1.本发明涉及胶原蛋白技术领域，具体为一种类人胶原蛋白组合物及其制备方法。
背景技术：2.类人胶原蛋白(human-like collagen)是将人体胶原蛋白的mrna逆转录成cdna，经酶切后的一段基因重组于e.coli(大肠杆菌)内，经过高密度发酵、分离、复性、纯化工艺生产的一种高分子生物蛋白。胶原蛋白由于固有的生物兼容性、生物降解性和吸收性、促新细胞形成及促上皮细胞形成功能，在医学领域、美容、化妆品、保健品行业的潜在用途不断拓宽。
3.现有技术中的类人胶原蛋白在美容、护肤上的应用和研究较多，而在止血功效方面应用和研究较少，缺少一种具有优良止血效果的类人胶原蛋白组合物。
技术实现要素：4.本发明的主要目的是提供一种类人胶原蛋白组合物，旨在解决现有技术中缺少一种具有优良止血效果的类人胶原蛋白组合物的技术问题。
5.为实现上述目的，本发明提出的类人胶原蛋白组合物，包括以下原料：
6.5-15重量份的类人胶原蛋白；
7.10-20重量份的可交联粉末；
8.1-2重量份的交联剂；
9.20-25重量份的鱼胶提取物；以及
10.50-80重量份的壳聚糖。
11.可选地，所述可交联粉末包括以下原料：淀粉和处理酶，所述处理酶为所述淀粉质量的1％-5％。
12.可选地，所述处理酶包括以下原料：α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶；所述α-淀粉酶和所述葡萄糖淀粉酶的质量比为1：(4-6)。
13.可选地，所述淀粉选自玉米淀粉、马铃薯淀粉或小麦淀粉中的至少一种。
14.可选地，所述类人胶原蛋白以及所述鱼胶提取物的总重量与所述壳聚糖的重量的比例为1：(1.8-2.1)。
15.本发明还提出一种类人胶原蛋白组合物的制备方法，包括以下步骤：
16.制备可交联粉末；
17.取配比量的所述可交联粉末，加入水形成溶液，加入配比量的类人胶原蛋白搅拌均匀；离心处理后加入配比量的交联剂交联所述类人胶原蛋白和所述可交联粉末，交联温度为55-65℃，交联时间为10-12小时；交联结束后洗涤、离心在冻干，制得类人胶原蛋白-可交联粉末组合物；
18.制备鱼胶提取物；
19.取配比量的壳聚糖，将其溶解在0.6-0.8％的醋酸溶液中，加入所述类人胶原蛋
白-可交联粉末组合物和配比量的鱼胶提取物，搅拌均匀后超声脱气得混合溶液；将所述混合溶液均匀喷涂在冷冻盘上，喷涂厚度1-2mm，置于-80℃至-60℃的环境下预冻40-50min；预冻结束后放置冻干机进行冷冻干燥，干燥完全后得到所述类人胶原蛋白组合物。
20.可选地，制备可交联粉末步骤包括以下步骤：
21.取配比量的淀粉，配制成质量分数为16-20％的淀粉乳，加入相当于所述淀粉质量1-2％的氯化钠以及相当于所述淀粉质量1-2％的三偏磷酸钠，调节ph至10.1-10.2，在搅拌条件下加热至40-50℃，反应20-22小时，反应结束后调节ph至4-5，过滤洗涤，得到所述可交联粉末。
22.可选地，制备可交联粉末步骤还包括以下步骤：
23.取配比量的α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶，加入缓冲液配制成酶液；
24.将所述可交联粉末加入至醋酸钠缓冲液，配制成质量分数为20-25％的溶液，加热至50-55℃；加入所述酶液，搅拌直至反应完全，将产物离心、洗涤、干燥，干燥后的粉末粉碎，得到具有微孔结构的所述可交联粉末。
25.可选地，制备鱼胶提取物步骤包括以下步骤：
26.提供鱼胶；
27.所述鱼胶切碎后加入蒸馏水，鱼胶组织捣碎制得料液；
28.微波处理所述料液，微波萃取结束后对所述料液进行过滤得到滤液；
29.所述滤液进行离心处理，取上清液，得到鱼胶提取物。
30.可选地，在所述鱼胶切碎后加入蒸馏水步骤中，所述鱼胶和所述蒸馏水的质量比为1：(40-50)；
31.和/或，在微波处理所述料液步骤中，微波萃取时间为3分钟-5分钟，微波萃取功率为350w-400w。
32.本发明技术方案通过将类人胶原蛋白和可交联粉末交联后得到类人胶原蛋白-可交联粉末组合物，是一种具有良好止血效果的材料，然后将鱼胶提取物、类人胶原蛋白-可交联粉末组合物和壳聚糖制作得到一种组合物，该组合物呈海绵状，内部孔结构均匀；最终得到的类人胶原蛋白组合物具有良好的结构稳定性、吸水性、舒适性、人体相容性和止血效果。
具体实施方式
33.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
34.本发明提出一种类人胶原蛋白组合物。
35.在本发明实施例中，该类人胶原蛋白组合物，包括以下原料5-15重量份的类人胶原蛋白、10-20重量份的可交联粉末、1-2重量份的交联剂、20-25重量份的鱼胶提取物以及50-80重量份的壳聚糖。
36.在本发明实施例中，可交联粉末包括以下原料：淀粉和处理酶，处理酶为淀粉质量的1％-5％。具体地，处理酶为淀粉质量的1％、3％或5％。
37.在本发明实施例中，处理酶包括以下原料：α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶；α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶的质量比为1∶(4-6)。具体地，该质量比可以是1∶4、1∶5或1∶6，也可以是1∶(4-6)中的任一比例。
38.在本发明实施例中，淀粉选自玉米淀粉、马铃薯淀粉或小麦淀粉中的至少一种。
39.在本发明实施例中，类人胶原蛋白以及鱼胶提取物的总重量与壳聚糖的重量的比例为1∶(1.8-2.1)。具体地，该比例可以是1∶1.8、1∶2或1∶2.1，也可以是1∶(1.8-2.1)中的任一比例。
40.本发明技术方案先通过将类人胶原蛋白和可交联粉末交联后得到类人胶原蛋白-可交联粉末组合物，是一种具有良好止血效果的材料。相比单一的止血粉末，该类人胶原蛋白-可交联粉末组合物具有更好的人体相容性，还具有促进人体细胞生长的效果。
41.然后将鱼胶提取物、类人胶原蛋白-可交联粉末组合物作为胶原蛋白成分和壳聚糖合成制作得到一种新的组合物，该组合物呈海绵状，内部孔结构均匀；最终得到的类人胶原蛋白组合物具有良好的结构稳定性、吸水性、舒适性、人体相容性、抗菌性、屏蔽效果和止血效果。
42.本发明还提出一种类人胶原蛋白组合物的制备方法，包括以下步骤：
43.制备可交联粉末；
44.取配比量的可交联粉末，加入水形成溶液，加入配比量的类人胶原蛋白搅拌均匀；离心处理后加入配比量的交联剂交联类人胶原蛋白和可交联粉末，交联温度为55-65℃，交联时间为10-12小时；交联结束后洗涤、离心在冻干，制得类人胶原蛋白-可交联粉末组合物；
45.制备鱼胶提取物；
46.取配比量的壳聚糖，将其溶解在0.6-0.8％的醋酸溶液中，加入类人胶原蛋白-可交联粉末组合物和配比量的鱼胶提取物，搅拌均匀后超声脱气得混合溶液；将混合溶液均匀喷涂在冷冻盘上，喷涂厚度1-2mm，置于-80℃至-60℃的环境下预冻40-50min；预冻结束后放置冻干机进行冷冻干燥，干燥完全后得到类人胶原蛋白组合物。
47.在本发明实施例中，制备可交联粉末步骤包括以下步骤：
48.取配比量的淀粉，配制成质量分数为16-20％的淀粉乳，加入相当于淀粉质量1-2％的氯化钠以及相当于淀粉质量1-2％的三偏磷酸钠，调节ph至10.1-10.2，在搅拌条件下加热至40-50℃，反应20-22小时，反应结束后调节ph至4-5，过滤洗涤，得到可交联粉末。
49.在本发明实施例中，制备可交联粉末步骤还包括以下步骤：
50.取配比量的α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶，加入缓冲液配制成酶液；
51.将可交联粉末加入至醋酸钠缓冲液，配制成质量分数为20-25％的溶液，加热至50-55℃；加入酶液，搅拌直至反应完全，将产物离心、洗涤、干燥，干燥后的粉末粉碎，得到具有微孔结构的可交联粉末。
52.在本发明实施例中，制备鱼胶提取物步骤包括以下步骤：
53.提供鱼胶；
54.鱼胶切碎后加入蒸馏水，鱼胶组织捣碎制得料液；
55.微波处理料液，微波萃取结束后对料液进行过滤得到滤液；
56.滤液进行离心处理，取上清液，得到鱼胶提取物。
57.在本发明实施例中，在鱼胶切碎后加入蒸馏水步骤中，鱼胶和蒸馏水的质量比为1：(40-50)。
58.在本发明实施例中，在微波处理料液步骤中，微波萃取时间为3分钟-5分钟，微波萃取功率为350w-400w。
59.为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。
60.实施例1-3的原料配比请参照表1。
61.表1
[0062] 实施例1实施例2实施例3类人胶原蛋白(重量份)51015可交联粉末(重量份)101520京尼平交联剂(重量份)11.52鱼胶提取物(重量份)202525壳聚糖(重量份)507080
[0063]
实施例1-3
[0064]
类人胶原蛋白组合物的制备方法，步骤如下：
[0065]
取配比量的淀粉，配制成质量分数为18％的淀粉乳，加入相当于所述淀粉质量1.5％的氯化钠以及相当于所述淀粉质量1.5％的三偏磷酸钠，调节ph至10.1，在搅拌条件下加热至50℃，反应21小时，反应结束后调节ph至5，过滤洗涤，得到所述可交联粉末。
[0066]
取配比量的α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶加入缓冲液配制成酶液，α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶的总质量为淀粉质量的3％，α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶的质量比为1∶5；
[0067]
将所述可交联粉末加入至醋酸钠缓冲液，配制成质量分数为24％的溶液，加热至50℃；加入所述酶液，搅拌直至反应完全，将产物离心、洗涤、干燥，干燥后的粉末粉碎，得到具有微孔结构的所述可交联粉末；
[0068]
取配比量的可交联粉末，加入水形成溶液，加入配比量的类人胶原蛋白搅拌均匀；离心处理后加入配比量的交联剂交联类人胶原蛋白和可交联粉末，交联温度为55℃，交联时间为11小时；交联结束后洗涤、离心在冻干，制得类人胶原蛋白-可交联粉末组合物；
[0069]
提供鱼胶；鱼胶切碎后加入蒸馏水，鱼胶组织捣碎制得料液；鱼胶和蒸馏水的质量比为1∶45；
[0070]
微波处理料液，微波萃取时间为4分钟，微波萃取功率为370w，微波萃取结束后对料液进行过滤得到滤液；
[0071]
滤液进行离心处理，取上清液，得到鱼胶提取物；
[0072]
取配比量的壳聚糖，将其溶解在0.7％的醋酸溶液中，加入类人胶原蛋白-可交联粉末组合物和配比量的鱼胶提取物，搅拌均匀后超声脱气得混合溶液；将混合溶液均匀喷涂在冷冻盘上，喷涂厚度1mm，置于-70℃的环境下预冻45min；预冻结束后放置冻干机进行冷冻干燥，干燥完全后得到类人胶原蛋白组合物。
[0073]
对实施例1-3制得类人胶原蛋白组合物止血效果进行测试，与市售的明胶海绵(南京金陵药业有限公司)进行对比，测试方法为：
[0074]
对实验兔(新西兰大白兔，体重为2.5
±
0.2kg)采用氯胺酮腹腔注射麻醉，逐层开腹，采用局部钳夹的方法在肝左叶造成1cm
×
1cm出血创面，分别应用市售的明胶海绵和实施例1-3的类人胶原蛋白组合物进行止血并观察局部止血时间：在出血创上平铺止血材料，加盖纱布，分别在65，85和150s时间点观察出血情况，并录出血停止时间。测试结果见表2。
[0075]
表2
[0076] 实施例1实施例2实施例3明胶海绵止血时间(秒)657068120
[0077]
可见本发明的类人胶原蛋白组合物相对于现有技术中的明胶海绵，有更好的止血效果。
[0078]
对实施例1-3制得类人胶原蛋白组合物的孔隙率和吸水率进行测试。测试结果见表3。
[0079]
表3
[0080] 实施例1实施例2实施例3孔隙率(％)616663吸水率(％)195210205
[0081]
可见本发明的类人胶原蛋白组合物具有良好的吸水性，孔隙率也从另一方面反应了透气性。
[0082]
以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书内容所作的等效变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。
技术特征：1.一种类人胶原蛋白组合物，其特征在于，包括以下原料：5-15重量份的类人胶原蛋白；10-20重量份的可交联粉末；1-2重量份的交联剂；20-25重量份的鱼胶提取物；以及50-80重量份的壳聚糖。2.如权利要求1所述的类人胶原蛋白组合物，其特征在于，所述可交联粉末包括以下原料：淀粉和处理酶，所述处理酶为所述淀粉质量的1％-5％。3.如权利要求2所述的类人胶原蛋白组合物，其特征在于，所述处理酶包括以下原料：α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶；所述α-淀粉酶和所述葡萄糖淀粉酶的质量比为1：(4-6)。4.如权利要求2所述的类人胶原蛋白组合物，其特征在于，所述淀粉选自玉米淀粉、马铃薯淀粉或小麦淀粉中的至少一种。5.如权利要求1所述的类人胶原蛋白组合物，其特征在于，所述类人胶原蛋白以及所述鱼胶提取物的总重量与所述壳聚糖的重量的比例为1：(1.8-2.1)。6.一种类人胶原蛋白组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备可交联粉末；取配比量的所述可交联粉末，加入水形成溶液，加入配比量的类人胶原蛋白搅拌均匀；离心处理后加入配比量的交联剂交联所述类人胶原蛋白和所述可交联粉末，交联温度为55-65℃，交联时间为10-12小时；交联结束后洗涤、离心在冻干，制得类人胶原蛋白-可交联粉末组合物；制备鱼胶提取物；取配比量的壳聚糖，将其溶解在0.6-0.8％的醋酸溶液中，加入所述类人胶原蛋白-可交联粉末组合物和配比量的鱼胶提取物，搅拌均匀后超声脱气得混合溶液；将所述混合溶液均匀喷涂在冷冻盘上，喷涂厚度1-2mm，置于-80℃至-60℃的环境下预冻40-50min；预冻结束后放置冻干机进行冷冻干燥，干燥完全后得到所述类人胶原蛋白组合物。7.如权利要求6所述的类人胶原蛋白组合物的制备方法，其特征在于，制备可交联粉末步骤包括以下步骤：取配比量的淀粉，配制成质量分数为16-20％的淀粉乳，加入相当于所述淀粉质量1-2％的氯化钠以及相当于所述淀粉质量1-2％的三偏磷酸钠，调节ph至10.1-10.2，在搅拌条件下加热至40-50℃，反应20-22小时，反应结束后调节ph至4-5，过滤洗涤，得到所述可交联粉末。8.如权利要求7所述的类人胶原蛋白组合物的制备方法，其特征在于，制备可交联粉末步骤还包括以下步骤：取配比量的α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶，加入缓冲液配制成酶液；将所述可交联粉末加入至醋酸钠缓冲液，配制成质量分数为20-25％的溶液，加热至50-55℃；加入所述酶液，搅拌直至反应完全，将产物离心、洗涤、干燥，干燥后的粉末粉碎，得到具有微孔结构的所述可交联粉末。9.如权利要求6所述的类人胶原蛋白组合物的制备方法，其特征在于，制备鱼胶提取物步骤包括以下步骤：
提供鱼胶；所述鱼胶切碎后加入蒸馏水，鱼胶组织捣碎制得料液；微波处理所述料液，微波萃取结束后对所述料液进行过滤得到滤液；所述滤液进行离心处理，取上清液，得到鱼胶提取物。10.如权利要求9所述的类人胶原蛋白组合物的制备方法，其特征在于，在所述鱼胶切碎后加入蒸馏水步骤中，所述鱼胶和所述蒸馏水的质量比为1：(40-50)；和/或，在微波处理所述料液步骤中，微波萃取时间为3分钟-5分钟，微波萃取功率为350w-400w。
技术总结本发明公开一种类人胶原蛋白组合物及其制备方法，其中，该类人胶原蛋白组合物，包括以下原料：5-15重量份的类人胶原蛋白；10-20重量份的可交联粉末；1-2重量份的交联剂；20-25重量份的鱼胶提取物以及50-80重量份的壳聚糖。本发明技术方案通过将类人胶原蛋白和可交联粉末交联后得到类人胶原蛋白-可交联粉末组合物，是一种具有良好止血效果的材料，然后将鱼胶提取物、类人胶原蛋白-可交联粉末组合物和壳聚糖制作得到一种组合物，该组合物呈海绵状，内部孔结构均匀；最终得到的类人胶原蛋白组合物具有良好的结构稳定性、吸水性、舒适性、人体相容性和止血效果。人体相容性和止血效果。
技术研发人员：柳玉平
受保护的技术使用者：山东蓝奥生物技术有限公司
技术研发日：2022.07.12
技术公布日：2022/11/1
