本发明涉及生物，具体为一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法及应用。
背景技术：
1、衣康酸作为一种机体的代谢产物，具有良好的抗炎能力，但由于其化学性质比较活泼，且水溶性好，难以进出细胞膜，但其衍生物4-oi(4-辛脂衣康酸)更为稳定，脂溶性高，能自由进出细胞膜，进入细胞后可以水解为衣康酸，发挥与衣康酸相同的作用。但是4oi的脂溶性高，水溶性差，因此需要吐温、dmso等助溶剂，但若在体应用，助溶剂具有一定的毒性，其静脉或者口服给药效率比较低，且容易被消除。
2、外泌体是活细胞分泌的直径为30-200nm的纳米级囊泡，是含有磷脂双分子层的细胞外囊泡，富含蛋白质、核酸、脂质等生物活性分子，天然无毒无害，广泛分布于血液、尿液、乳汁、胆汁等各种体液中，且能被巨噬细胞，内皮细胞等炎症和氧化应激相关的细胞吞噬，能有效将抗炎物质衣康酸递送至炎症细胞，发挥治疗效果。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，以解决背景技术中提出的问题。
2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法包括以下步骤：
3、s1、将4-辛脂衣康酸溶于dmso溶液中，使用去离子水梯度稀释，得到4-辛脂衣康酸溶液；
4、s2、将外泌体溶解与磷酸缓冲盐溶液(pbs溶液)中，得到外泌体溶液；
5、s3、将4-辛脂衣康酸溶液加入到外泌体溶液中，在37℃下孵育60min，冷却至4℃，静置60min，超速离心除去上清液，收集沉淀，用pbs溶液重悬，得到负载4-辛脂衣康酸的外泌体。
6、进一步的：所述步骤s1中4-辛脂衣康酸溶液的浓度为20-200μm。
7、进一步的：所述步骤s2中外泌体为商品化的293f细胞的外泌体。
8、进一步的：所述步骤s2中pbs溶液的ph为7.2-7.4。
9、进一步的：所述步骤s2中外泌体溶液中外泌体的密度为1011/ml。
10、进一步的：所述步骤s3中孵育的容器为1.5ml的ep管。
11、进一步的：所述步骤s3中超速离心的离心力为100000g，温度为4℃，时间为70min。
12、进一步的：所述步骤s3中pbs溶液的ph为7.2-7.4。
13、进一步的：所述步骤s3中4-辛脂衣康酸溶液和外泌体溶液的体积比为1：1。
14、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：衣康酸衍生物4-辛基衣康酸(4-oi)克服了衣康酸极性强，不易透过细胞膜的缺点，衣康酸和4-oi具有相似的硫醇反应性，但4-oi脂溶性高，能自由进出细胞膜，进入细胞后可以水解为衣康酸，发挥与衣康酸相同的作用；外泌体具有磷脂双分子层，能负载亲脂性的4-oi并保持其稳定性，避免使用吐温、dmso等助溶剂，在体内应用时，助溶剂有一定毒性，且静脉或者口服给药效率较低，负载4-oi的外泌体能被巨噬细胞，内皮细胞等炎症和氧化应激相关的细胞吞噬，能有效将其负载的抗炎物质衣康酸递送至炎症细胞，发挥了炎症治疗效果，保证了给药效率。
1.一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中4-辛脂衣康酸溶液的浓度为20-200μm。
3.根据权利要求1所述的一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中外泌体为商品化的293f细胞的外泌体。
4.根据权利要求1所述的一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中pbs溶液的ph为7.2-7.4。
5.根据权利要求1所述的一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中外泌体溶液中外泌体的密度为1011个/ml。
6.根据权利要求1所述的一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中孵育的容器为1.5ml的ep管。
7.根据权利要求1所述的一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中超速离心的离心力为100000g，温度为4℃，时间为70min。
8.根据权利要求1所述的一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中pbs溶液的ph为7.2-7.4。
9.根据权利要求1所述的一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中4-辛脂衣康酸溶液和外泌体溶液的体积比为1：1。
10.如权利要求1-9任一项所述的一种负载4-辛脂衣康酸的外泌体的制备方法在抗炎药物制剂中的应用。
