本发明提供结合并稳定在人髓系细胞触发受体2(trem2)蛋白的抗体和使用这些抗体的方法。
背景技术：
1、髓系细胞触发受体或“trem”上是一组跨膜糖蛋白，其在不同类型的骨髓细胞上表达，例如巨噬细胞、树突细胞、破骨细胞、小胶质细胞、肥大细胞、单核细胞、肺上皮细胞、皮肤朗格汉斯(langerhans)细胞、库普弗(kupffer)细胞和中性粒细胞(takaki,r.等人,immunol.rev.[免疫学评论],2006,214:118-29)。trem在其细胞外结构域中具有免疫球蛋白(ig)型折叠，因此属于免疫球蛋白超家族(igsf)。trem受体含有短的细胞内结构域，但缺少用于信号传导介质的对接基序，并且需要衔接蛋白，例如dap12(12kda的dnax活化蛋白)用于细胞活化。已报道两个trem成员：trem1和trem2，两者都在免疫和炎症应答中起重要作用。编码人trem的基因定位于染色体6p21.1，染色体6p21.1携带编码trem1、trem2、trem3、trem4和trem5的基因簇，以及trem样基因。
2、trem2是约40kda的糖蛋白，其在n-去糖基化后降低至26kda。整个trem2蛋白由以下组成：前导信号肽(氨基酸1-18)、单个v型igsf胞外区(氨基酸19-132)、茎区(氨基酸133-172)、带正电荷的跨膜结构域(氨基酸173-197)和胞质尾(氨基酸198-230)(kober等人,elife 5(2016)；kober等人,j.mol.biol.[分子生物学杂志]429(2017)1607-1629.)。由外显子2编码的细胞外区域由单一类型的v igsf结构域(其含有三个潜在的n-糖基化位点)构成。推定的跨膜区含有带电荷的赖氨酸残基。trem2的细胞质尾缺乏信号基序，并且被认为通过信号传导衔接子分子dap12/tryrobp发出信号。
3、trem2与dap12物理缔合，dap12充当trem2和许多其他细胞表面受体的信号传导衔接子蛋白。dap12的细胞质结构域含有免疫受体酪氨酸活化基序(itam)(wunderlich,j.biol.chem[生物化学杂志].288,33027–33036,2013)。相互作用受体活化后，dap12通过src激酶在保守性itam酪氨酸残基上经历磷酸化。随后的syk蛋白激酶的募集和活化触发下游信号传导途径，包括丝裂原活化蛋白激酶(mapk)、pi3k、nfκb和磷脂酶cγ(plcγ)的活化。
4、trem2可以被以下活化：脂多糖(lps)，热休克蛋白60，神经碎片，细菌，载脂蛋白e和各种阴离子和两性离子脂质，例如磷脂酸(pa)、磷脂酰甘油(pg)、磷脂酰丝氨酸(ps)、磷脂酰肌醇(pi)、磷脂酰胆碱(pc)、心磷脂和鞘磷脂。trem2活化增加小胶质细胞和巨噬细胞的吞噬能力，减少促炎细胞因子的释放并限制tlr信号传导。trem2通过与csf-1受体信号传导协同维持小胶质细胞存活。此外，trem2与调节细胞粘附和运动的从蛋白-a1相互作用。trem2还富集在接触aβ斑块或神经元碎片的那些小胶质细胞表面区域(yuan等人,neuron[神经元]90(2016)724–739)。最近已经鉴定了在这种环境中由trem2感知的一些配体，例如磷脂和髓磷脂(poliani等人,j.clin.invest.[临床研究杂志]125(2015):2161-2170)以及apoe(atagi等人,j.biol.chem.[生物化学杂志]290(2015):26043-26050；bailey等人,j.biol.chem.[生物化学杂志]290(2015):26033-26042)。其他配体可以是aβ和斑块相关的神经元碎片，因为trem2有助于将aβ摄取到小胶质细胞中(xiang等人,embo mol.med.[欧洲分子生物学学会杂志之分子医学]8(2016):992-1004)。trem2还被证明在清除凋亡细胞(takahashi等人,j.exp.med.201(2005),647-657)、髓鞘碎片(poliani等人,j.clin.invest.[临床研究杂志]125(2015):2161-2170)和细菌珠(cen等人,am.j.respir.[美国呼吸学杂志].188(2013)201-212)中起作用。trem2信号传导促进摄入的捕获物的降解，并且对于脂质代谢、髓磷脂摄取和细胞内分解是至关重要的。
5、trem2通过胞外域脱落和膜内蛋白水解进行顺序蛋白水解加工(wunderlich,j.biol.chem.[生物化学杂志]288,33027–33036,2013)。在胞外域脱落期间，trem2的胞外域由蛋白酶释放，所述蛋白酶是例如adam成员(含有解整联蛋白和金属蛋白酶结构域的蛋白质)或bace(β-位点app切割酶)家族(kleinberger,sci.transl.med.[科学转化医学]2014；6(243):243ra86)。
6、去除胞外域后，通过γ-分泌酶介导的膜内蛋白水解进一步处理剩余的膜保留片段。已经在树突细胞培养物的上清液以及来自患有非炎性神经疾病和多发性硬化的患者的血浆和csf(脑脊液)样品中观察到由胞外域脱落产生的trem2的可溶性片段(strem2)(kleinberger，2014)。人csf中trem2即strem2的脱落的胞外域已经被评估为潜在的阿尔茨海默病(ad)生物标志物，并且已经显示在一般的衰老过程中增加(suarez-calvet,embomol.med.[欧洲分子生物学学会杂志之分子医学]8,466-476,2016)。在ad过程中的详细分析显示，在ad痴呆中，strem2在临床症状出现之前在ad早期增加，在mci-ad中达到峰值，并且保持升高的但与mci-ad阶段相比较低的水平(suarez-calvet,2016)。
7、疾病高峰期trem2表达的增加推动了消退(例如腹膜炎，伤口愈合)(turnbull,2006；gawish,2015)。在诸如神经炎症的慢性炎症条件下，trem2不断脱落并且不能在小胶质细胞和巨噬细胞中发挥其信号传导功能。因此，稳定和/或防止trem2在细胞表面脱落将恢复小胶质细胞和巨噬细胞中功能性的、能够进行信号传导的trem2表达。
8、人类遗传学研究表明，表面trem2的缺失而不是缺乏strem2会导致疾病风险。例如，trem2蛋白中位置47的氨基酸从r到h的突变(例如，在seq id no:1中)导致细胞表面表达略微降低(kleinberger2014)，并且降低trem2的配体结合能力(wang 2015,atagi 2015,bailey2015)。trem2中的氨基酸突变t66m导致trem2在细胞表面缺乏表达(kleinberger2014)，因此不产生可溶性trem2。trem2的切割位点的突变：h157y增强strem2的表达并减少全长膜结合的trem2，并且与ad风险增加相关(thornton 2017,schlepckow 2017)。因此，这些遗传学研究表明，在细胞表面稳定trem2对于减少strem2和增加质膜结合的trem2都是希望的。
9、haass等人(wo 18015573)产生了抗体，这些抗体结合跨越trem2茎区的氨基酸152-161的10个氨基酸的肽段(ahvehsisrs seq id no:132)并抑制trem2切割。此类抗体通过直接结合并且由此封闭切割位点防止trem2的切割。schwabe等人(wo 17062672)披露了与trem2结合的抗体。然而，任何披露的抗体都没有表明稳定作用。相反，对于wo 17062672中描述的一些抗体，报道了去稳定作用(实例15)。
10、因此，需要鉴定和开发能够稳定trem2并活化和/或促进或trem2相关功能的htrem2抗体，其具有良好的可开发特征并且适合于治疗患有其中trem2稳定化是有利的神经退行性疾病的患者。
技术实现思路
1、已发表的文献已针对trem2的茎区产生抗体，这些抗体稳定trem2，因为adam17的切割位点位于该茎区内。实际上，预期诸如抗体(或其结合片段)的大分子将在空间上阻碍脱落酶进入茎(氨基酸133-172)的相对小区域。因此，先前产生针对trem2的稳定化抗体的努力已经针对trem2的茎区并不出人意料。trem2的igsf区(seq id no:1、2或3中任一个的氨基酸19-132)位于远离切割位点(h157)并且是胞外域的一部分。到目前为止，igsf区还没有被认为是稳定trem2的抗体的潜在靶标，因为预期针对trem2的igsf区的抗体不会在空间上阻碍脱落酶进入trem2切割位点。
2、出人意料的是，我们发现本文披露的抗体与igsf区结合并且能够有效地稳定细胞表面上的trem2。我们还显示这种抗体能够显示功能性下游效应，例如促进人m2a巨噬细胞中trem2依赖性吞噬作用。此外，此类抗体还可以增强体内trem2依赖性功能，例如通过增加脑中小胶质细胞或巨噬细胞的吞噬能力。
3、因此，本文提供了抗体或其抗原结合片段，例如单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人trem2(htrem2)的igsf结构域并稳定htrem2蛋白。这种抗体在本文中称为“htrem2抗体或其抗原结合片段”。这些htrem2抗体或其抗原结合片段可以(i)减少或抑制trem2胞外域的脱落；(ii)稳定细胞表面的trem2蛋白；和/或(iii)维持或增加trem2功能，例如与其同源配体结合、细胞内信号传导、增加吞噬作用、促进吞噬物质的降解、以及促进trem2依赖性下游调节功能。由于功能失调的trem2或缺乏表面trem2与人神经炎症和神经退行性病理相关，本文所述的htrem2抗体或其抗原结合片段可用于治疗、预防或诊断神经炎症或神经退行性疾病，例如阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、那须-哈科拉(nasu-hakola)病、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化(als)、抗nmda受体脑炎、自闭症、脑狼疮(np-sle)、化疗引起的周围神经病变(cipn)、带状疱疹后神经痛、慢性炎症性脱髓磷脂性多发性神经病(cidp)、癫痫、格林-巴利综合征(gbs)、包涵体肌炎、溶酶体贮积病、如尼曼-皮克病(niemann-pick c)和黏多糖病ii/iiib、异染性脑白质营养不良、多灶性运动神经病、重症肌无力、神经白塞病(neuro-behcet’s disease)、视神经脊髓炎(nmo)、视神经炎、多肌炎、皮肌炎、拉斯穆森脑炎(rasmussen’s encephalitis)、雷特综合征、中风、横贯性脊髓炎、创伤性脑损伤、脊髓损伤、病毒性脑炎或细菌性脑膜炎。本文所述的htrem2抗体或其抗原结合片段也适用于治疗、预防或诊断由trem2的广泛蛋白水解切割或表达trem2受体的异常或突变变体的细胞介导的或与其相关的自身免疫性障碍、炎性障碍或恶性障碍。在一些优选的实施例中，本文所述的htrem2抗体或其抗原结合片段可用于治疗、预防或诊断选自阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化或那须-哈科拉病的疾病。本文还提供了使用本文披露的trem2结合抗体或抗原结合片段诊断和/或治疗trem2相关疾病的方法。
4、在一个方面，本文提供了抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段特异性结合trem2蛋白的igsf结构域并稳定trem2蛋白。在一些优选的实施例中，这些抗体或其抗原结合片段使表达trem2的细胞(例如巨噬细胞、树突细胞、破骨细胞、小胶质细胞、肥大细胞、单核细胞、肺上皮细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、中性粒细胞或肝癌细胞)的细胞表面上的trem2蛋白稳定。在一些实施例中，这些抗体或其抗原结合片段减少trem2蛋白的胞外域的蛋白水解脱落。
5、在一些实施例中，本文提供了特异性结合人trem2的igsf结构域的抗体或其抗原结合片段。例如，此类抗体或其抗原结合片段结合人trem2的igsf结构域，该igsf结构域包含seq id no:1的氨基酸残基19至132，seq id no:2的氨基酸残基19至132，或seq id no:3的氨基酸残基19至132。在一些实施例中，trem2抗体是人抗体或人源化抗体。在一些实施例中，抗原结合片段是fab、f(ab')2、fv片段、scfv、微抗体(minibody)或双抗体(diabody)。
6、在一些实施例中，trem2抗体是双特异性抗体。在一些实施例中，双特异性抗体特异性结合人trem2和dap12。
7、在一些实施例中，trem2抗体包含fc区。在一些实施例中，fc区是修饰的igg1 fc区，其与亲本抗体相比时具有一个或多个突变并且具有降低的抗体依赖性细胞毒性(adcc)或补体依赖性细胞毒性(cdc)活性。在一些实施例中，fc区选自igg2 fc区，igg4 fc区或igg2/igg4杂合fc区。
8、在一些实施例中，htrem2抗体或其抗原结合片段是单克隆的。本文提供了编码此类单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸，以及包含编码此类单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸的载体和宿主细胞。
9、另一方面，本文提供药物组合物，其包含一种或多种本文所述的trem2抗体或其抗原结合片段，或编码此类抗体或抗原结合片段的核酸，或包含此类核酸的细胞，和药学上可接受的载体。
10、另一方面，本文提供了通过向受试者施用治疗有效量的本文所述的任何trem2抗体或其抗原结合片段来治疗有此需要的受试者中的与trem2功能丧失相关的疾病的方法。这些方法可以包括以下一个或多个步骤：(1)测定从受试者获得的样品中的细胞表面trem2水平；(2)选择细胞表面trem2水平低于参考水平的受试者，其中参考水平是从健康受试者获得的样品中的细胞表面trem2水平；和(3)给受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段特异性结合trem2蛋白的igsf结构域并稳定trem2蛋白。在一些实施例中，这些方法还包括向受试者施用第二药剂。样品中的细胞表面trem2水平可以通过选自以下的测定来确定：流式细胞术、免疫组织化学、蛋白质印迹、免疫荧光测定、放射免疫测定(ria)、酶联免疫吸附测定(elisa)、均相时间分辨荧光(htrf)、或正电子发射断层扫描(pet)。在一些实施例中，样品包含脑脊液及其细胞组分。在一些实施例中，与trem2功能丧失相关的疾病是神经炎症或神经退行性疾病，例如阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、那须-哈科拉病、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化(als)、抗nmda受体脑炎、自闭症、脑狼疮(np-sle)、化疗引起的周围神经病变(cipn)、带状疱疹后神经痛、慢性炎症性脱髓磷脂性多发性神经病(cidp)、癫痫、格林-巴利综合征(gbs)、包涵体肌炎、溶酶体贮积病、如尼曼-皮克病(niemann-pick c)和黏多糖病ii/iiib、异染性脑白质营养不良、多灶性运动神经病、重症肌无力、神经白塞病、视神经脊髓炎(nmo)、视神经炎、多肌炎、皮肌炎、拉斯穆森脑炎(rasmussen’s encephalitis)、雷特综合征、中风、横贯性脊髓炎、创伤性脑损伤、脊髓损伤、病毒性脑炎或细菌性脑膜炎。在一些优选的实施例中，与trem2功能丧失相关的疾病是选自阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化或那须-哈科拉病的神经退行性疾病。在进一步优选的实施例中，该疾病是阿尔茨海默病。在一些实施例中，trem2抗体或其抗原结合片段使表达trem2的细胞(选自巨噬细胞、树突细胞、破骨细胞、小胶质细胞、肥大细胞、单核细胞、肺上皮细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、中性粒细胞或肝癌细胞)的细胞表面上的trem2蛋白稳定。在一些实施例中，trem2抗体或其抗原结合片段通过口服、静脉内、颅内、鞘内、皮下或鼻内途径施用受试者。
11、另一方面，本文提供trem2抗体或其抗原结合片段，其用于治疗与trem2功能丧失相关的疾病。在一些优选的实施例中，这些抗体或其抗原结合片段特异性结合trem2蛋白的igsf结构域(即seq id no:1的氨基酸残基19至132，seq id no:2的氨基酸残基19至132，或seq id no:3的氨基酸残基19至132)并稳定trem2蛋白。在一些优选的实施例中，这些抗体或其抗原结合片段使表达trem2的细胞(选自巨噬细胞、树突细胞、破骨细胞、小胶质细胞、肥大细胞、单核细胞、肺上皮细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、中性粒细胞或肝癌细胞)的细胞表面上的trem2蛋白稳定。在一些实施例中，与trem2功能丧失相关的疾病是神经炎症或神经退行性疾病，例如阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、那须-哈科拉病、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化(als)、抗nmda受体脑炎、自闭症、脑狼疮(np-sle)、化疗引起的周围神经病变(cipn)、带状疱疹后神经痛、慢性炎症性脱髓磷脂性多发性神经病(cidp)、癫痫、格林-巴利综合征(gbs)、包涵体肌炎、溶酶体贮积病、如尼曼-皮克病(niemann-pick c)和黏多糖病ii/iiib、异染性脑白质营养不良、多灶性运动神经病、重症肌无力、神经白塞病、视神经脊髓炎(nmo)、视神经炎、多肌炎、皮肌炎、拉斯穆森脑炎(rasmussen’s encephalitis)、雷特综合征、中风、横贯性脊髓炎、创伤性脑损伤、脊髓损伤、病毒性脑炎或细菌性脑膜炎。在一些优选的实施例中，与trem2功能丧失相关的疾病是选自阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化或那须-哈科拉病的神经退行性疾病。在进一步优选的实施例中，该疾病是阿尔茨海默病。在一些实施例中，trem2抗体或其抗原结合片段使表达trem2的细胞(选自巨噬细胞、树突细胞、破骨细胞、小胶质细胞、肥大细胞、单核细胞、肺上皮细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、中性粒细胞或肝癌细胞)的细胞表面上的trem2蛋白稳定。
1.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与人髓系细胞触发受体2(htrem2)蛋白的免疫球蛋白超家族(igsf)结构域结合并稳定htrem2蛋白(例如，seq idno:1、2或3)。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合一个或多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的d39、s40、m41、k42、w44、g45、r46、r47、h67、n68、l69、w70、l71、l72、f74、l75、r77、d87、t88、l89和g90。
3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合htrem2的一个或多个选自由以下组成的组的残基：d39、s40、m41、k42、w44、g45、r46和r47，一个或多个选自由以下组成的组的残基：h67、n68、l69、w70、l71、l72、f74、l75和r77，以及一个或多个选自由以下组成的组的残基：d87、t88、l89和g90。
4.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合htrem2的五个或更多个选自由以下组成的组的残基：d39、s40、m41、k42、w44、g45、r46和r47，四个或更多个选自由以下组成的组的残基：h67、n68、l69、w70、l71、l72、f74、l75和r77，以及三个或更多个选自由以下组成的组的残基：d87、t88、l89和g90。
5.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合htrem2的七个或更多个选自由以下组成的组的残基：d39、s40、m41、k42、w44、g45、r46和r47，四个或更多个选自由以下组成的组的残基：h67、n68、l69、w70、l71、l72、f74、l75和r77，以及三个或更多个选自由以下组成的组的残基：d87、t88、l89和g90。
6.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合htrem2的五个或更多个选自由以下组成的组的残基：d39、s40、m41、k42、w44、g45、r46和r47，所有残基h67、n68、l69、w70、l71、l72、f74、l75和r77，以及三个或更多个选自由以下组成的组的残基：d87、t88、l89和g90。
7.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合一个或多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
8.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合两个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
9.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合三个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
10.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合四个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
11.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合五个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
12.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合六个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
13.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合七个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
14.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合八个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
15.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合九个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
16.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合htrem2的所有残基s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88和l89。
17.如权利要求7至16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合一个或多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的d39、k42、r46和g90。
18.如权利要求7至16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合两个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的d39、k42、r46和g90。
19.如权利要求7至16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合三个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的d39、k42、r46和g90。
20.如权利要求7至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合htrem2的所有残基d39、k42、r46和g90。
21.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合htrem2的所有残基s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88、l89、d39、k42、r46和g90。
22.如权利要求7至16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合一个或多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的r47、h67、n68、l69、l75、r77和d87。
23.如权利要求7至16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合两个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的r47、h67、n68、l69、l75、r77和d87。
24.如权利要求7至16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合三个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的r47、h67、n68、l69、l75、r77和d87。
25.如权利要求7至16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合四个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的r47、h67、n68、l69、l75、r77和d87。
26.如权利要求7至16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合五个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的r47、h67、n68、l69、l75、r77和d87。
27.如权利要求7至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合六个或更多个选自下组的残基，该组由以下组成：htrem2的r47、h67、n68、l69、l75、r77和d87。
28.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段结合htrem2的所有残基s40、m41、w44、g45、w70、l71、l72、f74、t88、l89、r47、h67、n68、l69、l75、r77和d87。
29.如权利要求1至28中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段活化htrem2。
30.如权利要求1至29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段促进表达trem2的细胞中的一种或多种htrem2依赖性生理活性。
31.如权利要求1至30中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段：
32.如权利要求1至31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中例如通过facs分析对hm2a巨噬细胞所测量，该抗体或其抗原结合片段以1nm或更低的半最大有效浓度(ec50)结合htrem2，例如结合细胞表面上的htrem2。
33.如权利要求1至32中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中例如通过facs分析对hm2a巨噬细胞所测量，该抗体或其抗原结合片段以0.59nm或更低的半最大有效浓度(ec50)结合htrem2，例如结合细胞表面上的htrem2。
34.如权利要求1至33中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中例如通过表面等离子体共振(spr)测量，该抗体或其抗原结合片段以150pm或更低的解离常数(kd)结合htrem2。
35.如权利要求1至34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中例如通过表面等离子体共振(spr)测量，该抗体或其抗原结合片段以50pm或更低的解离常数(kd)结合htrem2。
36.如权利要求1至35中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段使表达htrem2的细胞的细胞表面上的htrem2蛋白稳定。
37.如权利要求36所述的抗体或其抗原结合片段，其中该表达htrem2的细胞是巨噬细胞，例如m2a巨噬细胞、树突细胞、破骨细胞、小胶质细胞、肥大细胞、单核细胞、肺上皮细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、中性粒细胞或肝癌细胞。
38.如权利要求1至37中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段在hm2a巨噬细胞中以100nm或更低的浓度减少htrem2蛋白的胞外域的脱落。
39.如权利要求1至38中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中trem2细胞表面表达增加3倍或更高。
40.如权利要求1至39中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中htrem2的igsf结构域包含seq id no 1、2和3中任一个的氨基酸残基19至132。
41.如权利要求1至40中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
42.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段结合htrem2蛋白的igsf结构域，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
43.如权利要求1至42中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含
44.如权利要求1至43中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：
45.如权利要求1至43中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：
46.如权利要求1至43中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：
47.如权利要求1至43中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：
48.如权利要求1-47中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
49.如权利要求1-48中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
50.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与人髓系细胞触发受体2(htrem2)的免疫球蛋白超家族(igsf)结构域结合，该抗体或其抗原结合片段包含：
51.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与如权利要求1-50中任一项所述的任何抗体或其抗原结合片段竞争结合htrem2蛋白。
52.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段结合与如权利要求1-51中任一项所述的任何抗体或其抗原结合片段的表位重叠的表位。
53.如权利要求1-52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体具有igg1、igg2、igg3或igg4同种型。
54.如权利要求1-52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含fc区，该fc区选自igg1 fc区、igg2 fc区、igg4 fc区、或igg2/igg4杂合fc区。
55.如权利要求1-49或51-54中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含修饰的fc区，该修饰的fc区相比于亲本抗体具有降低的抗体依赖性细胞毒性(adcc)或补体依赖性细胞毒性(cdc)活性。
56.如权利要求1-55中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段是人或人源化抗体或其片段。
57.如权利要求1-56中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与另一个部分缀合。
58.如权利要求1-57中任一项所述的抗体，其中所述抗体属于igg1同种型。
59.如权利要求1-56中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人或人源化抗体。
60.如权利要求1-57中任一项的抗体的抗原结合片段，其中该抗原结合片段选自fab、f(ab')2、fv片段、scfv、微抗体或双抗体。
61.如权利要求1-60中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是单克隆的。
62.如权利要求1-61中任一项所述的抗体，其中该抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。
63.如权利要求62所述的抗体，其中该多特异性抗体，例如双特异性抗体，特异性结合htrem2和人dap12(12kda的dnax活化蛋白)。
64.如权利要求1-63中任一项所述的抗体，其中所述抗体通过该fc区的突变而具有改变的效应子功能。
65.一种核酸分子或核酸分子组，该核酸分子或核酸分子组编码如权利要求1至64中任一项所述的抗体或其抗原结合片段中的任一种。
66.如权利要求65所述的核酸分子，其中该核酸是dna。
67.如权利要求65或66所述的核酸分子或核酸分子组，该核酸分子或核酸分子组包含seq id no:14、28、51、65、16、30、34、36、38、40、53、67、71、73、75、77、25、31、62、68、27、32、64、69、13、93、15、95、80、104、82或106中的一个或多个。
68.一种载体，该载体包含如权利要求65-67中任一项所述的核酸分子。
69.如权利要求68所述的载体，其中该载体是克隆载体或表达载体。
70.如权利要求68或69所述的载体，其中所述载体包含seq id no:14、28、51、65、16、30、34、36、38、40、53、67、71、73、75、77、25、31、62、68、27、32、64、69、13、93、15、95、80、104、82或106中的一个或多个，或其编码至少一个cdr区的片段。
71.如权利要求68-70中任一项所述的载体，其中该载体能够在原核细胞和/或真核细胞中复制。
72.如权利要求68-71中任一项所述的载体，其中该载体选自dna载体、rna载体、质粒、粘粒或病毒载体。
73.如权利要求68-72中任一项所述的载体，其还包含可检测的和/或可选择的标志物。
74.具有两个如权利要求68-73中任一项所述的表达载体的组，一个载体编码a)包含seq id no:13或50的至少一个vh结构域，并且另一个载体编码包含seq id no:24或61的至少一个vl结构域；或
75.如权利要求68-74中任一项所述的载体，其中该载体是病毒载体，任选其中该病毒载体是慢病毒、腺病毒、腺相关病毒(aav)、单纯疱疹病毒(hsv)、细小病毒、逆转录酶病毒、牛痘病毒、辛德毕斯病毒、流感病毒、呼肠孤病毒、新城疫病毒(ndv)、麻疹病毒、水疱性口炎病毒(vsv)、脊髓灰质炎病毒、痘病毒、塞内卡谷病毒、柯萨奇病毒、肠病毒、粘液瘤病毒或马拉巴病毒。
76.如权利要求75所述的载体，其中该载体是aav载体。
77.如权利要求68-76中任一项所述的载体，其中该载体还包含启动子。
78.如权利要求68-77中任一项所述的载体，其中该载体包含aav9衣壳和aav载体质粒，该aav载体质粒包含(1)衍生自aav2的itr，(2)cmv增强子(例如，包含seq id no:134)，(3)cba启动子(例如，包含seq id no:135)，(4)sv40内含子(例如，包含seq id no:137)，(5)编码htrem2抗体或其抗原结合片段(例如，如本文所述)的多核苷酸，和(6)bgh聚a信号(例如，包含seq id no:138)。
79.如权利要求78所述的载体，其中元件(2)至(6)从5'至3'布置在该aav载体质粒上。
80.如权利要求78或79所述的载体，其中元件(2)至(6)中的任一个布置在该aav载体质粒上的5’itr和3'itr之间。
81.如权利要求78-80中任一项所述的载体，其中该aav载体是scaav载体。
82.如权利要求68-75中任一项所述的载体，其中该载体是慢病毒载体。
83.一种细胞，其包含如权利要求64-66中任一项所述的核酸分子或核酸分子组或如权利要求68-82中任一项所述的载体。
84.一种产生htrem2抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括：(i)培养如权利要求83所述的细胞和(ii)从培养物中分离该htrem2抗体或其抗原结合片段。
85.一种药物组合物，其包含如权利要求1-64中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求65-67中任一项所述的核酸分子或核酸分子组、如权利要求68-82中任一项所述的载体或如权利要求83所述的细胞，和药学上可接受的载体。
86.如权利要求1-64中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求65-67中任一项所述的核酸分子或核酸分子组、如权利要求68-82中任一项所述的载体、如权利要求83所述的细胞或如权利要求85所述的药物组合物，其用作药物。
87.如权利要求1-64中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求65-67中任一项所述的核酸分子或核酸分子组、如权利要求68-82中任一项所述的载体、如权利要求83所述的细胞或如权利要求85所述的药物组合物，其用于治疗与htrem2功能丧失相关的疾病。
88.如权利要求1-64中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求65-67中任一项所述的核酸分子或核酸分子组、如权利要求68-82中任一项所述的载体、如权利要求83所述的细胞或如权利要求85所述的药物组合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗与htrem2功能丧失相关的疾病。
89.如权利要求87所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子或核酸分子组、载体、细胞或药物组合物，或如权利要求88所述的用途，其中该疾病是神经炎症或神经退行性疾病，任选地，其中该神经炎症或神经退行性疾病是阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、那须-哈科拉病、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化(als)、抗nmda受体脑炎、自闭症、脑狼疮(np-sle)、化疗引起的周围神经病变(cipn)、带状疱疹后神经痛、慢性炎症性脱髓磷脂性多发性神经病(cidp)、癫痫、格林-巴利综合征(gbs)、包涵体肌炎、溶酶体贮积病、尼曼-皮克病、黏多糖病ii/iiib、异染性脑白质营养不良、多灶性运动神经病、重症肌无力、神经白塞病、视神经脊髓炎(nmo)、视神经炎、多肌炎、皮肌炎、拉斯穆森脑炎、雷特综合征、中风、横贯性脊髓炎、创伤性脑损伤、脊髓损伤、病毒性脑炎或细菌性脑膜炎。
90.如权利要求87所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子或核酸分子组、载体、细胞或药物组合物，或如权利要求88所述的用途，其中该疾病是阿尔茨海默病。
91.如权利要求87所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子或核酸分子组、载体、细胞或药物组合物，或如权利要求88所述的用途，其中该疾病是帕金森病。
92.如权利要求87所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子或核酸分子组、载体、细胞或药物组合物，或如权利要求88所述的用途，其中该疾病是多发性硬化。
93.如权利要求87所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子或核酸分子组、载体、细胞或药物组合物，或如权利要求88所述的用途，其中该疾病是额颞叶痴呆。
94.如权利要求87所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子或核酸分子组、载体、细胞或药物组合物，或如权利要求88所述的用途，其中该抗体或其抗原结合片段、该核酸分子或核酸分子组、该载体、该细胞或该药物组合物通过口服、静脉内、颅内、鞘内、皮下或鼻内途径施用受试者。
95.如权利要求87所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子或核酸分子组、载体、细胞或药物组合物，或如权利要求88所述的用途，其中将该抗体或其抗原结合片段、该核酸分子或核酸分子组、该载体、该细胞或该药物组合物与至少一种另外的治疗剂或治疗程序组合施用受试者。
96.如权利要求87所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子或核酸分子组、载体、细胞或药物组合物，或如权利要求88所述的用途，其中该抗体或其抗原结合片段、该核酸分子或核酸分子组、该载体、该细胞或该药物组合物与至少一种另外的治疗剂组合地施用受试者，其中所述治疗剂包含以下中的一种或多种：bace抑制剂、抗tau抗体、tau反义寡核苷酸、抗淀粉样β抗体、芬戈莫德、bg12或富马酸二甲酯、干扰素β或那他珠单抗。
97.一种在有需要的受试者中治疗与htrem2功能丧失相关的疾病的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的如权利要求1-64中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求65-67中任一项所述的核酸分子或核酸分子组、如权利要求68-82中任一项所述的载体、如权利要求83所述的细胞或如权利要求85所述的药物组合物。
98.如权利要求97所述的方法，其中该方法包括：
99.如权利要求98所述的方法，其中该样品包含脑脊液。
100.如权利要求98或99所述的方法，其中所述样品中的细胞表面trem2水平通过选自以下的测定来确定：流式细胞术、免疫组织化学、蛋白质印迹、免疫荧光测定、放射免疫测定(ria)、酶联免疫吸附测定(elisa)、均相时间分辨荧光(htrf)、或正电子发射断层扫描(pet)。
101.如权利要求97-100中任一项所述的方法，其中该与trem2功能丧失相关的疾病是神经炎症或神经退行性疾病，任选地，其中该神经炎症或神经退行性疾病是阿尔茨海默病、额颞叶痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、那须-哈科拉病、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化(als)、抗nmda受体脑炎、自闭症、脑狼疮(np-sle)、化疗引起的周围神经病变(cipn)、带状疱疹后神经痛、慢性炎症性脱髓磷脂性多发性神经病(cidp)、癫痫、格林-巴利综合征(gbs)、包涵体肌炎、溶酶体贮积病、尼曼-皮克病、黏多糖病ii/iiib、异染性脑白质营养不良、多灶性运动神经病、重症肌无力、神经白塞病、视神经脊髓炎(nmo)、视神经炎、多肌炎、皮肌炎、拉斯穆森脑炎、雷特综合征、中风、横贯性脊髓炎、创伤性脑损伤、脊髓损伤、病毒性脑炎或细菌性脑膜炎。
102.如权利要求97-101中任一项所述的方法，其中该疾病是阿尔茨海默病。
103.如权利要求97-101中任一项所述的方法，其中该疾病是帕金森病。
104.如权利要求97-101中任一项所述的方法，其中该疾病是多发性硬化。
105.如权利要求97-101中任一项所述的方法，其中该疾病是额颞叶痴呆。
106.如权利要求97-105中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段、该核酸分子或核酸分子组、该载体、该细胞或该药物组合物通过口服、静脉内、颅内、鞘内、皮下或鼻内途径施用该受试者。
107.一种稳定受试者中的htrem2蛋白的方法，该方法包括以有效稳定htrem2的量向该受试者施用如权利要求1-64中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求65-67中任一项所述的核酸分子或核酸分子组、如权利要求68-82中任一项所述的载体、如权利要求83所述的细胞或如权利要求85所述的药物组合物。
108.如权利要求97-107中任一项所述的方法，该方法还包括向该受试者施用至少一种另外的治疗剂或进行至少一种另外的治疗程序。
109.如权利要求108所述的方法，其中所述另外的治疗剂包含以下中的一种或多种：bace抑制剂、抗tau抗体、tau反义寡核苷酸、抗淀粉样β抗体、芬戈莫德、bg12或富马酸二甲酯、干扰素β或那他珠单抗。
110.如权利要求108或109所述的方法，其中如权利要求1-64中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求65-67中任一项所述的核酸分子或核酸分子组、如权利要求68-82中任一项所述的载体、如权利要求83所述的细胞或如权利要求85所述的药物组合物与该另外的治疗剂同时、在该另外的治疗剂之前或在该另外的治疗剂之后施用。
111.如权利要求97-110中任一项所述的方法，其中施用该抗体或其抗原结合片段、该核酸分子或核酸分子组、该载体、该细胞或该药物组合物具有以下效果a-d中的一种或多种：
