：本发明涉及生物医学领域，尤其涉及一种靶向型抑制剂在制备治疗皮肤黑色素瘤药物中的应用。
背景技术
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背景技术：
1、皮肤恶性黑素瘤(cutaneous malignant melanoma,cmm)是起源于皮肤黑素细胞的高度恶性肿瘤，是皮肤肿瘤中恶性程度最高、预后最差的“癌中之王”。根据globocan2020数据库的统计，2020年全球约有325,000例新发皮肤恶性黑素瘤病例和57,000例死亡病例。预计到2040年，新发病例将增加至约510,000例，死亡病例增加至96,000例。近十年cmm的全球发病率呈显著增加，尤其在皮肤较白的人群中更为显著。
2、面对这一严峻的医疗挑战，手术切除治疗联合前哨淋巴结活检仍然是目前cmm的主要治疗手段。但是对于某些手术难以切除、患者体质较差或已发生远处转移的患者，分子靶向治疗、免疫检查点抑制剂及放化疗便成为这些患者存活下去的希望。然而不幸的是，尽管目前有针对特定基因突变(如braf突变)的分子靶向药物braf抑制剂和mek抑制剂，但许多患者在治疗5～7个月后出现耐药性及脱靶，导致疾病进展。免疫治疗在皮肤黑色素瘤中虽然取得了一定的进展，但并非所有cmm患者都对免疫治疗有反应，且免疫治疗可能会带来一定的副作用。而传统的化疗和放疗往往效果不佳且不良反应大，患者的预后较差。
3、piezo家族包括piezo1和piezo2两个成员。与piezo2主要位于感觉神经元中不同，piezo1主要存在于非神经组织中，如皮肤、肺、膀胱、胃肠等。作为机械信号感受器，piezo1在调节皮肤生理过程及多种皮肤疾病发生发展中发挥重要作用。同时，piezo1介导力学信号影响肿瘤侵袭和转移，在多种肿瘤(肠癌、胃癌、骨肉瘤等)中发挥促癌作用，对细胞迁移产生影响。有相关文献证实，piezo1敲除的黑素瘤细胞迁移速度降低。因此，piezo1蛋白是介导机械刺激下促进黑色素瘤皮损进展的关键离子通道蛋白。基于皮肤黑色素瘤疾病的复杂性及目前临床治疗所遇到的困难，亟需深入研究皮肤黑色素瘤的关键致病因素，寻找潜在有效治疗靶点，为解决cmm的治疗困境提供更多理论基础与方法支持。
技术实现思路
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技术实现要素：
1、(一)解决的技术问题
2、针对目前黑色素瘤治疗技术中存在的缺陷，本发明提供一种靶向型抑制剂在制备治疗皮肤黑色素瘤药物中的应用，通过研究皮肤黑色素瘤的关键致病因素，发现抑制piezo1蛋白表达可以有效抑制黑色素瘤的发生发展，证明piezo1离子通道蛋白是黑色素瘤的潜在有效治疗靶点，并提供了一种有效抑制黑色素瘤的靶向型抑制剂，解决现有技术缺乏有效的靶向治疗黑色素瘤药物的问题。
3、(二)技术方案
4、为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
5、一种靶向型抑制剂在制备治疗皮肤黑色素瘤药物中的应用，所述靶向型抑制剂为抑制piezo1蛋白表达的抑制剂。
6、进一步地，所述抑制剂包括piezo1离子通道蛋白的干扰rna，所述干扰rna包括小干扰rna，即sirna；和短发夹rna，即shrna，所述sirna有三种，分别为sirna-1、sirna-2和sirna-3：
7、所述sirna-1序列如序列表中seq id no.1所示，
8、具体为：gggactgcctcattctgta；
9、所述sirna-2序列如序列表中seq id no.2所示，
10、具体为：ggcagcgcatgaactttct；
11、所述sirna-3序列如序列表中seq id no.3所示，
12、具体为：gcagcatgacagacgacat；
13、所述shrna的核苷酸序列如序列表中seq id no.4所示，具体为：
14、cggataaaactaagattacaaaaacaaattacaaaaattcaaaattttcgggtttattacagggacagcagagatccagtttggttaattaatcgagcggccgcccccttcaccgagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattggaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccgggcagcatgacagacgacatctcgagatgtcgtctgtcatgctgctttttgaattctcgacctcgagacaaatggcagtattcatccacggatcctaacccgtgtcggctccaacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattgtgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtcgaggtgagccccacgttctgcttcactctccccatctcccccccctccccacccccaattttgtatttatttattttttaattattttgtgcagcgatgggc。
15、其中，上述序列中，下划线部分的序列：
16、ccgggcagcatgacagacgacatctcgagatgtcgtctgtcatgct gcttttt为插入序列，其他部分为载体序列。
17、进一步地，所述piezo1蛋白的所述干扰rna还包括piezo1抑制慢病毒，所述piezo1抑制慢病毒中重组有piezo1蛋白的所述干扰rna。
18、进一步地，本发明还提供piezo1蛋白表达的抑制剂在制备抑制黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的药物中的应用。
19、进一步地，本发明还提供piezo1蛋白表达的抑制剂在制备抑制黑色素瘤体内肿瘤生长的药物中的应用。
20、本发明通过rna干扰技术靶向沉默piezo1蛋白后，黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低。荷瘤裸鼠体内实验发现，靶向沉默piezo1的裸鼠瘤体瘤体重量及大小显著降低。因此，靶向肿瘤细胞piezo1离子通道蛋白可以作为皮肤黑色素瘤的潜在靶点，用于皮肤黑色素瘤的治疗。
21、实验方法采用如下三种：
22、(1)rna干扰技术(rnai)
23、(2)细胞增殖、迁移和侵袭检测技术
24、(3)荷瘤裸鼠体内检测技术
25、(三)有益效果
26、本发明产生的有益效果是：
27、本发明发现通过靶向沉默piezo1蛋白能够治疗皮肤黑色素瘤，靶向沉默piezo1不仅能够抑制体外黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并且能够抑制体内黑色素瘤的发生发展，同时提出了靶向piezo1离子通道蛋白的干扰rna作为黑色素瘤抑制剂。本发明基于基因编辑手段实现靶向沉默piezo1，对皮肤黑色素瘤的早期治疗具有良好的临床应用价值。
1.一种靶向型抑制剂在制备治疗皮肤黑色素瘤药物中的应用，其特征在于，所述靶向型抑制剂为抑制piezo1蛋白表达的抑制剂。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制剂包括piezo1蛋白的干扰rna，所述干扰rna包括sirna与shrna，所述sirna有三种，分别为sirna-1、sirna-2和sirna-3，
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述piezo1蛋白的所述干扰rna还包括piezo1抑制慢病毒，所述piezo1抑制慢病毒中重组有piezo1蛋白的所述干扰rna。
4.权利要求1中所述的piezo1蛋白表达的抑制剂在制备抑制黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的药物中的应用。
5.权利要求1中所述的piezo1蛋白表达的抑制剂在制备抑制黑色素瘤体内肿瘤生长的药物中的应用。
