1.本发明大体上涉及药物化学领域，具体而言涉及小檗碱的异构体及其制备方法。
背景技术：2.小檗碱(berberine)，又称黄连素，是一种异喹啉生物碱，通常为其盐酸盐形式。小檗碱作为光谱抗生素，发挥着抗菌、抗原虫、止泻和抗沙眼等临床作用。
[0003][0004]
在人类疾病中，感染性疾病属于高发生率疾病，人们的成长过程无法避免抗生素的使用。长期以来，小檗碱作为广谱抗生素被广泛用于临床治疗各类感染性疾病，尤其是消化系统感染，并且在治疗其他疾病方面也有一定潜力。但越来越多的研究也指出，使用小檗碱会导致肠道细菌的多样性和组成发生改变，小檗碱治疗可引起诸多不良反应及安全性问题。
[0005]
目前亟需对于小檗碱或盐酸小檗碱中杂质含量的控制方法，进而保证用药安全。
技术实现要素：[0006]
为了提高小檗碱或盐酸小檗碱的用药安全，降低不良反应，本技术对小檗碱中所含的杂质种类和杂质含量进行了研究。
[0007]
在一个或多个实施方式中，通过对盐酸小檗碱进一步分离、纯化及鉴定后，发现了盐酸小檗碱的同分异构体。
[0008]
本技术的一个或多个实施方式提供化合物，其为
[0009]
[0010]
本技术的一个或多个实施方式提供上述化合物在用于控制小檗碱或盐酸小檗碱的质量中的用途。
[0011]
在一个或多个实施方式中，上述化合物用作化学标准品。
[0012]
在一个或多个实施方式中，上述化合物在hplc、ms或hplc-ms中使用。
[0013]
本技术的一个或多个实施方式提供盐酸小檗碱异构体的制备方法，其包括：
[0014][0015]
步骤1：将缩合物在乙二醛溶液中，在氧化剂的作用下进行环合反应，得到环合物异构体和环合物；
[0016]
步骤2：将所述环合物异构体和环合物在碱性化合物的作用下进行脱酮反应，得到脱酮物异构体和脱酮物；优选地，所述碱性化合物为氧化钙、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡；更优选地为氧化钙；
[0017]
步骤3：将所述脱酮物异构体和脱酮物与盐酸进行成盐反应，得到盐酸小檗碱异构体和盐酸小檗碱；
[0018]
步骤4：将所述盐酸小檗碱异构体和盐酸小檗碱通过重结晶、制备液相分离得到盐酸小檗碱异构体。
[0019]
在一个或多个实施方式中，所述乙二醛溶液为乙二醛的乙酸/乙酸酐溶液。
[0020]
在一个或多个实施方式中，所述氧化剂为硫酸铜、氯化铜、硫酸铁或氯化铁。
[0021]
在一个或多个实施方式中，所述氧化剂为硫酸铜。
[0022]
在一个或多个实施方式中，在步骤1中，所述缩合物与乙二醛的摩尔比为1:1.0～5.0，例如1:1.0、1:2.0、1:3.0、1:4.0、或1:5.0。
[0023]
在一个或多个实施方式中，在步骤1中，所述缩合物与乙二醛的摩尔比为1:2.0～
3.0。
[0024]
在一个或多个实施方式中，在步骤1中，所述缩合物与氧化剂的摩尔比为1:1.0～5.0，例如1:1.0、1:2.0、1:3.0、1:4.0、或1:5.0。
[0025]
在一个或多个实施方式中，在步骤1中，所述缩合物与氧化剂的摩尔比为1:1.0～2.0。
[0026]
在一个或多个实施方式中，在步骤4中，所述制备液相色谱的条件如下：制备色谱柱为shim-pack g2s c18柱(10
×
250mm，5μm)，流动相为0.1％甲酸/水和甲醇，流速为5ml/min，柱温为25℃，检测波长为345nm。
[0027]
在一个或多个实施方式中，步骤1如下：将冰醋酸50.00g、醋酐22.00g加入反应瓶，搅拌下加入硫酸铜9.00g(1.3eq)和氯化钠15.00g，升温至60℃，加入40重量％乙二醛10.00g(2.4eq)，升温回流30分钟，稍降温，加入缩合物10.00g(1.0eq)，继续回流反应5小时，降温，抽滤，得到环合物异构体和环合物共25.00g，直接用于步骤2。
[0028]
在一个或多个实施方式中，步骤2如下：将所述环合物异构体和环合物20.00g和水200.00g加入到反应瓶，搅拌升温至80℃，搅拌1小时，加入氧化钙，调节ph至8.0～9.0，趁热抽滤，滤饼用水淋洗，将滤液与洗液合并后降温至0～10℃(例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10℃)，析晶10小时，抽滤，得到脱酮物异构体与脱酮物共15.00g，直接用于步骤3。
[0029]
在一个或多个实施方式中，本技术的盐酸小檗碱同分异构体为工艺杂质。在合成过程中，中间体盐酸缩合物与乙二醛缩合时会发生缩合位置不同而生成副产物，即盐酸小檗碱的同分异构体。
[0030]
在一个或多个实施方式中，在盐酸小檗碱制备过程中，同分异构体杂质由制备环合物的环合反应所生成，由于环合物含有铜盐等无机盐，不易分离纯化，而环合物经脱铜反应制备的脱铜物中间体，采用ph调节同时结合重结晶方法，得到盐酸小檗碱异构体粗品，最后通过制备液相色谱法得到盐酸小檗碱异构体。
附图说明
[0031]
图1为盐酸小檗碱异构体hplc图谱。
[0032]
图2为盐酸小檗碱异构体ms图谱。
[0033]
图3为盐酸小檗碱异构体1h-nmr图谱。
具体实施方式
[0034]
为使本技术的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面对本技术进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限制本技术的范围。下述实施例中所用的试验材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0035]
实施例 盐酸小檗碱异构体制备方法
[0036]
在盐酸小檗碱制备过程中，同分异构体杂质由制备环合物的环合反应所生成，由于环合物含有铜盐等无机盐，不易分离纯化，而环合物经脱铜反应制备的脱铜物中间体，采用ph调节同时结合重结晶方法，得到盐酸小檗碱异构体粗品，最后通过制备液相色谱法得到盐酸小檗碱异构体。
[0037]
具体实验操作：
[0038]
将冰醋酸50.00g、醋酐22.00g加入反应瓶，搅拌下加入硫酸铜9.00g(1.3eq)和氯化钠15.00g，升温至60℃，加入40％乙二醛10.00g(2.4eq)，升温回流30分钟，稍降温，加入缩合物10.00g(1.0eq)，继续回流反应5小时，降温，抽滤，得到环合物25.00g，湿品直接用于下个步骤。
[0039]
将环合物20.00g和水200.00g加入到反应瓶，搅拌升温至80℃，搅拌1小时，加入氧化钙，调节ph至8.0～9.0，趁热抽滤，滤饼用水淋洗，滤液与洗液合并后降温至0～10℃，析晶10小时，抽滤，得到脱酮物15.00g，湿品直接用于下个步骤。
[0040]
向10l反应瓶中加入脱铜物1.00kg、水5.00kg，开启搅拌，升温至80℃，用5％的盐酸调节体系ph＝3～4，继续升温至90℃，搅拌1.0h。关闭加热，搅拌析晶，10～20℃析晶，抽滤，滤液浓缩至1～1.5l，升温溶清，用5％氢氧化钠调节ph＝9～10，将体系降温至室温，用乙酸乙酯500ml
×
3萃取，水相用5％盐酸调节ph＝2～3，搅拌析晶，10～20℃析晶5.0h，抽滤，滤液浓缩至干得到黄色半固体约15g。
[0041]
上步滤液浓缩至干的黄色半固体15g，用甲醇打浆，抽滤，滤液浓缩至干得到半固体，约为10g，用二氯甲烷溶解，再用异丙醚或甲基叔丁基醚析晶(若没有固体析出，浓缩至干，加入适量的水溶解，用50％的氢氧化钠调节ph至8～9，用乙酸乙酯萃取，水相用5％盐酸调节ph至2左右，搅拌析晶，10～20℃析晶5.0h，抽滤，滤饼备用)，析晶后抽滤，滤饼送样hplc检测，盐酸小檗碱异构体面积归一化法含量大于60.0％，此为盐酸小檗碱异构体粗品，约为5g。
[0042]
将所得盐酸小檗碱异构体粗品，经制备液相色谱柱进一步分离纯化。制备液相色谱条件：制备色谱柱为shim-pack g2s c18柱(10
×
250mm，5μm)，流动相为0.1体积％甲酸水溶液(a相)和甲醇(b相)，梯度洗脱(0～15min，70％a相；15～36min，70％～40％a相；36～40min，5％a相；40～45min，70％a相)，进样量为100μl，流速为5ml/min，柱温为25℃，检测波长为345nm。收集不同时间段的洗脱液，送样液相检测纯度95.0％以上，若不合格，则回收后继续分离纯化。洗脱液减压浓缩，得到盐酸小檗碱异构体0.5g。
[0043]
经过hplc检测(hplc图谱见图1)，盐酸小檗碱异构体的纯度为99.114％。
[0044]
表征数据如下：
[0045]
ms(m/z)：336.1236，[m-cl]
+
。
[0046]
ms图谱见图2。
[0047]1h-nmr(500hz，dmso-d6)δ：3.24～3.26(m,2h)，4.09(s,3h)，4.11(s,3h)，4.98～5.01(m,2h)，6.32(s,2h)，6.96(d,1h)，7.12(d,1h)，8.20～8.25(m,2h)，8.90(s,1h)，10.03(s,1h)。
[0048]1h-nmr图谱见图3。
技术特征：1.化合物，其为2.权利要求1所述的化合物在用于控制小檗碱或盐酸小檗碱的质量中的用途。3.如权利要求2所述的用途，其中权利要求1所述的化合物用作化学标准品。4.如权利要求2或3所述的用途，其中权利要求1所述的化合物在hplc、ms或hplc-ms中使用。5.盐酸小檗碱异构体的制备方法，其包括：步骤1：将缩合物在乙二醛溶液中，在氧化剂的作用下进行环合反应，得到环合物异构体和环合物；优选地，所述乙二醛溶液为乙二醛的乙酸/乙酸酐溶液；优选地，所述氧化剂为硫酸铜、氯化铜、硫酸铁或氯化铁；更优选地为硫酸铜；步骤2：将所述环合物异构体和环合物在碱性化合物的作用下进行脱酮反应，得到脱酮物异构体和脱酮物；优选地，所述碱性化合物为氧化钙、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡；更优选地为氧化钙；步骤3：将所述脱酮物异构体和脱酮物与盐酸进行成盐反应，得到盐酸小檗碱异构体和盐酸小檗碱；步骤4：将所述盐酸小檗碱异构体和盐酸小檗碱通过重结晶、制备液相分离得到盐酸小
檗碱异构体。6.如权利要求5所述的制备方法，其中在步骤1中，所述缩合物与乙二醛的摩尔比为1:1.0～5.0；优选为1:2.0～3.0。7.如权利要求5所述的制备方法，其中在步骤1中，所述缩合物与氧化剂的摩尔比为1:1.0～5.0，优选为1:1.0～2.0。8.如权利要求5所述的制备方法，其中在步骤4中，所述制备液相色谱的条件如下：制备色谱柱为shim-pack g2s c18柱(10
×
250mm，5μm)，流动相为0.1％甲酸/水和甲醇，流速为5ml/min，柱温为25℃，检测波长为345nm。9.如权利要求5所述的制备方法，其中步骤1如下：将冰醋酸50.00g、醋酐22.00g加入反应瓶，搅拌下加入硫酸铜9.00g(1.3eq)和氯化钠15.00g，升温至60℃，加入40重量％乙二醛10.00g(2.4eq)，升温回流30分钟，稍降温，加入缩合物10.00g(1.0eq)，继续回流反应5小时，降温，抽滤，得到环合物异构体和环合物共25.00g，直接用于步骤2。10.如权利要求5所述的制备方法，其中步骤2如下：将所述环合物异构体和环合物20.00g和水200.00g加入到反应瓶，搅拌升温至80℃，搅拌1小时，加入氧化钙，调节ph至8.0～9.0，趁热抽滤，滤饼用水淋洗，将滤液与洗液合并后降温至0～10℃，析晶10小时，抽滤，得到脱酮物异构体与脱酮物共15.00g，直接用于步骤3。
技术总结本申请公开了小檗碱异构体及其用途和制备方法，该盐酸小檗碱异构体可用于提高盐酸小檗碱的质量控制和用药安全。檗碱的质量控制和用药安全。
技术研发人员：王勇军 吉小龙 季素祥 于水涛 周慧琴 王奔
受保护的技术使用者：常州亚邦制药有限公司
技术研发日：2022.07.25
技术公布日：2022/11/1
