1.本发明属于质量检测技术领域，具体涉及一种谷维素的质量检测方法。
背景技术：2.谷维素为环木菠萝醇类阿魏酸酯与甾醇类阿魏酸酯的混合物，在临床上常常用于经前期紧张综合征、妇女更年期综合征等，此外还具有抗氧化、降血脂、抗血小板凝集等作用。谷维素可从米糠油、胚芽油等谷物油脂中提取，但稻谷的品种、种植的气候条件及米糠取油工艺条件的不同，都会影响谷维素有效成分含量，从而影响其制剂谷维素片质量及临床疗效。因此，需要对谷维素及其制剂的主要成分进行分析，考察各批号谷维素及其制剂的之间的质量差异。
3.谷维素、谷维素片现行质量检测标准较为简单，如国家药品标准（标准号：ws1-47b-89-2016、ws1-48b-89-2016）及一些早期的地方标准中的质量测定方法为紫外测定法，均不能全面反应该品种的质量。与紫外测定法的区别在于，指纹图谱分析强调准确的辨认，而不是精密的计算，强调的是相似，而不是相同。指纹图谱是综合地看问题，也就是强调化学图谱的“完整面貌”，反映了物质内在质量的均一性和稳定性。如文献《谷维素片组分研究及其质量标准的提高》一文通过hplc分析得到的谷维素液相分析图谱，分离并明确了8种谷维素组份，但该技术中指纹图谱的共有色谱峰较少，存在不能较好反应谷维素质量的问题。专利《一种谷维素的高效液相色谱分析方法》分离出13个供色谱峰，但仅明确了5种谷维素组份，存在反映的信息量较小、精密度较差且分离时间较长的问题。
技术实现要素：4.本发明的目的是克服现有技术存在的上述问题，提供一种精密度较好、能准确反映药物质量且分离时间短的谷维素的质量检测方法。
5.为实现以上目的，本发明提供了以下技术方案：一种谷维素的质量检测方法，所述质量检测方法依次按照以下步骤进行：步骤一、利用高效液相色谱法对待测样品溶液进行检测，建立待测样品的hplc指纹图谱，其中，所述高效液相色谱法采用溶液a与溶液b的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱，所述溶液a为甲醇与冰醋酸的混合溶液，所述溶液相b为冰醋酸与水的混合溶液，所述梯度洗脱具体为：0-15min时流动相中溶液a的体积占比为65%、溶液b的体积占比为35%；15-26min时流动相中溶液a的体积占比由65%渐变为80%、溶液b的体积占比由35%渐变为20%；26-32min时流动相中溶液a的体积占比为80%、溶液b的体积占比为20%；32-33min时流动相中溶液a的体积占比由80%渐变为65%、溶液b的体积占比由20%渐变为35%；33-38min时流动相中溶液a的体积占比为65%、溶液b的体积占比为35%；
步骤二、将待测样品的hplc指纹图谱与预先建立的谷维素对照样品的hplc指纹图谱进行比较，若比较结果满足合格标准，则认为谷维素待测样品的质量合格。
6.步骤二中，所述谷维素对照样品的hplc指纹图谱采用步骤一中的高效液相色谱法建立，所述合格标准为待测样品的hplc指纹图谱与对照样品的hplc指纹图谱具有14个相对应的共有峰，且两份hplc指纹图谱的相似度至少为0.9。
7.步骤一中，所述谷维素的对照样品溶液、待测样品溶液的制备方法为：将谷维素对照品或待测样品磨碎后按所需比例加入无水乙醇，混合得到混合物，然后过滤，取滤液即可。
8.所述谷维素对照品或待测样品与混合物的质量体积比为28-32mg:9-11ml。
9.所述过滤具体为微孔滤膜过滤，所述微孔滤膜的孔径为0.22-0.45μm。
10.所述混合具体为超声处理5-15min。
11.步骤一中，所述高效液相色谱法采用二极管阵列检测器检测波长，所述检测的波长范围为320nm-330nm。
12.步骤一中，所述高效液相色谱法采用的色谱柱为waters xbridge bch c18柱，4.6*150mm，3.5μm，流动相流速为0.8-1.2ml/min，进样量为5μl，柱温为34-36℃。
13.步骤一中，所述溶液a中甲醇与冰醋酸的体积比为900-1100ml:2ml，所述冰醋酸为体积百分比含量为0.3-1%的冰醋酸水溶液。
14.步骤一中，所述溶液相b中水与冰醋酸的体积比为900-1100ml:2ml，所述冰醋酸为体积百分比含量为0.3-1%的冰醋酸水溶液。
15.与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明通过特定的色谱条件检测得到谷维素的对照样品、待测样品的指纹图谱，将待测样品的指纹图谱与对照样品的指纹图谱进行比较，若待测样品的指纹图谱呈现14个与对照样品的指纹图谱相应的共有峰，且待测样品的指纹图谱与对照样品的指纹图谱的相似度不低于0.90，则认为该谷维素待测样品的质量合格，该方法通过合理设置色谱条件，使最终得到的指纹图谱中含有14个共有峰，对其中11个特征峰进行了指认，不仅所得图谱信息量大，能全面反映谷维素有效组份的种类与数量，能较好的对其质量进行整体评价，而且色谱时间短，效率高。因此，本发明不仅所得图谱信息量大，能准确反映谷维素质量，较好的对谷维素质量进行整体评价，而且色谱时间短，效率高。
附图说明
16.图1为实施例1中10批谷维素对照样品的色谱图。
17.图2为实施例1中谷维素对照样品的hplc指纹图谱。
18.图3为实施例1中谷维素待测样品的hplc指纹图谱。
19.图4为实施例2中10批谷维素对照样品的色谱图。
20.图5为实施例2中谷维素对照样品的hplc指纹图谱。
21.图6为实施例2中谷维素待测样品的hplc指纹图谱。
具体实施方式
22.下面结合说明书附图和具体实施方式对本发明作进一步的说明。
23.一种谷维素的质量检测方法，所述质量检测方法依次按照以下步骤进行：步骤一、利用高效液相色谱法对待测样品溶液进行检测，建立待测样品的hplc指纹图谱，其中，所述高效液相色谱法采用溶液a与溶液b的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱，所述溶液a为甲醇与冰醋酸的混合溶液，所述溶液相b为冰醋酸与水的混合溶液，所述梯度洗脱具体为：0-15min时流动相中溶液a的体积占比为65%、溶液b的体积占比为35%；15-26min时流动相中溶液a的体积占比由65%渐变为80%、溶液b的体积占比由35%渐变为20%；26-32min时流动相中溶液a的体积占比为80%、溶液b的体积占比为20%；32-33min时流动相中溶液a的体积占比由80%渐变为65%、溶液b的体积占比由20%渐变为35%；33-38min时流动相中溶液a的体积占比为65%、溶液b的体积占比为35%；步骤二、将待测样品的hplc指纹图谱与预先建立的谷维素对照样品的hplc指纹图谱进行比较，若比较结果满足合格标准，则认为谷维素待测样品的质量合格。
24.步骤二中，所述谷维素对照样品的hplc指纹图谱采用步骤一中的高效液相色谱法建立，所述合格标准为待测样品的hplc指纹图谱与对照样品的hplc指纹图谱具有14个相对应的共有峰，且两份hplc指纹图谱的相似度至少为0.9。
25.步骤一中，所述谷维素的对照样品溶液、待测样品溶液的制备方法为：将谷维素对照品或待测样品磨碎后按所需比例加入无水乙醇，混合得到混合物，然后过滤，取滤液即可。
26.所述谷维素对照品或待测样品与混合物的质量体积比为28-32mg:9-11ml。
27.所述过滤具体为微孔滤膜过滤，所述微孔滤膜的孔径为0.22-0.45μm。
28.所述混合具体为超声处理5-15min。
29.步骤一中，所述高效液相色谱法采用二极管阵列检测器检测波长，所述检测的波长范围为320nm-330nm。
30.步骤一中，所述高效液相色谱法采用的色谱柱为waters xbridge bch c18柱，4.6*150mm，3.5μm，流动相流速为0.8-1.2ml/min、进样量为5μl，柱温为34-36℃。
31.步骤一中，所述溶液a中甲醇与冰醋酸的体积比为900-1100ml:2ml，所述冰醋酸为体积百分比含量为0.3-1%的冰醋酸水溶液。
32.步骤一中，所述溶液相b中水与冰醋酸的体积比为900-1100ml:2ml，所述冰醋酸为体积百分比含量为0.3-1%的冰醋酸水溶液。
33.本发明的原理说明如下：本发明一种谷维素的质量检测方法先采用特定色谱条件对来自不同厂家、不同批号的多份谷维素对照样品进行hplc分析，得到多份谷维素对照样品的色谱图，然后通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统对多份谷维素对照样品的色谱图进行合成，得到谷维素对照样品的hplc指纹图谱，该谷维素对照样品的hplc指纹图谱具有14个共有峰，可指认11个特征峰，因此该方法能够将谷维素有效组份与杂质进行分离，提高了谷维素质量评估的精准度和可靠性，且分离时间少于40min。
34.实施例1：
一种谷维素的质量检测方法，依次按照以下步骤进行：步骤一、建立谷维素对照样品的hplc指纹图谱首先，将10批谷维素对照样品研磨成粉末，所述10批谷维素对照样品均为谷维素制剂，其厂家和批号见表1：表1谷维素对照样品的厂家和批号。
35.然后，将谷维素对照样品粉末制备成谷维素对照样品溶液，其制备过程具体为：由于不同厂家的谷维素制剂中谷维素的含量不同，精密称取包含有30mg谷维素的谷维素对照样品粉末置于10ml量瓶中，加入适量无水乙醇后超声处理10min，使谷维素对照样品粉末溶解，放凉后补足损失的无水乙醇并定容至刻度，最后采用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液即可；其次，将10份谷维素对照样品溶液分别注入高效液相色谱仪中进行hplc检测，得到10份谷维素对照样品的色谱图，该色谱图如图1所示，其色谱条件具体为：色谱柱waters xbridge bch c18柱，4.6*150mm，3.5μm，进样量为5μl，柱温为35℃，流动相流速为1.0ml/min，溶液a为体积比为1000ml:2ml的甲醇与冰醋酸的混合溶液，溶液b为体积比为1000ml:2ml的水与冰醋酸的混合溶液，所述冰醋酸为体积百分比含量为0.5%的冰醋酸水溶液，梯度洗脱0-15min时流动相中溶液a的体积占比为65%、溶液b的体积占比为35%，15-26min时流动相中溶液a的体积占比由65%渐变为80%、溶液b的体积占比由35%渐变为20%，26-32min时流动相中溶液a的体积占比为80%、溶液b的体积占比为20%，32-33min时流动相中溶液a的体积占比由80%渐变为65%、溶液b的体积占比由20%渐变为35%，33-38min时流动相中溶液a的体积占比为65%、溶液b的体积占比为35%，采用二极管阵列检测器检测波长325nm；最后，将10份谷维素对照样品的色谱图在“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版”软件中合成，得到谷维素对照样品的hplc指纹图谱，该hplc指纹图谱如图2所示，可确认14个共有峰，该14个共有峰中，峰5为环木菠萝烯醇阿魏酸酯，峰4为3-o-(trans-4-feruloyl)-β-sitostanol，峰6为豆甾醇阿魏酸酯，峰7为菜油甾烷醇阿魏酸酯，峰8为24-甲
基环木菠萝烯醇阿魏酸酯，峰9为24-亚甲基环木菠萝醇阿魏酸酯，峰10为环米糠醇阿魏酸酯，峰11为环木菠萝醇阿魏酸酯，峰12为β-谷甾醇阿魏酸酯，峰13为二氢-谷烷醇阿魏酸酯，峰14为cycloartanol，其余3个峰未确认归属，为含量极低的杂质成分；步骤二、建立谷维素待测样品的hplc指纹图谱首先将厂家为上海青平药业、批号为07210904的谷维素待测样品研磨成粉末，然后将其制备成待测样品溶液，最后分别对待测样品溶液进行hplc检测，得到的色谱图即为谷维素待测样品的hplc指纹图谱，所述样品的研磨、样品溶液的制备、hplc检测的色谱条件均与步骤一相同，所述待测样品的hplc指纹图谱如图3所示；步骤三、质量检测与分析在“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版”软件中对待测样品的hplc指纹图谱与对照样品的hplc指纹图谱进行相似度分析，得到待测样品的hplc指纹图谱与对照样品的hplc指纹图谱的相似度为0.992，且结合图2、图3可知，该待测样品的hplc指纹图谱具有14个与对照样品的hplc指纹图谱相对应的共有峰，可以认为该谷维素待测样品的质量合格。
36.实施例2：与实施例1的不同之处在于：步骤一中，所述10批谷维素对照样品均为来自湖北省长投天星制药有限公司的谷维素原料药，其批号见表2：表2 谷维素对照样品的批号。
37.所述10份谷维素对照样品溶液的色谱图见图4，得到的谷维素对照样品的hplc指纹图谱见图5；步骤二中，所述谷维素待测样品的厂家为湖北天星长投制药有限公司、批号为20220105，得到待测样品的hplc指纹图谱见图6；步骤三中，所述待测样品的hplc指纹图谱与对照样品的hplc指纹图谱的相似度为
0.998，且结合图5、图6可知，该待测样品的hplc指纹图谱具有14个与对照样品的hplc指纹图谱相对应的共有峰，可以认为该谷维素待测样品的质量合格。
技术特征：1.一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：所述质量检测方法依次按照以下步骤进行：步骤一、利用高效液相色谱法对待测样品溶液进行检测，建立待测样品的hplc指纹图谱，其中，所述高效液相色谱法采用溶液a与溶液b的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱，所述溶液a为甲醇与冰醋酸的混合溶液，所述溶液相b为冰醋酸与水的混合溶液，所述梯度洗脱具体为：0-15min时流动相中溶液a的体积占比为65%、溶液b的体积占比为35%；15-26min时流动相中溶液a的体积占比由65%渐变为80%、溶液b的体积占比由35%渐变为20%；26-32min时流动相中溶液a的体积占比为80%、溶液b的体积占比为20%；32-33min时流动相中溶液a的体积占比由80%渐变为65%、溶液b的体积占比由20%渐变为35%；33-38min时流动相中溶液a的体积占比为65%、溶液b的体积占比为35%；步骤二、将待测样品的hplc指纹图谱与预先建立的谷维素对照样品的hplc指纹图谱进行比较，若比较结果满足合格标准，则认为谷维素待测样品的质量合格。2.根据权利要求1所述的一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：步骤二中，所述谷维素对照样品的hplc指纹图谱采用步骤一中的高效液相色谱法建立，所述合格标准为待测样品的hplc指纹图谱与对照样品的hplc指纹图谱具有14个相对应的共有峰，且两份hplc指纹图谱的相似度至少为0.9。3.根据权利要求1或2所述的一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：步骤一中，所述谷维素的对照样品溶液、待测样品溶液的制备方法为：将谷维素对照品或待测样品磨碎后按所需比例加入无水乙醇，混合得到混合物，然后过滤，取滤液即可。4.根据权利要求3所述的一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：所述谷维素对照品或待测样品与混合物的质量体积比为28-32mg:9-11ml。5.根据权利要求3所述的一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：所述过滤具体为微孔滤膜过滤，所述微孔滤膜的孔径为0.22-0.45μm。6.根据权利要求3所述的一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：所述混合具体为超声处理5-15min。7.根据权利要求1或2所述的一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：步骤一中，所述高效液相色谱法采用二极管阵列检测器检测波长，所述检测的波长范围为320nm-330nm。8.根据权利要求1或2所述的一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：步骤一中，所述高效液相色谱法采用的色谱柱为waters xbridge bch c18柱，4.6*150mm，3.5μm，流动相流速为0.8-1.2ml/min，进样量为5μl，柱温为34-36℃。9.根据权利要求1或2所述的一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：步骤一中，所述溶液a中甲醇与冰醋酸的体积比为900-1100ml:2ml，所述冰醋酸为体积百分比含量为0.3-1%的冰醋酸水溶液。10.根据权利要求1或2所述的一种谷维素的质量检测方法，其特征在于：步骤一中，所述溶液相b中水与冰醋酸的体积比为900-1100ml:2ml，所述冰醋酸为体积百分比含量为
0.3-1%的冰醋酸水溶液。
技术总结一种谷维素的质量检测方法，通过特定色谱条件得到谷维素对照样品、待测样品指纹图谱，将两者进行比较，若待测样品指纹图谱呈现14个与对照样品指纹图谱相应的共有峰且两者相似度不低于0.90，则认为该待测样品质量合格，色谱条件为以溶液A与溶液B的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱，溶液A为甲醇与冰醋酸的混合液、溶液B为冰醋酸与水的混合液，0-15min时65%溶液A、35%溶液B，15-26min时65%渐变80%溶液A、35%渐变20%溶液B，26-32min时80%溶液A、20%溶液B，32-33min时80%渐变65%溶液A、20%渐变35%溶液B，33-38min时65%溶液A、35%溶液B。本方法所得图谱信息量大，能更好的对谷维素质量做整体评价，且色谱时间短，效率高。效率高。效率高。
技术研发人员：杨若婧 黄琨 王玲玲 纪道斌 张周菊 廖双文 范婷婷 姚莎莎 薛琪 朱海游 熊操
受保护的技术使用者：湖北省长投天星制药有限公司
技术研发日：2022.07.22
技术公布日：2022/11/1
