本发明涉及生物制药，尤其涉及一种具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物及其制备方法和应用。
背景技术：
1、恶性肿瘤仍然是严重威胁人类生命的重大疾病。
2、化疗是目前治疗癌症最有效的手段之一，手术和放疗属于局部治疗，只对治疗部位的肿瘤有效，对于潜在的转移病灶和已经发生临床转移的癌症就难以发挥有效治疗。而化疗是一种全身治疗的手段，化疗药物都会随着血液循环遍布全身的绝大部分器官和组织。
3、目前，化疗广泛应用于肿瘤患者的临床治疗，但在杀灭癌细胞的同时也会不可避免地损伤人体正常细胞，从而出现多种不良反应，影响肿瘤患者的生存时间和生活质量。目前增强化疗药物的疗效，提高患者的生活质量，延长肿瘤患者的生存时间一直是抗肿瘤药物研究领域的热点。
4、植物多糖是从天然植物中提取纯化得到的一种成分，因其广泛的生物活性、与人体相容性较好、毒副作用小等特点，成为抗肿瘤领域的研究热点。
5、灰树花是一种食药兼用的大型真菌，其中灰树花多糖是灰树花中含量较高的物质，也是其主要功能性成分之一。目前可以从灰树花子实体、菌丝体以及发酵液中提取灰树花多糖。国内外的研究已经证实灰树花多糖在体外具有防癌疗效，但尚未有报道表明灰树花多糖具有增强化疗疗效的作用。
技术实现思路
1、本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物及其制备方法和应用。
2、一种具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法，包括如下步骤：
3、s1、向灰树花子实体中加入去离子水研磨10-20min，加入至去离子水中搅拌10-30min，降至-20～-40℃，保温1-2h，升至30-40℃，超声处理1-2h，静置10-30min，降温至-50～-60℃，保温1-2h，恢复至室温，抽滤得到提取液a；
4、s2、向s1所得滤渣中加入水超声处理1-2h，抽滤得到提取液b；合并提取液a与提取液b，搅拌状态下紫外处理1-2min，紫外功率为13-17w，浓缩，加入乙醇搅拌10-30min，静置5-10h，过滤，收集沉淀，真空干燥得到粗品；
5、s3、向粗品加入乙醇搅拌10-20min，静置3-5h，收集沉淀，真空干燥，加入乙醇搅拌10-20min，静置5-10h，收集沉淀，真空干燥，3000da透析袋透析70-80h，真空干燥得到纯化料；
6、s4、将盐酸多巴胺、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物加入至乙醇水溶液中搅拌1-2h，加入1,3,5-三甲苯继续搅拌5-15min，调节体系ph值至10-12，继续搅拌1-2h，离心，去上清，冷冻干燥，洗涤1-3次，冷冻干燥，然后与纯化料、聚乙二醇400混合后加入氯仿中，室温超声10-30min，加入氢化大豆卵磷脂、卵磷脂、胆固醇混合，旋蒸，加入磷酸盐缓冲液超声处理，采用微孔滤膜进行整粒。
7、优选地，s1中，研磨压力为0.05-0.15mpa，研磨速度为1000-5000r/min。
8、优选地，s1中，超声频率为5-12khz。
9、优选地，s1中，采用灰树花子实体和去离子水按质量比为10-20：5-10进行研磨。
10、优选地，s2中，超声频率为8-15khz。
11、优选地，s2中，紫外箱中紫外灯管的处理距离为20±0.5cm。
12、优选地，s2中，浓缩至原体积30-50%。
13、优选地，s4中，盐酸多巴胺、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物、1,3,5-三甲苯、纯化料、聚乙二醇400、氢化大豆卵磷脂、卵磷脂、胆固醇的质量比为10-15：5-10：1-10：10-20：30-50：1-2：5-10：5-10。
14、优选地，s4中，乙醇水溶液的质量分数为20-40%，磷酸盐缓冲液的ph值为7.1-7.5。
15、优选地，s4中，加入磷酸盐缓冲液超声处理4-6min，超声功率为260-320w。
16、优选地，s4中，微孔滤膜的孔径为0.45μm和0.22μm。
17、一种具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物，采用上述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法制得。
18、上述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物在制备治疗胃癌或/和喉癌药物中的应用。
19、有益效果：
20、本发明不仅可有效抑制肿瘤生长、增强机体免疫应答，而且能显著增强化疗效果。
21、本发明以灰树花子实体为原料，依次经研磨、低温冷冻处理，灰树花子实体内多糖与糖蛋白的溶出效果好，经紫外处理后使其化疗活性极高，产物不仅增强肿瘤机体的免疫应答，有效提升外周血总t淋巴细胞和cd8+t细胞的数量；同时，可以有效抑制胃癌细胞和喉癌细胞的增殖，对胃癌细胞和喉癌细胞均有较好的抗肿瘤活性，尤其对胃癌细胞抑制活性极为显著，毒副作用更小。
22、本发明所得灰树花多糖-蛋白复合物具有很好的抗肿瘤活性，可以通过对活性成分分布的靶向调节作用，可有效改善药效，提高其对肿瘤的抑制作用，并降低毒副作用，同时在4℃条件下储藏12个月显示出良好的稳定性，长期使用无不良反应，可增强化疗药物疗效，具有临床应用前景，具有开发成抗肿瘤药物的前景。
1.一种具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法，其特征在于，s1中，研磨压力为0.05-0.15mpa，研磨速度为1000-5000r/min。
3.根据权利要求1所述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法，其特征在于，s1中，超声频率为5-12khz。
4.根据权利要求1所述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法，其特征在于，s2中，超声频率为8-15khz。
5.根据权利要求1所述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法，其特征在于，s2中，紫外箱中紫外灯管的处理距离为20±0.5cm。
6.根据权利要求1所述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法，其特征在于，s2中，浓缩至原体积30-50%。
7.根据权利要求1所述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法，其特征在于，s4中，盐酸多巴胺、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物、1,3,5-三甲苯、纯化料、聚乙二醇400、氢化大豆卵磷脂、卵磷脂、胆固醇的质量比为10-15：5-10：1-10：10-20：30-50：1-2：5-10：5-10。
8.根据权利要求1所述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法，其特征在于，s4中，乙醇水溶液的质量分数为20-40%，磷酸盐缓冲液的ph值为7.1-7.5。
9.一种具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物，其特征在于，采用权利要求1-8任一项所述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物制备方法制得。
10.一种如权利要求9所述具有抗肿瘤活性的灰树花多糖-蛋白复合物在制备治疗胃癌或/和喉癌药物中的应用。
