1.本发明涉及中药检测技术领域，具体是一种银翘感冒袋泡剂中多种成分含量测定的方法以及银翘感冒袋泡剂的一测多评检测法。
背景技术：2.银翘感冒袋泡剂是我院自制的中药复方制剂，由山银花、连翘、炒牛蒡子、甘草等8味中药配伍而成，辛凉解表，清热解毒，临床上用于治疗风热感冒、发热、头痛、咳嗽及咽喉疼痛等病症，且疗效确切。方中山银花和连翘均做为君药，不仅能辛凉解表，清热解毒，还可发挥芳香避秽的作用。有相关文献报道，两药所含活性成分绿原酸、连翘苷和连翘酯苷a均具有抗菌和抗炎作用。此外，炒牛蒡子与甘草分别能发挥散风清热，清热解毒而利咽喉的作用，据现代药理学研究表明，它们的主要成分牛蒡苷与甘草苷也分别可达到抗病毒和抗炎的效果。
3.由于中药复方制剂有效成分复杂多样，单一成分的含量测定无法对该制剂的质量进行整体控制，即多指标成分的质量控制应逐步运用于质量控制之中。然而，多指标控制模式仍存在对照品不易获得、用量大，检验成本高等缺陷。
4.因此，开发一种能同时测定银翘感冒袋泡剂中可全面评价银翘感冒袋泡剂的整体质量的多种成分，并提供一种能通过测定1种稳定易得、价格低廉的有效成分，运用相对校正因子手段对其他成分的含量进行计算的银翘感冒袋泡剂一测多评法，都是目前所急需的。
技术实现要素：5.为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种银翘感冒袋泡剂中多种成分含量测定的方法以及银翘感冒袋泡剂的一测多评检测法，具体如下：
6.一种银翘感冒袋泡剂中多种成分含量测定的方法，采用uplc方法进行测定，具体色谱条件如下：色谱柱：shimazu inertsil ods-3(150 mm
×
4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(a)-0.2％磷酸(b)。
7.进一步的，所述uplc方法的具体洗脱程序如下：梯度洗脱0～6.0 min，7.0％a
→
10.0％a；6.0～16.0min，10.0％a；16.0～80.0min， 10.0％a
→
17.0％a；80.0～86.0min，17.0％a；86.0～116.0min，17.0％
→
23.0％a；116.0～120.0min，23.0％a；120.0～125.0min，23.0％
→
40％a；体积流量1.0ml/min；柱温35℃；检测波长220nm；进样量5μl。
8.进一步的，所述银翘感冒袋泡剂，是柳州市中医医院(柳州市壮医医院)自制的中药复方制剂，其中具体组分为：山银花、连翘、薄荷、桔梗、荆芥、牛蒡子、淡竹叶、甘草。
9.进一步的，所述多种成分含量测定，具体是绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷。
10.进一步的，其中供试品溶液，是取银翘感冒袋泡剂0.5g，精密称定，置于具塞锥形
瓶中，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，70％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。
11.进一步的，其中混合对照品溶液，是分别取绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷对照品，精密称定，70％甲醇制成质量浓度分别为16.755、1.272、8.290、1.830、6.300mg/ml的贮备液，再分别精密吸取1.0ml，70％甲醇定容至50ml，即得。
12.进一步的，所述混合对照品溶液，其中绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷的浓度分别为335.1、25.4、165.8、36.6、126.0 μg/ml。
13.一种银翘感冒袋泡剂的一测多评检测法，采用连翘酯苷a为内标进行一测多评，建立连翘酯苷a与绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷的相对校正因子f，通过相对校正因子f来计算绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷的含量。
14.进一步的，其具体步骤如下：
15.(1)色谱条件：
16.色谱柱：shimazu inertsil ods-3(150mm
×
4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(a)-0.2％磷酸(b)，梯度洗脱(0～6.0min，7.0％a
ꢀ→
10.0％a；6.0～16.0min，10.0％a；16.0～80.0min，10.0％a
→
17.0％a； 80.0～86.0min，17.0％a；86.0～116.0min，17.0％
→
23.0％a；116.0～120.0 min，23.0％a；120.0～125.0min，23.0％
→
40％a)；体积流量1.0ml/min；柱温35℃；检测波长220nm；进样量5μl；
17.(2)混合对照品溶液制备：
18.分别取绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷对照品，用70％甲醇制成质量浓度分别为16.755、1.272、8.290、1.830、6.300 mg/ml的贮备液，再分别精密吸取1.0ml，70％甲醇定容至50ml，即得，此时各贮备液浓度分别为335.1、25.4、165.8、36.6、126.0μg/ml；
19.(3)供试品溶液制备：
20.取银翘感冒袋泡剂，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入 70％甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，70％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得；
21.(4)相对校正因子的计算：
22.计算其他4种成分的绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷相对于连翘酯苷a平均相对校正因子；
23.(5)样品含有量测定：
24.按照步骤(3)的方法制备供试品溶液，在步骤(1)的色谱条件下进样测定，计算各成分含有量。
25.进一步的，所述步骤(4)相对校正因子的计算，是采用多点校正法，具体是将多个浓度点计算所得到的校正因子的平均值作为相对校正因子；计算公式为：fk/s＝(csak)/(ckas)；待测成分浓度计算公式为：ck
′
＝(csak
′
)/(fk/sas)；两式中fk/s为校正因子， cs为内标物浓度，as为内标物峰面积，ck为其他对照组分浓度， ak为其他对照组分峰面积，ck
′
为待测组分浓度，ak
′
为待测组分峰面积；以连翘酯苷a为内标，计算其他4种成分的绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷相对于内标平均相对校正因子。
26.进一步的，所述步骤(4)相对校正因子的计算，是采用斜率校正法，具体是通过所得的绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷标准曲线，用x＝y/a进行计算；借助x与y的
斜率之比计算 fk/s(fk/s＝ak/as)；ck
′
＝ak
′
/(as
×
fk/s)，as为内标斜率，ak为其他对照组分斜率；采用斜率校正法进行运算，即可获得绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷对于连翘酯苷a的fk/s。
27.进一步的，所述步骤(4)相对校正因子的计算，是采用定量因子校正法，具体是在ck
′
＝ak
′
/(asfk/s)中，需满足在同一间实验室、同一台仪器、同一个色谱条件下，尤其在大量的供试品需要短期内复检时，因as基本一致，fk/s也是固定值，故可先以公式ak＝asfk/s 推测计算出定量因子ak，并也可直接以待测样的峰面积ak
′
快速推测出其量(ck
′
＝ak
′
/ak)。综上可知，定量因子实际上就是该标准曲线中各成分的斜率值。运用该法首先应当得到as值，同时还需保证as值恒定。定量因子ak只在同一台仪器以及相同的色谱的条件下短期内维持恒定，而不同仪器的定量因子则应分别建立。另外，采取定量因子计算的fk/s为斜率校正法所得，因而其所得结果与斜率校正法保持一致，则有绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷的定量因子分别为11021.1763、13253.895、7480.144、8109.103、 6995.851。
28.进一步的，所述步骤(5)的计算各成分含有量，是通过测定连翘酯苷a，然后通过相应的相对校正因子计算出绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷的含量。
29.银翘感冒袋泡剂中把山银花和连翘中所含主要成分绿原酸、连翘酯苷a、连翘苷，炒牛蒡子及甘草所含牛蒡苷和甘草苷作为指标成分，可较全面评价银翘感冒袋泡剂的整体质量。
30.使用一测多评法，则通过测定1种稳定易得、价格低廉的有效成分，运用相对校正因子手段对其他成分的含量进行计算，便可达到降低成本的效果。此法主要是运用了中药所含的成分与成分之间存在的内在函数关系来实现多种成分同时进行含量测定的一种手段。
31.本研究曾选择绿原酸、连翘酯苷a和牛蒡苷作为内标，采用三种校正法的一测多评分别测定各目标成分的含量，在与外标法及回归方程法的计算结果差异比较中发现，当连翘酯苷a设定为内标时，相对偏差波动范围较小，故选择含量高、出峰时间居，且价廉易得的连翘酯苷a作为内标。
32.因此，发明人采用hplc一测多评法，将连翘酯苷a作为内标，同时测定银翘感冒袋泡剂中绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷与牛蒡苷的含量，以期建立该制剂多指标成分质量控制模式，并能够较为全面评价其整体质量提供依据。
33.申请人开展了不同液相色谱系统以及不同品牌的色谱柱对该制剂5种成分间相对校正因子的影响试验研究，结果显示各个组分校正因子当的rsd均小于5.0％。此外，将3种一测多评法与外标法、回归方程法进行比较，所得结果均无显著性差异。其中，定量因子计算所用fk/s实际上就是斜率校正法所得，因此该计算结果与斜率校正法一致。
34.待测成分色谱峰的准确定位是确保一测多评法得以应用的前提条件，通常选用的定位方法有保留时间差或相对保留时间法。据此，本研究采用上述两种方法开展试验，当以保留时间差法进行定位，各个待测成分与连翘酯苷a在不同色谱柱上的rsd均大于5.0％；而当以相对保留时间法进行定位时，计算的相对保留时间rsd则落在 5.0％范围内，则应当选取相对保留时间法定位。
35.与现有技术相比，本发明创造的技术效果体现在：
36.(1)本发明采用uplc方法，采用色谱柱：shimazu inertsil ods-3 (150mm
×
4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(a)-0.2％磷酸(b)，梯度洗脱(0～6.0min，7.0％a
→
10.0％a；6.0～16.0min，10.0％a； 16.0～80.0min，10.0％a
→
17.0％a；80.0～86.0min，17.0％a；86.0～116.0 min，17.0％
→
23.0％a；116.0～120.0min，23.0％a；120.0～125.0min， 23.0％
→
40％a)；体积流量1.0ml/min；柱温35℃；检测波长220nm；进样量5μl。按照本发明的方法，可同时分离银翘感冒袋泡剂中绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷，且分离效果好。该方法的绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷平均加样回收率 (rsd)分别为95.41％(0.32％)、100.10％(0.96％)、98.00％(0.18％)、 100.68％(1.37％)、99.01％(0.57％)。并且该方法简便、快速、准确且重复性好，可用于银翘感冒袋泡剂中绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷的含量测定，为银翘感冒袋泡剂的质量控制提供参考依据。
37.(2)一测多评法既能够在缺少对照品的情况下进行定量分析和质量控制，又可较大程度地降低多成分含量测定的检验成本。本研究建立了hplc一测多评测定银翘感冒袋泡剂中5种成分含量，实现了多指标组分的同步测定。另外，借助相对保留时间法对各色谱峰进行准确定位，结果可知，基于3种校正因子的一测多评法与外标法、回归方程法在多指标成分定性、定量上没有显著性差异，可将其作为 1种方便快捷且准确的质量评价模式，用于银翘感冒袋泡剂中5种成分的含量测定。
附图说明
38.图1是各成分hplc色谱图；
39.其中a：混合对照品；b：银翘感冒袋泡剂；c：缺山银花阴性样品；d：缺甘草阴性样品；e：缺连翘阴性样品；f：缺炒牛蒡子阴性样品；1：绿原酸；2：甘草苷；3：连翘酯苷a；4：连翘苷；5：牛蒡苷。
具体实施方式
40.下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
41.实施例：
42.1仪器与试药
43.1.1仪器lc-20at型高效液相色谱仪(日本shimazu公司)；waterse2695型高效液相色谱仪(美国waters公司)；xs205du型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)；ae200型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)； sk8200hp型超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。
44.1.2试药绿原酸对照品(批号must-20032310，含量99.73％)，连翘酯苷a对照品(批号must-20032804，含量98.6％)和牛蒡苷对照品 (批号must-20041510，含量97.79％)来自于成都曼斯特生物科技有限公司；连翘苷对照品(批号110821-200609，含量94.9％)和甘草苷对照品(批号111610-201607，含量93.1％)均购于中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯；银翘感冒袋泡剂(规格：每袋装4g，批号20200401、20200402、20200403)来源于柳州市中医医院(柳州市壮医医院)。
45.2方法与结果
46.2.1色谱条件色谱柱：shimazu inertsil ods-3(150mm
×
4.6mm，5μm)；流动相：乙
腈(a)-0.2％磷酸(b)，梯度洗脱(0～6.0min，7.0％a
→
10.0％a；6.0～16.0min，10.0％a；16.0～80.0min，10.0％a
→
17.0％a；80.0～86.0 min，17.0％a；86.0～116.0min，17.0％
→
23.0％a；116.0～120.0min， 23.0％a；120.0～125.0min，23.0％
→
40％a)；体积流量1.0ml/min；柱温35℃；检测波长220nm；进样量5μl。
47.2.2溶液的制备
48.2.2.1混合对照品溶液制备分别取绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷对照品适量，精密称定，70％甲醇制成质量浓度分别为 16.755、1.272、8.290、1.830、6.300mg/ml的贮备液，再分别精密吸取1.0ml，70％甲醇定容至50ml，即得(浓度分别为335.1、25.4、165.8、36.6、126.0μg/ml)。
49.2.2.2供试品溶液制备取在重量差异下的银翘感冒袋泡剂10袋，混匀，取约0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50 ml，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，70％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。
50.2.2.3阴性样品溶液制备按照银翘感冒袋泡剂的制备工艺和处方比例，分别制备缺山银花、缺连翘、缺炒牛蒡子、缺甘草的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备，即得。
51.2.3系统适应性和专属性试验
52.吸取上述混合对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，在“2.1”项下色谱条件进样测定，结果见图1。由图1可知，绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷这4个目标色谱峰分别与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，理论塔板数以各色谱峰计算均在10000以上，阴性样品对该制剂中的这4种成分的测定无干扰，表明此方法专属性良好。
53.2.4方法学考察
54.2.4.1线性关系考察精密吸取“2.2.1”项下对照品贮备液各1.0ml，用70％甲醇定容至25ml的容量瓶中，摇匀，作为对照品溶液1，接着再精密吸取适量，70％甲醇依次稀释2、4、5、6、8倍，分别作为对照品溶液2～6，按“2.1”项下的色谱条件进样测定。以对照品质量浓度为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，进行回归。结果见表1，可知各成分在各自范围内所呈的线性关系良好。
55.表15种成分的线性关系
[0056][0057][0058]
2.4.2精密度试验取“2.2.1”项下的混合对照品溶液，在“2.1”项的色谱条件下进样测定6次，测得绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷峰面积的rsd分别为0.29％、0.48％、0.29％、0.50％、 0.07％，提示该仪器有良好的精密度。
[0059]
2.4.3稳定性试验取同一份供试品溶液，在“2.1”项的色谱条件下，分别于0、4、8、12、24、36h下进样测定，绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷峰面积的rsd分别为0.37％、0.20％、0.47％、0.53％、0.45％，表明银翘感冒袋泡剂供试品溶液36h内有良好的稳定性。
[0060]
2.4.4重复性试验取同一批袋泡剂，按“2.2.2”项下平行制备6份供试品溶液，并在“2.1”项的色谱条件下测定，可知绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷含有量rsd分别为0.55％、1.16％、0.34％、 0.58％、0.82％，说明该方法有良好的重复性。
[0061]
2.4.5加样回收率试验取各成分含量已知的同一批袋泡剂粉末约 0.25g，精密称定，共9份，按2020年版《中国药典》四部要求，精密加入对照品溶液(绿原酸3.428mg/ml、甘草苷0.265mg/ml、连翘酯苷a1.451mg/ml、连翘苷0.668mg/ml、牛蒡苷1.365mg/ml)0.8、 1.0、1.2ml各3份，水平分别约为80％、100％、120％，按“2.2.2”下制备供试品溶液，在“2.1”项的色谱条件下进样测定，计算回收率。如表2所示，绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷平均加样回收率(rsd)分别为95.41％(0.32％)、100.10％(0.96％)、98.00％(0.18％)、100.68％(1.37％)、99.01％(0.57％)。
[0062]
表2 5种成分的加样回收率试验结果
[0063]
[0064][0065]
2.5一测多评法的建立
[0066]
2.5.1多点校正法将多个浓度点计算所得到的校正因子的平均值作为相对校正因子。计算公式为：fk/s＝(csak)/(ckas)。待测成分浓度计算公式为：ck
′
＝(csak
′
)/(fk/sas)。两式中fk/s为校正因子，cs为内标物浓度，as为内标物峰面积，ck为其他对照组分浓度，ak为其他对照组分峰面积，ck
′
为待测组分浓度，ak
′
为待测组分峰面积。因此，精密吸取“2.4.1”项下对照品溶液1～6，在“2.1”项的色谱条件下进样测定，以连翘酯苷a为内标，计算其他4种成分的绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷相对于内标平均相对校正因子fk/s 分别为1.451、1.802、1.073和0.927(见表3)。
[0067]
表3以连翘酯苷a为参照的相对校正因子(多点校正法)
20200403)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，分别采用回归方程法、外标法和3种一测多评法计算含有量(见表6)。依据结果有，这五种方法无明显差异(rsd＜2.0％)。
[0074]
表4不同仪器和不同色谱柱对相对校正因子的影响
[0075][0076]
表5不同仪器和不同色谱柱下的各色谱峰相对保留时间
[0077][0078]
表6银翘感冒袋泡剂5种成分不同方法定量测定结果(mg/袋,n＝3)
[0079]
[0080][0081]
3讨论
[0082]
本研究还开展了不同液相色谱系统以及不同品牌的色谱柱对该制剂5种成分间相对校正因子的影响试验研究，结果显示各个组分校正因子当的rsd均小于5.0％。此外，将3种一测多评法与外标法、回归方程法进行比较，所得结果均无显著性差异。其中，定量因子计算所用fk/s实际上就是斜率校正法所得，因此该计算结果与斜率校正法一致。
[0083]
待测成分色谱峰的准确定位是确保一测多评法得以应用的前提条件，通常选用的定位方法有保留时间差或相对保留时间法。据此，本研究采用上述两种方法开展试验，当以保留时间差法进行定位，各个待测成分与连翘酯苷a在不同色谱柱上的rsd均大于5.0％；而当以相对保留时间法进行定位时，计算的相对保留时间rsd则落在 5.0％范围内，则应当选取相对保留时间法定位。
[0084]
本技术的一测多评法既能够在缺少对照品的情况下进行定量分析和质量控制，又可较大程度地降低多成分含量测定的检验成本。本研究建立了hplc一测多评测定银翘感冒袋泡剂中5种成分含量，实现了多指标组分的同步测定。另外，借助相对保留时间法对各色谱峰进行准确定位，结果可知，基于3种校正因子的一测多评法与外标法、回归方程法在多指标成分定性、定量上没有显著性差异，可将其作为 1种方便快捷且准确的质量评价模式，用于银翘感冒袋泡剂中5种成分的含量测定。
[0085]
并且按照本发明的方法，可同时分离银翘感冒袋泡剂中绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷，且分离效果好。该方法的绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷平均加样回收率(rsd) 分别为95.41％(0.32％)、100.10％(0.96％)、98.00％(0.18％)、 100.68％(1.37％)、99.01％(0.57％)。并且该方法简便、快速、准确且重复性好，可用于银翘感冒袋泡剂中绿原酸、甘草苷、连翘酯苷 a、连翘苷、牛蒡苷的含量测定，为银翘感冒袋泡剂的质量控制提供参考依据。
[0086]
最后，应当指出，以上实施例仅是本发明较有代表性的例子。显然，本发明的技术
方案并不限于上述实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
技术特征：1.一种银翘感冒袋泡剂中多种成分含量测定的方法，其特征在于，采用uplc方法进行测定，具体色谱条件如下：色谱柱：shimazu inertsilods-3(150mm
×
4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(a)-0.2％磷酸(b)。2.根据权利要求1所述的银翘感冒袋泡剂中多种成分含量测定的方法，其特征在于，uplc方法的具体洗脱程序如下：梯度洗脱0～6.0min，7.0％a
→
10.0％a；6.0～16.0min，10.0％a；16.0～80.0min，10.0％a
→
17.0％a；80.0～86.0min，17.0％a；86.0～116.0min，17.0％
→
23.0％a；116.0～120.0min，23.0％a；120.0～125.0min，23.0％
→
40％a；体积流量1.0ml/min；柱温35℃；检测波长220nm；进样量5μl。3.根据权利要求1所述的银翘感冒袋泡剂中多种成分含量测定的方法，其特征在于，所述多种成分含量测定，具体是绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷。4.根据权利要求1所述的银翘感冒袋泡剂中多种成分含量测定的方法，其特征在于，其中供试品溶液的制备方法，是取银翘感冒袋泡剂，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，70％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。5.根据权利要求1所述的银翘感冒袋泡剂中多种成分含量测定的方法，其特征在于，其中混合对照品溶液，是分别取绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷对照品，精密称定，70％甲醇制成质量浓度分别为16.755、1.272、8.290、1.830、6.300mg/ml的贮备液，再分别精密吸取1.0ml，70％甲醇定容至50ml，即得，其中绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷的浓度分别为335.1、25.4、165.8、36.6、126.0μg/ml。6.一种银翘感冒袋泡剂的一测多评检测法，其特征在于，采用连翘酯苷a为内标进行一测多评，建立连翘酯苷a与绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷的相对校正因子f，通过相对校正因子f来计算绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷的含量。7.根据权利要求6所述的一测多评检测法，其特征在于，具体步骤如下：(1)色谱条件：色谱柱：shimazu inertsil ods-3(150mm
×
4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(a)-0.2％磷酸(b)，梯度洗脱(0～6.0min，7.0％a
→
10.0％a；6.0～16.0min，10.0％a；16.0～80.0min，10.0％a
→
17.0％a；80.0～86.0min，17.0％a；86.0～116.0min，17.0％
→
23.0％a；116.0～120.0min，23.0％a；120.0～125.0min，23.0％
→
40％a)；体积流量1.0ml/min；柱温35℃；检测波长220nm；进样量5μl；(2)混合对照品溶液制备：分别取绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷对照品，用70％甲醇制成质量浓度分别为16.755、1.272、8.290、1.830、6.300mg/ml的贮备液，再分别精密吸取1.0ml，70％甲醇定容至50ml，即得，此时各贮备液浓度分别为335.1、25.4、165.8、36.6、126.0μg/ml；(3)供试品溶液制备：取银翘感冒袋泡剂，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，70％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得；(4)相对校正因子的计算：计算其他4种成分的绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷相对于连翘酯苷a平均相对校正因子；
(5)样品含有量测定：按照步骤(3)的方法制备供试品溶液，在步骤(1)的色谱条件下进样测定，计算各成分含有量。8.根据权利要求7所述的一测多评检测法，其特征在于，所述步骤(4)相对校正因子的计算，是采用多点校正法，具体是将多个浓度点计算所得到的校正因子的平均值作为相对校正因子；计算公式为：fk/s＝(csak)/(ckas)；待测成分浓度计算公式为：ck
′
＝(csak
′
)/(fk/sas)；两式中fk/s为校正因子，cs为内标物浓度，as为内标物峰面积，ck为其他对照组分浓度，ak为其他对照组分峰面积，ck
′
为待测组分浓度，ak
′
为待测组分峰面积；以连翘酯苷a为内标，计算其他4种成分的绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷相对于内标平均相对校正因子。9.根据权利要求7所述的一测多评检测法，其特征在于，所述步骤(4)相对校正因子的计算，是采用斜率校正法，具体是通过所得的绿原酸、甘草苷、连翘酯苷a、连翘苷、牛蒡苷标准曲线，用x＝y/a进行计算；借助x与y的斜率之比计算fk/s(fk/s＝ak/as)；ck
′
＝ak
′
/(as
×
fk/s)，as为内标斜率，ak为其他对照组分斜率；采用斜率校正法进行运算，即可获得绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷对于连翘酯苷a的fk/s。10.根据权利要求7所述的一测多评检测法，其特征在于，所述步骤(5)的计算各成分含有量，是通过测定连翘酯苷a，然后通过相应的相对校正因子计算出绿原酸、甘草苷、连翘苷、牛蒡苷的含量。
技术总结本发明涉及中药检测技术领域，具体是一种银翘感冒袋泡剂中多种成分含量测定的方法以及银翘感冒袋泡剂的一测多评检测法。本发明采用UPLC方法，采用色谱柱：ShimazuInertsilODS-3(150mm
技术研发人员：梁学政 邱琼华 李隽永 韦倩 张蓓
受保护的技术使用者：柳州市中医医院（柳州市壮医医院）
技术研发日：2022.07.13
技术公布日：2022/11/1
