本披露总体上涉及生物,更具体地涉及用于表达提供针对某些除草剂的耐受性的fata酰基-acp硫酯酶或其修饰的重组和基因工程技术。关于电子提交的序列表的声明本文提供了ascii文本格式的序列表,该序列表是根据37 c.f.r.§1.821提交的,名称为“81983_pct_st25.txt”,于2019年10月31日生成并经由efs-web提交。这个序列表特此通过引用以其披露内容并入本说明书中。
背景技术:
1、已广泛报道了使用除草剂耐受性转基因将作物工程化以变得耐受除草剂并且从而将某些除草剂的使用扩展到另外的作物中。可以通过编码除草剂靶蛋白的基因的过表达和/或通过编码改变的并且从而对除草剂不敏感的靶位点的转基因的表达(例如,在草甘膦耐受性的情况下,草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽草酰-3-磷酸合酶)和/或将除草剂代谢成无活性形式的酶的表达(例如,在草铵膦耐受性的情况下,草丁膦n-乙酰转移酶)来赋予除草剂耐受性。类似地,原位诱变(定向或其他方式)已用于突变,例如乙酰乳酸合酶(als)或乙酰辅酶a羧化酶(accase)除草剂靶基因,以产生突变型耐受除草剂的作物品系。除了对非选择性除草剂草甘膦和草铵膦具有耐受性的早期实例外,现在有大量关于赋予针对其他除草剂的除草剂耐受性的转基因和方法的报道,例如通过抑制以下来起作用的那些:4-羟基苯丙酮酸双加氧酶(hppd)、原卟啉原氧化酶(ppo)以及几种生长素型除草剂,特别是麦草畏和2,4d。尽管如此,申请人仍在努力开发针对除草剂抗性的新技术。
2、在高等植物中,脂肪酸生物合成由位于质体的ii型脂肪酸合酶(fasii)催化。fasii催化丙二酰-acp(酰基载体蛋白)与酰基-acp衍生物的缩合,连续拉长具有两个碳单位的生长的酰基-acp链,该拉长最后由酰基-acp硫酯酶催化酰基-acp的硫酯键的水解而终止,释放出游离脂肪酸,这些游离脂肪酸很快被酰基辅酶a合成酶重新酯化并输出到胞质溶胶。植物酰基-acp硫酯酶是核编码的质体靶向蛋白。有两个基因家族:fata和fatb,其中fata定位于质体并编码硫酯酶,对18:1-acp具有高特异性,而对18:0-acp和16:0-acp具有较低的活性。
3、例如在us 2013/0298283中已经报道了fata酰基-acp硫酯酶在转基因植物中的过表达,其中据说所述植物表现出改善的对缺水的耐受性。然而,fata酰基-acp硫酯酶或其修饰物尚未用于增加对某些类别的除草化合物的耐受性。因此,本披露尤其提供了在更广泛的农业背景下利用fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂的机会。
技术实现思路
1、本披露尤其涉及选择性地控制杂草的方法。例如,实施例包括在包含作物植物和杂草的场所处选择性地控制杂草的方法,该方法包括向该场所施用杂草控制量的杀有害生物剂组合物,该杀有害生物剂组合物包含fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂(本文也称为“fata抑制性除草剂”),其中修饰这些作物植物以使它们包含fata酰基-acp硫酯酶,该fata酰基-acp硫酯酶为该作物植物提供针对fata抑制性除草剂的耐受性。在一个实施例中,用重组多核苷酸修饰作物植物,该重组多核苷酸提供fata酰基-acp硫酯酶,该fata酰基-acp硫酯酶为该作物植物提供针对该fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂的耐受性。fata酰基-acp硫酯酶可以衍生自多种物种,例如拟南芥属物种、小麦属物种、大麦属物种、稻属物种、玉蜀黍属物种、和大豆属物种。在一些实例中,fata酰基-acp硫酯酶衍生自拟南芥(arabidopsis thaliana)、普通小麦(triticum aestivum)(小麦(wheat))、大麦(hordeumvulgare,barley)、稻(oryza sativa,rice)、玉蜀黍(zea mays,maize)、或大豆(glycinemax,soybean)。
2、在该方法的一个实施例中,fata酰基-acp硫酯酶选自:(a)由seq id no:1-7和15-19组成的组;或(b)与选自seq id no:1-7和15-19的序列具有至少70%、至少71%、至少72%、至少73%、至少74%、至少75%、至少76%、至少77%、至少78%、至少79%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%和至少99%中的至少一个的序列同一性的fata酰基-acp硫酯酶。在许多实施例中,fata酰基-acp硫酯酶应包括选自下组的至少第一氨基酸取代,该组由以下组成:s76(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l77(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t78(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、d80(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、g81(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l82(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s83(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、y84(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t)、k85(g、a、l、m、f、w、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e86(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f88(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、i106(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、a107(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、n108(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、l109(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l110(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q111(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e112(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v113(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、g114(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c115(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、n116(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、h117(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、a118(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q119(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s120(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v121(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、g122(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f123(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s124(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t125(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、d126(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、g127(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f128(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、a129(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t130(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t131(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t132(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t133(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、m134(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r135(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、l139(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、i140(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、w141(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v142(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、t143(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、a144(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r145(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、m146(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、h147(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、i162(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、e163(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t164(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、w165(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c166(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、q167(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s168(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e169(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、g170(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r171(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、i172(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、g173(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t174(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、r175(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、r176(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d177(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、w178(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r191(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、a192(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t193(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、s194(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、k195(g、a、l、m、f、w、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、w196(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v197(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、m198(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、m199(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q207(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v209(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、s210(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、d212(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、v213(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、r214(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d215(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、e216(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、y217(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t)、l218(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v219(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、f220(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c221(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、p222(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q223(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r226(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d262(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、m263(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、n264(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、h266(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、v267(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、n268(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、n269(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v270(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、和y297(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t),其中该氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。举例来说,对应于seq id no:1的位置76的位置上的s可以被替换为以下任何氨基酸:g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、或t。在另一个实施例中,fata酰基-acp硫酯酶包括选自下组的至少第一氨基酸取代,该组由以下组成:r176a、r176c、r176v、y217l、l218c、s168r、g114s、f123n、r191c、c221f、n269y、f123c、s168c、f220h、v121n、n269w、a118v和a144y,其中该氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。在另一个实施例中,fata酰基-acp硫酯酶包括氨基酸取代r176a、r176c、r176v、y217l、l218c、s168r、g114s、f123n、r191c、c221f、n269y、f123c、s168c、f220h、v121n、n269w、a118v和a144y中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或至少7个,其中该氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。在另一个实施例中,fata酰基-acp硫酯酶包括选自下组的至少一对氨基酸取代,该组由以下组成:r176a和r191c、r176c和r191c、以及r176v和r191c,其中该氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。
3、在一些实施例中,fata酰基-acp硫酯酶是通过编辑内源基因提供的。
4、fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂可以变化,但许多实例将选自由式(i)化合物组成的组:
5、
6、其中r1和r2各自独立地是h、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、卤素或氰基,优选me、cl、f或h。示例性的除草剂包括环庚草醚和噁嗪草酮。
7、此外,在该方法的许多实施例中,作物植物包含编码另外的除草剂耐受酶的重组多核苷酸,其中该另外的除草剂耐受酶选自由以下组成的组:5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸酯合酶(epsps)、草甘磷乙酰基转移酶(gat)、细胞色素p450、草丁膦乙酰转移酶(pat)、乙酰乳酸合酶(als)、原卟啉原氧化酶(ppo)、羟基苯丙酮酸双加氧酶(hppd)和麦草畏降解酶。因此,一种或多种另外的除草剂可以包括草甘膦(包括其农业化学上可接受的盐);草铵膦(包括其农业化学上可接受的盐);氯乙酰苯胺,例如,甲草胺、乙草胺、异丙甲草胺、精异丙甲草胺;光系统ii抑制剂,例如三嗪如莠灭净、莠去津、氰草津和特丁津,三嗪酮如环嗪酮和赛克津,以及脲如绿麦隆、敌草隆、异丙隆、利谷隆和丁噻隆;als-抑制剂,例如磺酰脲,如酰嘧磺隆、绿磺隆、氟啶嘧磺隆、氯吡嘧磺隆、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、氟磺隆、玉嘧磺隆、醚苯磺隆、三氟啶磺隆和三氟甲磺隆;二苯醚,例如,三氟羧草醚和氟磺胺草醚;hppd抑制性除草剂,如,硝磺草酮和氟吡草酮;麦草畏和2,4d。
8、本披露还涉及重组多核苷酸。在一个实施例中,重组多核苷酸包含编码fata酰基-acp硫酯酶的区域,该区域可操作地连接至植物可操作的启动子。在一个实施例中,fata酰基-acp硫酯酶选自由以下组成的组:seq id no:8-14、或seq id no:20-23、或编码包括至少第一氨基酸取代的fata酰基-acp硫酯酶的dna序列,该氨基酸取代选自由以下组成的组:s76(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l77(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t78(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、d80(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、g81(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l82(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s83(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、y84(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t)、k85(g、a、l、m、f、w、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e86(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f88(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、i106(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、a107(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、n108(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、l109(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l110(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q111(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e112(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v113(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、g114(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c115(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、n116(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、h117(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、a118(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q119(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s120(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v121(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、g122(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f123(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s124(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t125(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、d126(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、g127(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f128(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、a129(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t130(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t131(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t132(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t133(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、m134(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r135(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、l139(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、i140(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、w141(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v142(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、t143(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、a144(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r145(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、m146(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、h147(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、i162(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、e163(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t164(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、w165(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c166(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、q167(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s168(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e169(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、g170(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r171(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、i172(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、g173(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t174(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、r175(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、r176(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d177(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、w178(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r191(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、a192(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t193(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、s194(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、k195(g、a、l、m、f、w、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、w196(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v197(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、m198(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、m199(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q207(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v209(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、s210(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、d212(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、v213(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、r214(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d215(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、e216(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、y217(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t)、l218(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v219(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、f220(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c221(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、p222(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q223(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r226(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d262(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、m263(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、n264(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、h266(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、v267(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、n268(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、n269(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v270(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、和y297(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t),其中该氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置;或编码包括至少第一氨基酸取代的fata酰基。acp硫酯酶的dna序列,该氨基酸取代选自由以下组成的组:r176a、r176c、r176v、y217l、l218c、s168r、g114s、f123n、r191c、c221f、n269y、f123c、s168c、f220h、v121n、n269w、a118v和a144y,其中该氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。
9、在重组多核苷酸的一些实施例中,fata酰基-acp硫酯酶包括氨基酸取代r176a、r176c、r176v、y217l、l218c、s168r、g114s、f123n、r191c、c221f、n269y、f123c、s168c、f220h、v121n、n269w、a118v和a144y中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或至少7个,其中该氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。在另一个实施例中,fata酰基-acp硫酯酶包括选自下组的氨基酸取代,该组由以下组成:r176a-r191c、r176c-r191c、以及r176v-r191c,其中该氨基酸取代的位置是相对于作为seqid no:1提供的氨基酸序列的位置。
10、重组多核苷酸的实施例可进一步包括与植物可操作的启动子可操作地连接的至少一个另外的区域,该区域编码选自由以下组成的组的除草剂耐受酶:羟基苯丙酮酸双加氧酶(hppd)、5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸酯合酶(epsps)、草甘磷乙酰基转移酶(gat)、细胞色素p450、草丁膦乙酰转移酶(pat)、乙酰乳酸合酶(als)、原卟啉原氧化酶(ppo)、羟基苯丙酮酸双加氧酶(hppd)和麦草畏降解酶。
11、本披露还涉及对fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂具有耐受性的植物细胞。植物细胞可包含如本文所述的任何重组多核苷酸或编码包括本文所述的任何氨基酸取代的fata酰基-acp硫酯酶的dna序列。
12、本披露还涉及fata酰基-acp硫酯酶,例如不是天然的或非天然发生的那些。例如,天然fata酰基-acp硫酯酶已被修饰以包含本文所述的任何氨基酸取代。
13、在另一个实施例中,本披露涉及重组多核苷酸,该重组多核苷酸包含:编码dna修饰酶的核酸;和编码至少一种指导rna(grna)的核酸,其中该至少一种指导rna介导对fata酰基-acp硫酯酶的至少一个修饰(例如,通过编辑编码该fata酰基-acp硫酯酶的dna)。
14、在一个实施例中,至少一种grna介导本文所述的任何氨基酸取代。
15、在另一个实施例中,本披露涉及通过将重组多核苷酸转化到植物细胞或植物组织中来生产对fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂具有耐受性的植物的方法,其中该重组多核苷酸包含编码dna修饰酶的核酸,和编码至少一种指导rna(grna)的核酸,其中该至少一种指导rna介导对fata酰基-acp硫酯酶的至少一个修饰(例如,通过修饰编码蛋白质的dna);以及将该植物细胞或植物组织再生为具有t1种子的t0植物,其中该t1种子可以被再生以生产对fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂具有耐受性的经编辑植物。
16、在另一个实施例中,本披露涉及重组fata酰基-acp硫酯酶在体外筛选方法中用于鉴定fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂的用途。
17、以上
技术实现要素:
旨在总结本披露的某些实施例。在下文中的表和描述中将更详细地对实施例进行陈述。然而,将清楚的是,对特定实施例的具体描述并非旨在限制本发明的范围。
1.一种在包含作物植物和杂草的场所处选择性地控制杂草的方法,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的方法,其中用重组多核苷酸修饰所述作物植物,所述重组多核苷酸提供所述fata酰基-acp硫酯酶,所述fata酰基-acp硫酯酶为所述作物植物提供针对所述fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂的耐受性。
3.根据权利要求2所述的方法,其中所述fata酰基-acp硫酯酶衍生自选自由以下组成的组的物种:拟南芥属物种、小麦属物种、大麦属物种、稻属物种、玉蜀黍属物种、和大豆属物种。
4.根据权利要求2或3所述的方法,其中所述fata酰基-acp硫酯酶衍生自拟南芥(arabidopsis thaliana)、普通小麦(triticum aestivum)(小麦(wheat))、大麦(hordeumvulgare,barley)、稻(oryza sativa,rice)、玉蜀黍(zea mays,maize)、或大豆(glycinemax,soybean)。
5.根据权利要求3或4所述的方法,其中所述fata酰基-acp硫酯酶选自:
6.根据权利要求3、4或5所述的方法,所述fata酰基-acp硫酯酶包括选自由以下组成的组的至少第一氨基酸取代:s76(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l77(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t78(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、d80(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、g81(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l82(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s83(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、y84(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t)、k85(g、a、l、m、f、w、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e86(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f88(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、i106(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、a107(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、n108(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、l109(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l110(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q111(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e112(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v113(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、g114(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c115(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、n116(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、h117(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、a118(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q119(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s120(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v121(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、g122(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f123(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s124(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t125(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、d126(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、g127(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f128(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、a129(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t130(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t131(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t132(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t133(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、m134(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r135(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、l139(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、i140(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、w141(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v142(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、t143(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、a144(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r145(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、m146(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、h147(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、i162(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、e163(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t164(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、w165(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c166(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、q167(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s168(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e169(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、g170(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r171(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、i172(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、g173(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t174(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、r175(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、r176(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d177(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、w178(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r191(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、a192(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t193(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、s194(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、k195(g、a、l、m、f、w、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、w196(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v197(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、m198(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、m199(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q207(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v209(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、s210(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、d212(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、v213(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、r214(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d215(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、e216(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、y217(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t)、l218(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v219(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、f220(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c221(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、p222(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q223(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r226(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d262(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、m263(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、n264(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、h266(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、v267(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、n268(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、n269(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v270(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、和y297(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t),其中所述氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述fata酰基-acp硫酯酶包括选自由以下组成的组的至少第一氨基酸取代:r176a、r176c、r176v、y217l、l218c、s168r、g114s、f123n、r191c、c221f、n269y、f123c、s168c、f220h、v121n、n269w、a118v和a144y,其中所述氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述fata酰基-acp硫酯酶包括氨基酸取代r176a、r176c、r176v、y217l、l218c、s168r、g114s、f123n、r191c、c221f、n269y、f123c、s168c、f220h、v121n、n269w、a118v和a144y中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或至少7个,其中所述氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述fata酰基-acp硫酯酶包括选自由以下组成的组的至少一对氨基酸取代:r176a和r191c、r176c和r191c、以及r176v和r191c,其中所述氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述fata酰基-acp硫酯酶是通过编辑内源基因提供的。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂选自由具有式(i)的化合物组成的组
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂选自由环庚草醚和噁嗪草酮组成的组。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述作物植物包含编码另外的除草剂耐受酶的重组多核苷酸,其中所述另外的除草剂耐受酶选自由以下组成的组:5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸酯合酶(epsps)、草甘磷乙酰基转移酶(gat)、细胞色素p450、草丁膦乙酰转移酶(pat)、乙酰乳酸合酶(als)、原卟啉原氧化酶(ppo)、羟基苯丙酮酸双加氧酶(hppd)和麦草畏降解酶。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述杀有害生物剂组合物包含一种或多种另外的除草剂,其中所述一种或多种另外的除草剂选自由以下组成的组:草甘膦(包括其农业化学上可接受的盐);草铵膦(包括其农业化学上可接受的盐);氯乙酰苯胺,例如,甲草胺、乙草胺、异丙甲草胺、精异丙甲草胺;光系统ii抑制剂,例如三嗪如莠灭净、莠去津、氰草津和特丁津,三嗪酮如环嗪酮和赛克津,以及脲如绿麦隆、敌草隆、异丙隆、利谷隆和丁噻隆;als-抑制剂,例如磺酰脲,如酰嘧磺隆、绿磺隆、氟啶嘧磺隆、氯吡嘧磺隆、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、氟磺隆、玉嘧磺隆、醚苯磺隆、三氟啶磺隆和三氟甲磺隆;二苯醚,例如,三氟羧草醚和氟磺胺草醚;hppd抑制性除草剂,如,硝磺草酮和氟吡草酮;麦草畏和2,4d。
15.一种重组多核苷酸,其包含(i)编码修饰的fata酰基-acp硫酯酶的区域,所述区域可操作地连接至植物可操作的启动子。
16.根据权利要求15所述的重组多核苷酸,其中所述fata酰基-acp硫酯酶选自由以下组成的组:
17.根据权利要求16所述的重组多核苷酸,其中所述fata酰基-acp硫酯酶包括氨基酸取代r176a、r176c、r176v、y217l、l218c、s168r、g114s、f123n、r191c、c221f、n269y、f123c、s168c、f220h、v121n、n269w、a118v和a144y中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或至少7个,其中所述氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。
18.根据权利要求16或17所述的重组多核苷酸,其中所述fata酰基-acp硫酯酶包括选自由以下组成的组的至少一对氨基酸取代:r176a和r191c、r176c和r191c、以及r176v和r191c,其中所述氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。
19.根据权利要求16、17或18所述的重组多核苷酸,其进一步包含:
20.一种植物细胞,其对fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂具有耐受性,所述植物细胞包含
21.根据权利要求20所述的植物细胞,其中所述编码包括至少第一氨基酸取代的fata酰基-acp硫酯酶的dna序列是已经被编辑以包括所述取代的天然fata酰基-acp硫酯酶。
22.根据权利要求20或21所述的方法,其中所述取代包括选自由以下组成的组的至少两个氨基酸取代:r176a、r176c、r176v、y217l、l218c、s168r、g114s、f123n、r191c、c221f、n269y、f123c、s168c、f220h、v121n、n269w、a118v和a144y,其中所述氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置。
23.一种fata酰基-acp硫酯酶,其包括选自由以下组成的组的至少第一氨基酸取代:s76(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l77(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t78(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、d80(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、g81(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l82(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s83(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、y84(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t)、k85(g、a、l、m、f、w、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e86(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f88(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、1106(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、a107(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、n108(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、l109(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、l110(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q111(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e112(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v113(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、g114(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c115(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、n116(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、h117(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、a118(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q119(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s120(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v121(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、g122(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f123(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s124(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t125(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、d126(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、g127(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、f128(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、a129(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t130(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t131(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t132(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、t133(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、m134(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r135(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、l139(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、i140(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、w141(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v142(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、t143(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、a144(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r145(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、m146(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、h147(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、i162(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、e163(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t164(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、w165(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c166(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、q167(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、s168(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、e169(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、g170(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r171(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、i172(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、c、y、h、r、n、d、t)、g173(a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t174(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、r175(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、r176(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d177(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、w178(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r191(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、a192(g、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、t193(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d)、s194(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、k195(g、a、l、m、f、w、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、w196(g、a、l、m、f、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v197(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、m198(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、m199(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q207(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v209(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、s210(g、a、l、m、f、w、k、q、e、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、d212(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、v213(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、r214(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d215(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、e216(g、a、l、m、f、w、k、q、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、y217(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t)、l218(g、a、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v219(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、f220(g、a、l、m、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、c221(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、y、h、r、n、d、t)、p222(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、q223(g、a、l、m、f、w、k、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、r226(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、n、d、t)、d262(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、t)、m263(g、a、l、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、n264(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、h266(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、r、n、d、t)、v267(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、n268(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、d、t)、n269(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d、t)、v270(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、i、c、y、h、r、n、d、t)、和y297(g、a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、h、r、n、d、t),其中所述氨基酸取代的位置是相对于作为seq id no:1提供的氨基酸序列的位置;或
24.根据权利要求23所述的fata酰基-acp硫酯酶,其中所述fata酰基-acp硫酯酶包含所述氨基酸取代中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或至少7个。
25.根据权利要求23所述的fata酰基-acp硫酯酶,其中所述fata酰基-acp硫酯酶包含选自由以下组成的组的氨基酸取代:r176a和r191c、r176c和r191c、以及r176v和r191c。
26.一种fata酰基-acp硫酯酶,其具有选自由seq id nq:15-19组成的组的氨基酸序列或与其具有至少70%、至少71%、至少72%、至少73%、至少74%、至少75%、至少76%、至少77%、至少78%、至少79%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%和至少99%中的至少一个的序列同一性的非天然氨基酸序列。
27.一种重组多核苷酸,其包含:
28.根据权利要求27所述的重组多核苷酸,其中所述至少一种grna介导选自由以下组成的组的至少第一氨基酸取代:
29.根据权利要求28所述的重组多核苷酸,其中所述至少一种grna介导所述氨基酸取代中的至少至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或至少7个。
30.根据权利要求28所述的重组多核苷酸,其中所述至少一种grna介导选自由以下组成的组的至少一对氨基酸取代:r176a和r191c、r176c和r191c、以及r176v和r191c。
31.一种生产对fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂具有耐受性的植物的方法,所述方法包括:
32.根据权利要求31所述的方法,其中所述至少一种grna介导选自由以下组成的组的至少第一氨基酸取代:
33.根据权利要求32所述的方法,其中所述至少一种grna介导所述氨基酸取代中的至少至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或至少7个。
34.根据权利要求33所述的方法,其中所述至少一种grna介导选自由以下组成的组的至少一对氨基酸取代:r176a和r191c、r176c和r191c、以及r176v和r191c。
35.重组fata酰基-acp硫酯酶在体外筛选方法中用于鉴定fata酰基-acp硫酯酶抑制性除草剂的用途。
