi)分别对正离子和负离子模式对分离好的样品进行检测得到原始数据。
[0074]
原始数据转换为.mzxml格式后使用xcms软件进行峰对齐、保留时间校正和峰面积提取。经xcms处理后的数据依次进行代谢物结构鉴定、数据预处理和数据质量评估，最后进行数据分析。结合单变量统计分析和多维统计分析筛选差异代谢物，通过聚类分析、相关性分析和kegg通路富集分析展示实验组于对照组代谢水平的差异，挖掘差异代谢物参与的生物过程以及调控通路。单变量统计分析主要包括差异倍数分析(fold change analysis，fc analysis)和t检验，fc》1.5或fc《0.67，p value《0.05的代谢物被视为差异代谢物并使用火山图进行可视化展示。多维统计分析主要通过偏最小二乘判别分析(partial least squares discrimination analysis，pls-da)和正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discrimination analysis，opls-da)得到变量权重值(variable importance for the projection，vip)，vip值用于评估各代谢物对差异判别的影响强度，通常以vip》1的标准筛选在模型解释中具有显著贡献的代谢物。pls-da是一种运用偏最小二乘回归建立代谢物与样品表型关系模型的有监督的统计方法，opls-da是一种在pls-da基础上降低噪音，提高模型解析能力和有效性的分析方法。本研究以fc》1.5或fc《0.67，p value《0.05且vip》1作为显著性差异代谢筛选标准。使用metaboanalyst(https://www.metaboanalyst.ca/home.xhtml)在线软件进行差异代谢物的kegg通路富集分析，通过fisher精确检验计算各个通路中的代谢物富集度的显著性水平，pvalue《0.05的代谢通路为显著富集通路。
[0075]
s3、差异代谢物的筛选
[0076]
在正、负离子模式下，t2dm组与对照组之间共计检测到14665种代谢物，根据火山图显示，t2dm组与对照组之间存在大量显著差异代谢物可用于后续鉴定(图1)。t2dm组和对照组的pls-da得分图以及opls-da得分图(图2和图3)可知，在正、负离子模式下，t2dm组与对照组的代谢物有明显差异。
[0077]
在t2dm组与对照组之间共计鉴定出1564种代谢物，其中116种为差异代谢物。在正离子模式下鉴定到68种差异代谢物(vip》1，p《0.1)，其中差异显著的代谢物38种(vip》1，p《0.05)；负离子模式下鉴定到48种差异代谢物，其中差异显著的代谢物26种(vip》1，p《0.05)。其中l-丙酰肉碱的差异倍数在所有差异代谢物中最高(fold change＝16.19)。为进一步分析差异代谢物的功能，我们对其进行了kegg通路富集分析，发现在t2dm组中共计富集到色氨酸代谢1条信号通路(p《0.05)(图4)。
[0078]
表2两组间脂酰肉碱类代谢物差异分析
[0079][0080]
*p《0.05，**p《0.01
[0081]
由表2可知，脂肪酸代谢物l-丙酰肉碱(l-propionylcarnitine)、l-己酰基肉碱(hexanoyl-l-carnitine)、(r)-丁酰肉碱((r)-butyrylcarnitine)、肉碱(carnitine)和异戊酰肉碱(isovaleryl-l-carnitine)水平在t2dm组显著升高。可知，t2dm组个体脂肪酸代谢物l-丙酰肉碱、l-己酰基肉碱、(r)-丁酰肉碱、肉碱和异戊酰肉碱等脂酰肉碱水平显著升高，脂酰肉碱增加说明线粒体β-氧化受阻，可导致游离脂肪酸累积。因此，我们对两组猕猴血液的中长链游离脂肪酸进行了靶向定量检测。
[0082]
4)靶向中长链脂肪酸代谢组检测
[0083]
a1、血样采集
[0084]
将16只实验猕猴单笼饲养12h，禁食不禁水。使用肝素抗凝采血管采集实验猕猴的静脉血液，并在管身注明采样时间、地点、样本编号等信息，然后置于放有冰袋的泡沫盒中运送回实验室，采集的血样样品保存于-80℃冰箱。
[0085]
a2、血样的处理及分析
[0086]
标准品配制
[0087]
将40种脂肪酸甲酯混合标准品溶液制成总浓度分别为0.5mg/l，1mg/l,5mg/l，10mg/l，25mg/l，50mg/l，100mg/l，250mg/l，500mg/l，1000mg/l的十个混合标准品。将25μl浓度为500ppm的正十九酸甲酯作为内标加入500μl混合标准品中混匀后加入进样瓶。以进样量1μl，分流比10:1的标准，分流进样，进入gc-ms检测。然后将血浆样品冰上解冻，取100ul样品以及1ml的氯仿甲醇溶液加入2ml玻璃离心管中，并经过以下流程：超声30min——取上清液——加入2ml 1％的硫酸-甲醇溶液——80℃水浴30min——加1ml的正己烷萃取——加5ml的纯水洗涤——吸取上清液500μl——加入25μl的正十九酸甲酯混匀——加入进样瓶——进入gc-ms检测(进样量1μl，分流比10:1,分流进样)。
[0088]
样品采用agilent db-wax毛细管柱(30m
×
0.25mm id
×
0.25μm)气相色谱系统进行分离，样本队列中每间隔一定数量的实验样本设置一个qc样本，用于检测和评价系统的稳定性及重复性，再使用agilent 7890/5975c气-质联用仪对样品进行质谱分析。
[0089]
采用msd chemstation软件提取色谱峰面积及保留时间。绘制标准曲线,计算样品中中长链脂肪酸的含量。在使用wilcoxon检验进行差异分析，p value《0.05的代谢物被视为差异代谢物，数据结果均以平均值
±
标准差表示。
[0090]
两组间不同类型脂肪酸的差异
[0091]
表3两组间不同类型脂肪酸的差异分析
[0092][0093]
*p《0.05，**p《0.01
[0094]
如表3所示，t2dm组猕猴体内饱和脂肪酸(sfa)含量显著高于对照组(p《0.05)，而单不饱和脂肪酸(mufa)、多不饱和脂肪酸(pufa)、ω-3多不饱和脂肪酸(n3)和ω-6多不饱和脂肪酸(n6)含量两组间没有显著性变化(p》0.05)。
[0095]
两组间中长链脂肪酸的差异
[0096]
表4差异中长链脂肪酸
[0097][0098]
*p《0.05，**p《0.01
[0099]
具体的中长链脂肪酸差异分析结果显示，t2dm组相较于对照组肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸含量显著上升(p《0.05)。
[0100]
a3、临界值的确定
[0101]
对筛选到的标志代谢物确定一个诊断的阈值，具体如下：以所有t2dm猕猴个体中肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸含量的最低值为该代谢物的最低阈值，若待测猕猴个体三种代谢物均超过该阈值则被判定为t2dm个体。肉豆蔻烯酸阈值为23.39ug/ml，油酸阈值为0.15ug/ml，棕榈酸阈值为219.41ug/ml。
[0102]
实施例2猕猴自发性糖尿病的诊断试剂
[0103]
本实施例分别提供了六种诊断试剂，诊断试剂的诊断标志物分别为肉豆蔻烯酸、油酸、棕榈酸、肉豆蔻烯酸和油酸、肉豆蔻烯酸和棕榈酸、油酸和棕榈酸。
[0104]
另外，本实施例还提供了另外一组诊断试剂，其诊断标志物包括肉豆蔻烯酸(myristoleate，c14:1n5)、油酸(oleate，c18:1n9)和棕榈酸(palmitate，c16:0)三种。
[0105]
本实施例的生物标志物来源于粪便。
[0106]
本实施例的生物标志物的检出阈值分别是：肉豆蔻烯酸阈值为23.39ug/ml，油酸阈值为0.15ug/ml，棕榈酸阈值为219.41ug/ml。
[0107]
本实施例的糖尿病为猕猴自发性糖尿病。
[0108]
实施例3猕猴自发性糖尿病的诊断试剂盒
[0109]
本实施例分别提供了六种诊断试剂盒，诊断试剂盒的诊断标志物分别为肉豆蔻烯酸、油酸、棕榈酸、肉豆蔻烯酸和油酸、肉豆蔻烯酸和棕榈酸、油酸和棕榈酸。
[0110]
另外，本实施例还提供了另外一组诊断试剂盒，其诊断标志物包括肉豆蔻烯酸(myristoleate，c14:1n5)、油酸(oleate，c18:1n9)和棕榈酸(palmitate，c16:0)三种。
[0111]
本实施例的生物标志物来源于粪便。
[0112]
本实施例的生物标志物的检出阈值分别是：肉豆蔻烯酸阈值为23.39ug/ml，油酸阈值为0.15ug/ml，棕榈酸阈值为219.41ug/ml。
[0113]
本实施例的糖尿病为猕猴自发性糖尿病。
[0114]
实施例4糖尿病辅助产品
[0115]
本实施例提供了糖尿病辅助产品，糖尿病辅助产品中的生物标志物为肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸，糖尿病辅助产品包括辅助诊断2型糖尿病、辅助对2型糖尿病的患病风险或预后状况进行评估或辅助研究2型糖尿病的产品。
[0116]
实施例5糖尿病检测产品
[0117]
本实施例提供了糖尿病检测产品，糖尿病检测产品中生物标志物为肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸。
[0118]
本实施例的检测产品包括2型糖尿病的检测芯片、2型糖尿病的检测试剂或2型糖尿病的检测试剂盒。
[0119]
实施例6评价猕猴自发性糖尿病的组合标志物
[0120]
本实施例的评价猕猴自发性糖尿病的组合标志物包括肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸，本实施例的生物标志物来源于血液样品。
[0121]
本实施例的生物标志物的检出阈值分别是：肉豆蔻烯酸阈值为23.39ug/ml，油酸阈值为0.15ug/ml，棕榈酸阈值为219.41ug/ml。
[0122]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
技术特征：1.一种猕猴自发性糖尿病的诊断试剂或者试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂或者试剂盒的诊断标志物为肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸中一种或者多种。2.根据权利要求1所述的诊断试剂或者试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂或者试剂盒的诊断标志物包括肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸三种。3.根据权利要求1所述的诊断试剂或者试剂盒，其特征在于，所述生物标志物来源于粪便。4.根据权利要求1所述的诊断试剂或者试剂盒，其特征在于，所述生物标志物的检出阈值分别是：肉豆蔻烯酸阈值为23.39 ug/ml，油酸阈值为0.15 ug/ml，棕榈酸阈值为219.41 ug/ml。5.根据权利要求1-4中任一项所述的诊断试剂或者试剂盒，其特征在于，所述糖尿病为猕猴自发性糖尿病。6.一种猕猴自发性糖尿病的生物标志物筛选方法，其特征在于，所述生物标志物通过基于液相色谱-质谱联用分析的代谢组学方法获得。7.生物标志物肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸中一种或者多种在制备糖尿病辅助产品中的应用，所述糖尿病辅助产品包括辅助诊断2型糖尿病、辅助对2型糖尿病的患病风险或预后状况进行评估或辅助研究2型糖尿病的产品。8.生物标志物肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸中一种或者多种在制备糖尿病检测产品中的应用。9.根据权利要求8所述的生物标志物在制备糖尿病检测产品中的应用，其特征在于，所述检测产品包括2型糖尿病的检测芯片、2型糖尿病的检测试剂或2型糖尿病的检测试剂盒。10.一种用于评价猕猴自发性糖尿病的组合标志物，其特征在于：所述组合物包括肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸。
技术总结本发明提供了一种猕猴自发性糖尿病生物组合标志物的筛选方法，并获得了一组组合标志物，并利用其原理公开了诊断标志物为肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸中一种或者多种的诊断试剂或者试剂盒。本发明提供的猕猴自发性糖尿病生物标志物肉豆蔻烯酸、油酸和棕榈酸灵敏度和特异性高，预测性好，可应用于辅助诊断2型糖尿病、辅助对2型糖尿病的患病风险及预后状况进行评估或辅助研究2型糖尿病等方面，对2型糖尿病的早期检测和预防具有重要的指导意义，可推广，在个体化、灵敏识别、筛查、遗传咨询中具有重要意义。意义。意义。
技术研发人员：李静 刘旭 胡刚 刘清花
受保护的技术使用者：四川格林豪斯生物科技有限公司
技术研发日：2022.07.19
技术公布日：2022/11/1
