本发明涉及免疫化学，尤其是指一株分泌乙氧基喹啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。
背景技术：
1、乙氧基喹啉的英文通用名为：ethoxyquin，化学名称：6-乙氧基-2,2,4-三甲基-1,2-二氢喹啉；乙氧基喹啉具有保鲜和抗氧化作用。主要用于水果的保鲜，防治苹果虎皮病、鸭梨及香蕉等的黑皮病。还可用于维生素a、维生素d、β-胡萝卜素、脂肪等物质的抗氧化。作用基本与bha和bht相同，但价格便宜。同时，乙氧基喹啉还可以喷雾法喷布于饲料表面，可有效防止饲料中油脂酸败和氧化，且能防止维生素变质，具有抗氧化作用。如果过量使用(添加量超过0.1％)会导致猪肉脂肪色泽变暗或发黄，影响屠体品质。
2、目前，乙氧基喹啉检测方法主要为仪器检测，常用的有气相色谱法、液相色谱法和气相色谱-质谱法。尽管这些基于色谱的方法具有很高的灵敏度和特异性，存在一些缺点，例如需要彻底的样品净化，高溶剂消耗，昂贵的设备以及熟练的技术人员。因此，需要一种快速，简便的检测乙氧基喹啉残留物的方法。
3、酶联免疫吸附试验(elisa)是一种极为高效、灵敏、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、纯化步骤少、分析容量大、检测成本低而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，因此在药物残留分析中得到了广泛应用。而使用酶联免疫法检测乙氧基喹啉的前提是得到对乙氧基喹啉具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对乙氧基喹啉具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。中国专利cn104569398a公开了检测乙氧基喹啉的酶联免疫试剂盒及其应用，通过将乙氧基喹啉与邻苯二甲酸酐反应制备得到乙氧基喹啉半抗原，从而进一步制备乙氧基喹啉单克隆抗体，然而该酶联免疫试剂盒的ic50值范围仅为1.8-2.5μg/l，因此如何制备乙氧基喹啉半抗原和完全抗原和如何使小鼠产生强免疫效应，如何使得制备出的杂交瘤细胞株能够成功分泌出乙氧基喹啉单克隆抗体，如何使得分泌出的乙氧基喹啉单克隆抗体特异性强、灵敏度高，还需进一步地研究和探索。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本发明提供了一株分泌乙氧基喹啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，通过合成乙氧基喹啉半抗原，制备乙氧基喹啉完全抗原，将乙氧基喹啉完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化，通过颈背部皮下多点注射免疫balb/c小鼠。首次免疫用完全弗氏佐剂进行乳化，多次加强免疫用不完全弗氏佐剂，最后一次用乙氧基喹啉完全抗原冲刺免疫。将高效价和高灵敏度小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，采用选择培养基，筛选出两种细胞融合后的杂交细胞；再经过间接竞争酶联免疫法筛选细胞，并进行多次亚克隆，最终得到一株分泌乙氧基喹啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
2、本发明的第一个目的是提供一株分泌乙氧基喹啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为cgmcc no.45907。
3、进一步地，所述杂交瘤细胞株的制备方法包括以下步骤：
4、步骤s1、制备乙氧基喹啉半抗原，利用所得乙氧基喹啉半抗原制备乙氧基喹啉完全抗原，将所得乙氧基喹啉完全抗原与完全弗氏佐剂得到含抗原完全弗氏佐剂，所得乙氧基喹啉完全抗原和不完全弗氏佐剂乳化得到含抗原不完全弗氏佐剂；
5、步骤s2、将步骤s1所得含抗原完全弗氏佐剂对免疫动物进行首次免疫；
6、步骤s3、将步骤s2中免疫后的免疫动物使用步骤s1所得含抗原不完全弗氏佐剂进行加强免疫，并使用乙氧基喹啉完全抗原进行冲刺免疫；
7、步骤s4、取步骤s3中进行冲刺免疫的免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到所述杂交瘤细胞株；
8、其中，所述乙氧基喹啉半抗原的分子结构式为：所述乙氧基喹啉完全抗原的分子结构式为：
9、本发明的第二个目的是提供上述杂交瘤细胞株在制备乙氧基喹啉单克隆抗体中的应用。
10、本发明的第三个目的是提供一种乙氧基喹啉单克隆抗体，所述乙氧基喹啉单克隆抗体是由上述杂交瘤细胞株分泌所得。
11、本发明的第四个目的是提供一种组合物，所述组合物包括上述杂交瘤细胞株和/或上述乙氧基喹啉单克隆抗体。
12、本发明的第五个目的是提供一种芯片，所述芯片中含有上述杂交瘤细胞株、上述乙氧基喹啉单克隆抗体或上述组合物。
13、本发明的第六个目的是提供一种试纸条，所述试纸条中含有上述杂交瘤细胞株、上述乙氧基喹啉单克隆抗体或上述组合物。
14、进一步地，所述试纸条还包括样品垫、胶体金垫、吸水垫和醋酸纤维垫，所述胶体金垫上包被有胶体金标记的乙氧基喹啉单克隆抗体。
15、本发明的第七个目的是提供一种试剂盒，所述试剂盒中含有上述杂交瘤细胞株、上述乙氧基喹啉单克隆抗体或上述组合物。
16、进一步地，所述试剂盒还包括酶标板、乙氧基喹啉包被抗原、乙氧基喹啉标准液、酶标记二抗和显色液。
17、本发明的第八个目的是提供上述乙氧基喹啉单克隆抗体、上述组合物、上述芯片、上述试纸条或上述试剂盒在检测乙氧基喹啉中的应用。
18、本发明的有益效果：
19、本发明提供的分泌乙氧基喹啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所分泌的单克隆抗体对乙氧基喹啉具有较好的检测灵敏度，ic50值为7.14ng/ml，为实现乙氧基喹啉的高灵敏度、高特异性的免疫分析方法的建立提供了核心生物原材料，可用于制备芯片、试纸条和试剂盒等不同形式的乙氧基喹啉检测产品。
20、生物材料保藏
21、分泌乙氧基喹啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2024年4月18日，保藏编号cgmcc no.45907。
1.一株分泌乙氧基喹啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述杂交瘤细胞株的保藏编号为cgmcc no.45907。
2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株在制备乙氧基喹啉单克隆抗体中的应用。
3.一种乙氧基喹啉单克隆抗体，其特征在于：所述乙氧基喹啉单克隆抗体是由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌所得。
4.一种组合物，其特征在于：所述组合物包括权利要求1所述的杂交瘤细胞株和/或权利要求3所述的乙氧基喹啉单克隆抗体。
5.一种芯片，其特征在于：所述芯片中含有权利要求1所述的杂交瘤细胞株、权利要求3所述的乙氧基喹啉单克隆抗体或权利要求4所述的组合物。
6.一种试纸条，其特征在于：所述试纸条中含有权利要求1所述的杂交瘤细胞株、权利要求3所述的乙氧基喹啉单克隆抗体或权利要求4所述的组合物。
7.根据权利要求6所述的试纸条，其特征在于：所述试纸条还包括样品垫、胶体金垫、吸水垫和醋酸纤维垫，所述胶体金垫上包被有胶体金标记的乙氧基喹啉单克隆抗体。
8.一种试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中含有权利要求1所述的杂交瘤细胞株、权利要求3所述的乙氧基喹啉单克隆抗体或权利要求4所述的组合物。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括酶标板、乙氧基喹啉包被抗原、乙氧基喹啉标准液、酶标记二抗和显色液。
10.权利要求3所述的乙氧基喹啉单克隆抗体、权利要求4所述的组合物、权利要求5所述的芯片、权利要求6-7任一所述的试纸条或权利要求8-9任一所述的试剂盒在检测乙氧基喹啉中的应用。
