本发明属于微生物检测或鉴定领域，涉及一种鲍曼不动杆菌用引物组及用于检测或鉴定鲍曼不动杆菌的试剂盒。
背景技术：
1、鲍曼不动杆菌(a.baumannii)于1954年得名，是一种非发酵糖类革兰阴性杆菌，广泛存在于医院环境中，是医院内感染的重要病原菌之一。鲍曼不动杆菌会引起菌血症、肺炎、脑膜炎、以及泌尿道和创口皮肤感染。由于其强大的耐药性和克隆传播能力，鲍曼不动杆菌已成为全球抗感染领域的重大挑战。该细菌拥有多种逃避人类免疫系统的机制，严重威胁患者的健康和生命安全，因此及时检测鲍曼不动杆菌感染对患者治疗以及预后来说是十分有必要的。
2、目前，传统的呼吸道病原体检测方法主要包括显微镜检查、细菌培养和免疫学检查等，这些方法复杂、耗时、技术难度大、灵敏度低；近几年分子生物学不断发展，多重荧光定量pcr是一种好的技术，可在单个反应中同时检测多个靶标基因，在高通量快速检测、节省样本和试剂、灵敏度和准确性、适应性等方面具有优势。但市售试剂盒中，如北京某生物公司hap细菌三重核酸检测试剂盒，其中针对鲍曼不动杆菌的检测在单个反应中只检测一个靶标基因，只有一对引物和一条探针，由于鲍曼不动杆菌基因组结构的多样性，单基因检测必定会造成漏检的情况发生。
技术实现思路
1、为了解决背景技术中存在的上述技术问题，本发明提供了一种鉴定结果准确率高、灵敏度高以及特异性强的鲍曼不动杆菌用引物组及用于检测或鉴定鲍曼不动杆菌的试剂盒。
2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
3、一种鲍曼不动杆菌用引物组，其特征在于：所述鲍曼不动杆菌用引物组包括两组双重荧光定量pcr引物组合，所述鲍曼不动杆菌用引物组的序列信息是：
4、pbp2-f：gatgaaccaatggatgcgcc；
5、pbp2-r：agttgccatggcgagttgta；
6、abc-f：ctgcccgtaacagctgaaga；
7、abc-r：aactcgccacaacaaatggc。
8、优选地，鲍曼不动杆菌用引物组在检测或鉴定鲍曼不动杆菌时的应用。
9、优选地，鲍曼不动杆菌用引物组中的pbp2-f以及pbp2-r用于扩增鲍曼不动杆菌的pbp2基因；所述鲍曼不动杆菌用引物组中的abc-f以及abc-r用于扩增鲍曼不动杆菌的abc基因。
10、一种鲍曼不动杆菌用探针，其特征在于：所述鲍曼不动杆菌用探针包括pbp2探针以及abc探针；
11、所述pbp2探针的序列是accaagtgaaagtgaaggc；
12、所述abc探针的序列是acagaagtgataaacccac。
13、优选地，pbp2探针的5'端标记有荧光报告基团6-fam，所述pbp2探针的3'端标记有荧光淬灭基团mgb；所述abc探针的5'端标记有荧光报告基团vic；所述abc探针的3'端标记有荧光淬灭基团mgb。
14、鲍曼不动杆菌用探针在检测或鉴定鲍曼不动杆菌时的应用。
15、优选地，所述pbp2探针探测鲍曼不动杆菌的pbp2基因；所述abc探针测鲍曼不动杆菌的abc基因。
16、一种用于检测或鉴定鲍曼不动杆菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括阴性对照、阳性对照、荧光pcr反应液、超纯水、鲍曼不动杆菌用引物组以及鲍曼不动杆菌用探针；所述阴性对照是超纯水；所述阳性对照是包含鲍曼不动杆菌pbp2基因以及包括鲍曼不动杆菌abc基因的重组质粒pmd-18t-pbp2及pmd-18t-abc。
17、一种基于如前所述的用于检测或鉴定鲍曼不动杆菌的试剂盒对鲍曼不动杆菌进行检测或鉴定的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
18、1)以待测样本的基因组dna为模板，使用如前所述的用于检测或鉴定鲍曼不动杆菌的试剂盒进行荧光定量pcr扩增，同时设定质量控制；
19、2)根据步骤1)的扩增结果，检测或鉴定待测样本是否存在鲍曼不动杆菌，得到检测或鉴定结果。
20、优选地，所述步骤1)中，双重荧光定量pcr反应总体积是25μl，双重荧光定量pcr反应体系包括：probe qpcr mix multiplus12.5μl，10μm的pbp2-f0.5μl，10μm的pbp2-r0.5μl，10μm的pbp2探针0.6μl，10μm的abc-f0.5μl，10μm的abc-r0.5μl，10μm的abc探针0.6μl，dna模板2μl，超纯水7.3μl；所述双重荧光定量pcr的反应条件为95℃预变性20s；然后，95℃变性1s，65℃退火20s，反应40个循环；
21、所述步骤1)的质量控制：每次实验设立阴性对照以及阳性对照，其中阴性对照是超纯水；所述阳性对照是浓度为4.32×107copies/μl的pmd-18t-pbp2标准质粒和浓度为3.59×106copies/μl的pmd-18t-abc标准质粒的等体积混合物；扩增结果中，阴性对照无ct值或ct值为0；阳性对照的ct值≤25；
22、所述步骤2)中的检测或鉴定结果包括待测样本阳性、待测样本可疑、待测样本阴性以及对检测或鉴定结果质疑；
23、所述待测样本阳性的判定条件是：双通道检测中，任何一个基因出现s型扩增曲线，ct值≤39；
24、所述待测样本可疑的判定条件是：任何一个基因出现s型扩增曲线，但ct值＞39；
25、所述待测样本阴性的判定条件是：没有出现s型扩增曲线，或者曲线虽然超过了阈值，但不呈s型；
26、所述对检测或鉴定结果质疑的，重复检测或鉴定，直至得到待测样本阳性、待测样本可疑或待测样本阴性。
27、本发明的优点是：
28、本发明提供了一种鲍曼不动杆菌用引物组及用于检测或鉴定鲍曼不动杆菌的试剂盒，本发明选取两个具备高度保守及特异性的靶标基因鲍曼不动杆菌pbp2基因和鲍曼不动杆菌abc基因，并将二者作为诊断靶标进行引物的设计并标记探针，上述鲍曼不动杆菌pbp2基因和鲍曼不动杆菌abc基因的引物相互之间不会产生干扰，可以满足多重pcr的要求，能够在同一pcr体系中，同时完成检测鲍曼不动杆菌的两个靶标基因，较单重的荧光定量pcr更加高效，准确性更高，同时还可以有效解决现有技术中鲍曼不动杆菌检测的假阳性和假阴性问题，具体而言，本发明具有如下优点：
29、1)本发明所选的鲍曼不动杆菌pbp2基因和鲍曼不动杆菌abc基因均具备高度保守性与特异性。依据本发明中的两个基因设计的引物和探针具备高灵敏度和高特异性，其对于其它易引起呼吸道感染的细菌和病毒等均无扩增反应；其扩增特异性高、重复性好，其对随机选取的300株鲍曼不动杆菌临床分离株的检出率达到100％，无漏检。
30、2)本发明的检测鲍曼不动杆菌两个靶标基因的试剂盒具备高特异性和高灵敏度，适用于对鲍曼不动杆菌的快速检测，具有高效性、可靠性和简便性，适合推广应用。
31、3)本发明在对鲍曼不动杆菌进行检测时，只需要1小时即可完成检测，通过单管反应同时检测鲍曼不动杆菌的两个具备高度保守及特异性的靶标基因(pbp2和abc基因)，有效解决现有技术中鲍曼不动杆菌检测的假阳性和假阴性问题，对300株鲍曼不动杆菌临床分离株的pcr阳性率达到100％，满足了相关临床检测的市场需求。
1.一种鲍曼不动杆菌用引物组，其特征在于：所述鲍曼不动杆菌用引物组包括两组双重荧光定量pcr引物组合，所述鲍曼不动杆菌用引物组的序列信息是：
2.根据权利要求1所述的鲍曼不动杆菌用引物组在检测或鉴定鲍曼不动杆菌时的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述鲍曼不动杆菌用引物组中的pbp2-f以及pbp2-r用于扩增鲍曼不动杆菌的pbp2基因；所述鲍曼不动杆菌用引物组中的abc-f以及abc-r用于扩增鲍曼不动杆菌的abc基因。
4.一种鲍曼不动杆菌用探针，其特征在于：所述鲍曼不动杆菌用探针包括pbp2探针以及abc探针；
5.根据权利要求4所述的鲍曼不动杆菌用探针，其特征在于：所述pbp2探针的5 '端标记有荧光报告基团6-fam，所述pbp2探针的3 '端标记有荧光淬灭基团mgb；所述abc探针的5'端标记有荧光报告基团vic；所述abc探针的3 '端标记有荧光淬灭基团mgb。
6.根据权利要求4或5所述的鲍曼不动杆菌用探针在检测或鉴定鲍曼不动杆菌时的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述pbp2探针探测鲍曼不动杆菌的pbp2基因；所述abc探针测鲍曼不动杆菌的abc基因。
8.一种用于检测或鉴定鲍曼不动杆菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括阴性对照、阳性对照、荧光pcr反应液、超纯水、如权利要求1所述的鲍曼不动杆菌用引物组以及如权利要求4或5所述的鲍曼不动杆菌用探针；所述阴性对照是超纯水；所述阳性对照是包含鲍曼不动杆菌pbp2基因以及包括鲍曼不动杆菌abc基因的重组质粒pmd-18t-pbp2及pmd-18t-abc；所述荧光pcr反应液是probe qpcr mix multiplus。
9.一种基于如权利要求8所述的用于检测或鉴定鲍曼不动杆菌的试剂盒对鲍曼不动杆菌进行检测或鉴定的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述步骤1）中，双重荧光定量pcr反应总体积是25μl，双重荧光定量pcr反应体系包括：probe qpcr mix multiplus12.5μl，10μm 的pbp2-f0.5μl，10μm的pbp2-r0.5μl，10μm的pbp2探针0.6μl，10μm的abc-f0.5μl，10μm的abc-r0.5μl，10μm的abc探针0.6μl，dna模板2μl，超纯水7.3μl；所述双重荧光定量pcr的反应条件为95℃预变性20s；然后，95℃变性1s，65℃退火20s，反应40个循环；
