1.本发明属于药物合成技术领域，尤其涉及一种烷基硫芳基克拉夫定磷酰 胺类化合物及其应用。
背景技术：2.慢乙肝是由乙型肝炎病毒(hbv)感染所致的传染性疾病，临床表现为 肝区疼痛、乏力、肝脾肿大等，随着hbv持续复制，可逐渐形成肝纤维化、 肝硬化，甚至诱发肝癌，危及患者生命。目前，乙肝治愈是国内乃至全世界 的共同目标。目前临床抗hbv治疗药物有核苷(酸)类似物(nas)和聚乙 二醇干扰素α(peg-ifnα)。长期应用核苷酸类抗病毒药物会出现一定耐药性， 促使病毒基因变异或缺失，且一旦停药易复发，而聚乙二醇干扰素可显著改 善患者肝功能，两者联用可增强治疗效果，最大限度地抑制hbv复制，减轻 肝功能损伤，并延缓慢乙肝进展，但均不能直接清除肝细胞核内的共价闭合 环状dna(cccdna)，hbv感染难以彻底”治愈”。尽管如此，核苷(酸)类 抗病毒药物仍是目前最有发展前景的慢性乙型肝炎治疗药物。
3.克拉夫定是一种非天然的l-核苷胸苷类似物，是第一代核苷酸类活性位 点聚合酶抑制剂(active site polymerase inhibitor nucleotides，aspin)，是 肝组织靶向药物，具有显著的病毒抑制效应及肝脏生化改善作用，在治疗后6 个月时仍出现显著持久效应(持久效应是至关重要的优点，因大多数乙肝病 人需要长期治疗)，具有明显的控制病毒效果。克拉夫定的作用机制不同于 其他核苷类药物，它并不是一个dna链终止物，而是通过一系列细胞内磷酸 化产生三磷酸酯l-fmau-tp结合在活性部位，诱导聚合酶构象发生变化，使 病毒dna链的合成不能顺利进行，是唯一一种通过非竞争性扭曲聚合酶的活 性位点，来抑制dna合成各阶段的核苷酸，它的作用机制可能与其他正在寻 求功能性治愈hbv的方案形成互补。
4.但由于克拉夫定不具有肝靶向性优势，并且在以往已经公开的临床研究 中发现，克拉夫定会引起受试者可逆性近端骨骼肌肌病，导致其不再被研发 用于治疗慢性乙肝，该病变可能是患者线粒体功能障碍的结果。亚伯
·
德拉 罗莎等人在wo2017/223421中报道了一种新型的肝靶向分子ati2173，旨在通 过对克拉夫定的药代动力学特征进行改善，降低全身暴露水平，从而消除骨 骼肌病等不良反应，但其活性代谢物进入肝脏组织的能力没有明显提高。
5.因此，开发一种相同作用机制，且活性更高、毒副作用更小的新一代aspin 是急于被满足的临床需求。
技术实现要素：6.有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种烷基硫芳基克拉夫定 磷酰胺类化合物及其应用，该烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物在保留独 特的抗hvb活性的同时减少了克拉夫定的全身暴露量，消除了可能的毒副作 用；并且相比于ati-2173，本发明
中涉及的化合物具有不可预料的更高的生 物转化效率，因此临床具有用量低，毒副作用小的优势。
7.本发明提供了一种烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，如式(i)所示：
[0008][0009]
其中，r1～r3各自独立地选自氢、氘、取代或未取代的烷基、取代或未取 代的芳基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基；
[0010]
r4选自取代或未取代的烷基；
[0011]
a选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的 杂环基。
[0012]
优选的，所述取代的烷基、取代的芳基、取代的环烷基与取代的杂环基 中的取代基各自独立地选自氘、卤素、c1～c10的烷氧基、c1～c10的氘代烷 氧基、c6～c20的芳基、c6～c20的氘代芳基、氰基、羧基、酯基、酰胺基、 氨基与羟基中的一种或多种。
[0013]
优选的，所述r1～r3各自独立地选自氢、氘、取代或未取代的c1～c10 烷基、取代或未取代的c6～c20的芳基、取代或未取代的c3～c20环烷基、取 代或未取代的c2～c20的杂环基；
[0014]
r4选自取代或未取代的c1～c10的烷基；
[0015]
a选自取代或未取代的c6～c20的芳基、取代或未取代的c3～c20的环烷 基、取代或未取代的c2～c20的杂环基。
[0016]
优选的，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(ii)和/或式 (iii)所示的结构：
[0017][0018]
优选的，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(iv)所示的 结构：
[0019][0020]
其中，带*的碳原子为手性碳原子，其构型为r-构型或s构型。
[0021]
优选的，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(v)所示的结 构：
[0022][0023]
优选的，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(vi)或式(vii) 所示的结构：
[0024][0025]
优选的，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(vi-1)～式 (vi-4)式(vii-1)～式(vii-4)任意一项所示的结构：
[0026]
[0027]
本发明还提供了一种药物组合物，包括上述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰 胺类化合物、其可药用盐、其水化物、其溶剂合物与其结晶中的一种或多种。
[0028]
本发明还提供了一种上述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物、其可 药用盐、其水化物、其溶剂合物与其结晶中的一种或多种在制备预防和/或治 疗由肝炎病毒引起的疾病的药物中的应用。
[0029]
本发明提供了一种烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，如式(i)所示。 与现有技术相比，本发明提供的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物保留了 独特的抗hbv活性同时，减少克拉夫定的全身暴露量，消除可能的毒副作用， 为联合用药提供新选择，有可能在将来为hbv患者提供功能性治愈新方案。
附图说明
[0030]
图1为本发明实施例1及实施例2中得到的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺 类化合物处理后huh 7细胞内的clevudine-tp含量随时间变化图。
具体实施方式
[0031]
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部 的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性 劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0032]
本发明提供了一种烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，如式(i)所示：
[0033][0034]
其中，r1～r3各自独立地为氢、氘、取代或未取代的烷基、取代或未取代 的芳基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基；优选为氢、氘、 取代或未取代的c1～c10烷基、取代或未取代的c6～c20的芳基、取代或未取 代的c3～c20环烷基、取代或未取代的c2～c20的杂环基；更优选为氢、氘、 取代或未取代的c1～c8烷基、取代或未取代的c6～c15的芳基、取代或未取 代的c3～c15环烷基、取代或未取代的c2～c15的杂环基；再优选为氢、氘、 取代或未取代的c1～c5烷基、取代或未取代的c6～c10的芳基、取代或未取 代的c3～c10环烷基、取代或未取代的c2～c10的杂环基；最优选为氢、氘、 取代或未取代的c1～c3烷基、取代或未取代的c6～c8的芳基、取代或未取代 的c3～c8环烷基、取代或未取代的c2～c8的杂环基。
[0035]
r4为取代或未取代的烷基，优选为取代或未取代的c1～c10的烷基，更 优选为取代或未取代的c1～c8的烷基，再优选为取代或未取代的c1～c5的烷 基，再优选为取代或未取代的c1～c3的烷基，最优选为取代或未取代的c1～c2 的烷基。
[0036]
a为取代或未取代的芳基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂 环基；优选为取代或未取代的c6～c20的芳基、取代或未取代的c3～c20环烷 基、取代或未取代的c2～c20的杂环基；更优选为取代或未取代的c6～c15的 芳基、取代或未取代的c3～c15环烷基、取代或未取代的c2～c15的杂环基； 再优选为取代或未取代的c6～c10的芳基、取代或未取代的c3～c10环烷基、 取代或未取代的c2～c10的杂环基；最优选为取代或未取代的c6～c8的芳基、 取代或未取代的c3～c8环烷基、取代或未取代的c2～c8的杂环基。
[0037]
在本发明中，所述杂环基中的杂原子为本领域技术人员熟知的杂原子即 可，并无特殊的限制，本发明中优选为氧原子、硫原子与氮原子中的一种或 多种。
[0038]
在本发明中，所述取代的烷基、取代的芳基、取代的环烷基与取代的杂 环基中的取代基各自独立地为氘、卤素、c1～c10的烷氧基、c1～c10的氘代 烷氧基、c6～c20的芳基、c6～c20的氘代芳基、氰基、羧基、酯基、酰胺基、 氨基与羟基中的一种或多种；更优选为氘、卤素、c1～c8的烷氧基、c1～c8 的氘代烷氧基、c6～c15的芳基、c6～c15的氘代芳基、氰基、羧基、酯基、 酰胺基、氨基与羟基中的一种或多种；再优选为氘、卤素、c1～c6的烷氧基、 c1～c6的氘代烷氧基、c6～c10的芳基、c6～c10的氘代芳基、氰基、羧基、 酯基、酰胺基、氨基与羟基中的一种或多种；再优选为氘、卤素、c1～c4的 烷氧基、c1～c4的氘代烷氧基、c6～c10的芳基、c6～c10的氘代芳基、氰基、 羧基、酯基、酰胺基、氨基与羟基中的一种或多种；最优选为氘、卤素、c1～c2 的烷氧基、c1～c2的氘代烷氧基、c6～c10的芳基、c6～c10的氘代芳基、氰 基、羧基、酯基、酰胺基、氨基与羟基中的一种或多种。
[0039]
本发明提供的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物可具有手性，其中手 性原子可为磷原子也可为碳原子。
[0040]
当所述手性原子为磷原子时，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物 具有式(ii)和/或式(iii)所示的结构；即磷原子为手性原子，其构型可为 r-构型、s-构型或两者的混合物。
[0041][0042]
其中，所述r1～r3、r4与a均同上所述，在此不再赘述。
[0043]
当所述手性原子为碳原子时，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物 具有式(iv)所示的结构：
[0051]
本发明提供的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物属于典型的protide (mcguigan)前药，其设计原理是将核苷膦酸/磷酸类药物分别通过磷酯键/ 磷酰胺键(芳基模块/氨基酸酯基模块)与极性基团连接形成磷酯/磷酰胺前药， 通过掩蔽极性基团来降低分子极性增加透膜性，当前药吸收进入体内后再经 特定酶水解释放原型药物。
[0052]
本发明提供的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物保留了独特的抗hbv 活性同时，减少克拉夫定的全身暴露量，消除可能的毒副作用，为联合用药 提供新选择，有可能在将来为hbv患者提供功能性治愈新方案。
[0053]
本发明还提供一种上述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物的制备方 法，包括：将式(a)所示的化合物与克拉夫定反应，得到烷基硫芳基克拉夫 定磷酰胺类化合物。
[0054][0055]
其中，r1～r3各自独立地选自氢、氘、取代或未取代的烷基、取代或未取 代的芳基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基；
[0056]
r4选自取代或未取代的烷基；
[0057]
a选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的 杂环基。
[0058]
所述反应优选在催化剂存在的条件下进行；所述催化剂优选为叔丁基氯 化镁；所述反应优选在有机溶剂中进行；所述有机溶剂优选为四氢呋喃与n
‑ꢀ
甲基吡咯烷酮的混合溶剂；所述四氢呋喃与n-甲基吡咯烷酮的体积比优选为 10：(1～5)，更优选为10：(2～4)，再优选为10：3；在本发明中，优选 先将克拉夫定、有机溶剂与催化剂混合后，加热搅拌，然后加入式(a)所示 的化合物，进行反应，得到烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物；所述式(a) 所示的化合物以其溶液的形式添加；该溶液的溶剂优选为四氢呋喃；所述加 热搅拌的温度优选为40℃～60℃，更优选为45℃～55℃，再优选为50℃；所述 加热搅拌的时间优选为20～50min，更优选为30～40min；所述反应的温度优 选为20℃～30℃，更优选为25℃；所述反应的时间优选为10～15h，更优选为 10～14h，再优选为12～13h。
[0059]
反应结束后，优选将反应液倒入饱和氯化铵溶液中，用乙酸乙酯萃取， 有机相用
饱和氯化钠溶液洗涤后，干燥，浓缩后，得到烷基硫芳基克拉夫定 磷酰胺类化合物；还可将浓缩后的物质经高效液相色谱分离，得到烷基硫芳 基克拉夫定磷酰胺类化合物；所述高效液相色谱的固定相优选为c18色谱柱， 更优选为welch xtimate c18；所述高效液相色谱的流动相包括流动相a与流 动相b；所述流动相a优选为氨水；所述流动相b优选为乙腈；以体积百分 数计，所述高效液相色谱的洗脱程序优选为在15～25min内流动相b由 20％～30％升至50％～60％，更优选在20min内流动相b由20％～30％升至 50％～60％，再优选20min内流动相b由25％～30％升至55％～60％；进一步经 高效液相色谱分离后优选还进行手性拆分；所述手性拆分优选采用的固定相 为daicel chiralpak ad；所述手性拆分所用的流动相包括流动相a与流 动相b；所述手性拆分时的流动相a优选为0.1％氨水；流动相b优选为乙醇 和/或异丙胺；所述手性拆分的洗脱程序优选为等梯度洗脱；以体积百分数计， 所述流动相b的浓度优选为40％～60％，更优选为45％～55％，再优选为50％。
[0060]
在本发明中，所述式(a)所示的化合物优选按照以下步骤制备：将式(b) 所示的化合物与式(c)所示的化合物和/或其盐类化合物在有机碱存在的条 件下反应，得到式(a)所示的化合物。
[0061][0062]
所述式(c)所示化合物的盐类化合物优选为其盐酸盐；所述有机碱优选 为三乙胺；所述反应优选在有机溶剂中进行；所述有机溶剂优选为二氯甲烷； 所述反应的温度优选为-5℃～5℃，更优选为0℃；所述反应的时间优选为1～2 h；反应结束后，浓缩加入乙酸乙酯溶剂后过滤，浓缩经柱层析纯化后，得到 式(a)所示的化合物；所述柱层析纯化的洗脱剂优选为石油醚与乙酸乙酯； 所述石油醚与乙酸乙酯的体积比优选为50：1～1：1，更优选为20：1～1：1， 再优选为10：1～1：1，再优选为6：1～2：1，最优选为4：1；所述柱层析纯 化的固定相优选为硅胶；所述固定相的粒径优选为200～300目。
[0063]
所述式(b)所示的化合物优选按照以下步骤制备：将4-硝基苯二氯化磷 在有机碱存在的条件下与式(d)所述的化合物反应，得到式(b)所示的化 合物。
[0064][0065]
其中，所述有机碱优选为三乙胺；所述反应优选在有机溶剂中进行；所 述有机溶剂优选为二氯甲烷；在本发明中，优选先将4-硝基苯二氯化磷溶于 有机溶剂中，降温至-30℃～-25℃，然后滴加含有式(d)所示化合物与有机 碱的有机溶液，滴加完毕后升温至20℃～30℃，更优选为25℃，反应，得到 式(b)所示的化合物；所述反应的时间优选为30～90min，更优选为50～80min， 再优选为60min。
[0066]
本发明还提供了一种药物组合物，包括上述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰 胺类化
合物、其可药用盐、其水化物、其溶剂合物与其结晶中的一种或多种。
[0067]
本发明还提供了上述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物、其可药用盐、其水化物、其溶剂合物与其结晶中的一种或多种在制备预防和/或治疗由肝炎病毒引起的疾病的药物中的应用。
[0068]
在本发明中，所述肝炎病毒优选为乙型肝炎病毒。
[0069]
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物及其应用进行详细描述。
[0070]
以下实施例中所用的试剂均为市售。
[0071]
实施例1
[0072][0073]
中间体3的合成
[0074]
将4-硝基苯二氯化磷(5.00g)溶解在二氯甲烷(10.0ml)中，降温至-30℃～-25℃，控制温度滴加化合物1a(3.01g)和三乙胺(2.17g,2.99ml)的二氯甲烷(10.0ml)溶液，加毕升至25℃搅拌1小时，降至0℃滴加l-丙氨酸异丙酯盐酸盐(3.93g)的二氯甲烷(10.0ml)溶液及三乙胺(4.15g,5.71ml)后保持0℃反应1小时。lcms(rt＝1.06min)显示原料消耗完全。溶液浓缩加入乙酸乙酯(20.0ml)溶解进行抽滤，滤饼用乙酸乙酯(20.0ml)冲洗，浓缩。残渣用柱层析(200～300目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化得到白色固体化合物3(4.80g，收率54.0％)。
[0075]
lcms(esi)m/z:455.1[m+h]+
[0076]
4a与4b的合成
[0077]
称取克拉夫定(570mg)溶于四氢呋喃(10.0ml)和n-甲基吡咯烷酮(3.00ml)混合溶剂中，滴加叔丁基氯化镁(1.7m,2.58ml)到上述体系中，升至50℃搅拌30分钟，滴加化合物3a(1.99g)的四氢呋喃(10.0ml)，升至25℃搅拌12小时。lcms(rt＝1.656min)显示原料消耗完全。反应混合物倒入饱和氯化铵溶液(15.0ml)中，乙酸乙酯(15.0ml，10.0ml)萃取。有机相用饱和氯化钠溶液(10.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品采用高效液相色谱法(色谱柱:welchxtimatec18250*70mm#10um；流动相:[0.1％氨水-乙腈]；b％:25％-55％,20min)纯化和手性拆分法(色谱柱:daicelchiralpakad(250mm*30mm,10μm)；流动相:[0.1％氨水乙醇]；b％:50％-50％,11min)得到白色固体化合物4a(59.4mg，纯度100％)和4b(127mg，纯度100％)。
[0078]
lcms(esi)m/z:576.2[m+h]+；
[0079]
利用核磁共振对得到的化合物4a进行分析，得到其核磁共振氢谱结果为 1
hnmr(400mhz,meod)δppm 1.23-1.27(m,6h),1.36-1.42(m,3h),1.84 (d,j＝1.20hz,3h),2.47(s,3h),3.88-3.98(m,1h),4.10-4.15(m,1h),4.28
ꢀ‑
4.42(m,3h),4.95(br,dd,j＝3.60,2.12hz,1h),4.98-5.02(m,1h),6.18
‑ꢀ
6.29(m,1h),7.18-7.31(m,4h),7.49-7.54(m,1h)。
[0080]
利用核磁共振对得到的化合物4b进行分析，得到其核磁共振氢谱结果为 1
hnmr(400mhz,meod)δppm 1.22-1.27(m,6h)1.32-1.38(m,3h)1.82
ꢀ‑
1.87(m,3h)2.46-2.51(m,3h)3.88-3.98(m,1h)4.09-4.16(m,1h)4.34
‑ꢀ
4.47(m,3h)4.94-4.97(m,1h)4.97-5.02(m,1h)6.19-6.29(m,1h)7.16
‑ꢀ
7.23(m,2h)7.26-7.34(m,2h)7.54-7.61(m,1h)。
[0081]
实施例2
[0082][0083]
中间体6的合成
[0084]
将4-巯基苯酚(12.6g)和碘乙烷(15.6g.)加入到丙酮(100ml)中， 加入碳酸钾(11.7g.)。在室温下搅拌17小时后，通过硅藻土过滤混合物， 滤液减压浓缩。将所得残余物溶解在et2o(100ml)中，然后用2mnaoh(2 x 60ml)洗涤。合并的水层用1m hcl酸化，并用et2o(2x 100ml)萃取。 合并的有机层，用无水na2so4干燥，浓缩，柱层析(cyh/etoac 5:1)分离 得到所需产物，为白色结晶固体(11.55g，收率75％)。
[0085]
中间体8的合成
[0086]
将4-硝基苯二氯化磷(5.00g)溶解在二氯甲烷(10.0ml)中，降温至
ꢀ‑
30℃～-25℃，控制温度滴加化合物6(3.31g)和三乙胺(2.96g,4.08ml)的 二氯甲烷(10.0ml)溶液，加毕升至25℃搅拌1小时，降至0℃滴加l-丙氨 酸异丙酯盐酸盐(3.93g)的二氯甲烷(10.0ml)溶液及三乙胺(4.15g,5.71 ml)后保持0℃反应1小时。lcms(rt＝1.103min)显示原料消耗完全。溶 液浓缩加入乙酸乙酯(20.0ml)溶解进行抽滤，滤饼用乙酸乙酯(20.0ml) 冲洗，浓缩。残渣用柱层析(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝50/1-1/1)纯化 得到白色固体化合物8(4.80g，收率52.4％)。
[0087]
lcms(esi)m/z:469.2[m+h]
+
。
[0088]
9a&9b的合成
[0089]
称取克拉夫定(555mg)溶于四氢呋喃(10.0ml)和n-甲基吡咯烷酮 (3.00ml)混合溶剂中，滴加叔丁基氯化镁(1.7m,2.51ml)到上述体系中， 升至50℃搅拌30分钟，滴加化合物8(2.00g)的四氢呋喃(10.0ml)，升至 25℃搅拌12小时。lcms(rt＝1.77min)显示原料消耗完全。反应混合物倒 入饱和氯化铵溶液(15.0ml)中，乙酸乙酯(15.0ml，10.0ml)萃取。有机 相用饱和氯化钠溶液(10.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品采用 高效液相色谱
法(色谱柱:welch xtimate c18 250*70mm#10μm；流动相: [0.1％氨水-乙腈]；b％:30％-60％,20min)纯化和手性拆分法(色谱柱: daicel chiralpak ad(250mm*30mm,10μm)；流动相:[0.1％氨水异 丙胺]；b％:50％-50％,11min)得到白色固体化合物9a(60.2mg，纯度98.9％) 和9b(70.6mg，纯度100％)。
[0090]
lcms(esi)m/z:590.2[m+h]+；
[0091]
利用核磁共振对得到的化合物9a进行分析，得到其核磁共振氢谱结果为 1
h nmr(400mhz,meod)δppm 1.16-1.25(m,6h),1.25-1.29(m,3h),1.36
ꢀ‑
1.42(m,3h),1.79-1.87(m,3h),2.89-2.97(m,2h),3.90-3.96(m,1h), 4.10-4.15(m,1h),4.28-4.43(m,3h),4.94-4.97(m,1h),4.98-5.03(m,1 h),6.19-6.27(m,1h),7.20-7.25(m,2h),7.31-7.36(m,2h),7.50-7.54(m, 1h)。
[0092]
利用核磁共振对得到的化合物9b进行分析，得到其核磁共振氢谱结果为 1
h nmr(400mhz,meod)δppm 1.18-1.25(m,6h),1.27(t,j＝7.20hz,3h), 1.33-1.37(m,3h),1.79-1.89(m,3h),2.86-2.97(m,2h),3.86-3.98(m,1 h),4.11-4.20(m,1h),4.34-4.51(m,3h),4.95-4.96(m,1h),4.97-5.02(m, 1h),5.08-5.10(m,1h),6.17-6.28(m,1h),7.17-7.24(m,2h),7.33-7.38 (m,2h),7.54-7.62(m,1h)。
[0093][0094]
如上面反应过程可知，克来夫定通过一系列细胞内磷酸化产生活性克拉 夫定5
’‑
三磷酸分子发挥药效，前药设计可绕过第一个磷酸化步骤，将克拉夫 定单磷酸输送到肝脏，在肝脏进一步转化为活性三磷酸克拉夫定。定量分析 化合物在huh7细胞中孵育后细胞中转化为活性产物克拉夫定三磷酸酯的浓 度，可以间接反映化合物的生物活性。
[0095]
第1天，将huh7细胞按0.5*10^6个/每孔的密度铺种到12孔板中，5％ co2，37℃细胞培养箱培养过夜；第2天，将化合物参照分子量换算配置成 20mm母液，并进一步稀释为20μm工作浓度后分别加入到huh7细胞中， 每个化合物设置3复孔，7个化合物总共铺8块细胞板；于4个不同时间点(1 h、3h、6h、24h)分别收集细胞用于测定克拉夫定三磷酸酯在细胞内的浓度， 具体为使用dpbs润洗细胞后吸干孔内残留液体，每一管细胞样品、校正标 样和质控样品，加入800μl的内标溶液(6in 1internal standard in meoh/water (v/v,70:30)。混合物充分涡旋后，12000xg，4℃离心15分钟。取上清液70 μl置于96孔板，在4℃下4000rpm离心5分钟。取10μl，使用带有beh c18 柱的acquity uplc system，通过lc-ms/ms分析样品。化合物和内标的 保留时间，色谱图的获得和色谱图的积分由软件multiquant 3.0.2 software (sciex,ma,usa)进行处理。
[0096]
通过向huh 7细胞中加入指定浓度的受试化合物处理细胞，然后不同时 间点收集
细胞，并采用超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法定量分析化合 物处理后huh 7细胞内的clevudine-tp含量，得到结果图如图1所示。由图1 结果表明，受试化合物均向克拉夫定三磷酸酯转化，且随着时间推移，huh 7 细胞中克拉夫定三磷酸酯含量逐渐升高，且水平明显优于ati-2173。
[0097]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普 通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润 饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
技术特征：1.一种烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，如式(i)所示：其中，r1～r3各自独立地选自氢、氘、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基；r4选自取代或未取代的烷基；a选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基。2.根据权利要求1所述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，其特征在于，所述取代的烷基、取代的芳基、取代的环烷基与取代的杂环基中的取代基各自独立地选自氘、卤素、c1～c10的烷氧基、c1～c10的氘代烷氧基、c6～c20的芳基、c6～c20的氘代芳基、氰基、羧基、酯基、酰胺基、氨基与羟基中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，其特征在于，所述r1～r3各自独立地选自氢、氘、取代或未取代的c1～c10烷基、取代或未取代的c6～c20的芳基、取代或未取代的c3～c20环烷基、取代或未取代的c2～c20的杂环基；r4选自取代或未取代的c1～c10的烷基；a选自取代或未取代的c6～c20的芳基、取代或未取代的c3～c20的环烷基、取代或未取代的c2～c20的杂环基。4.根据权利要求1所述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，其特征在于，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(ii)和/或式(iii)所示的结构：5.根据权利要求1所述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，其特征在于，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(iv)所示的结构：
其中，带*的碳原子为手性碳原子，其构型为r-构型或s构型。6.根据权利要求1所述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，其特征在于，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(v)所示的结构：7.根据权利要求1所述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，其特征在于，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(vi)或式(vii)所示的结构：8.根据权利要求1所述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，其特征在于，所述烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物具有式(vi-1)～式(vi-4)式(vii-1)～式(vii-4)任意一项所示的结构：
9.一种药物组合物，包括权利要求1～8任意一项所述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物、其可药用盐、其水化物、其溶剂合物与其结晶中的一种或多种。10.权利要求1～8任意一项所述的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物、其可药用盐、其水化物、其溶剂合物与其结晶中的一种或多种在制备预防和/或治疗由肝炎病毒引起的疾病的药物中的应用。
技术总结本发明提供了一种烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物，如式(I)所示。与现有技术相比，本发明提供的烷基硫芳基克拉夫定磷酰胺类化合物保留了独特的抗HBV活性同时，减少克拉夫定的全身暴露量，消除可能的毒副作用，为联合用药提供新选择，有可能在将来为HBV患者提供功能性治愈新方案。功能性治愈新方案。功能性治愈新方案。
技术研发人员：沙薇 刘洋 吴霖霖 张豪龙
受保护的技术使用者：深圳扬厉医药技术有限公司
技术研发日：2022.05.23
技术公布日：2022/11/1
