本发明属于生物，涉及一种降低培养过程中二氧化碳分压及提高蛋白表达的培养基及其应用。
背景技术：
1、二氧化碳分压(pco2)是生物制品生产过程中的关键参数，直接影响生产过程中细胞的状态和生物制品的产量及产品质量。特别是在细胞培养后期，随着乳酸消耗，ph回升至设定上限，pco2将逐步增加，当其达到100-150mmhg或以上时，会导致细胞活率降低，表达量降低以及产品质量改变等，所以有效控制二氧化碳分压在通过细胞培养生产生物制品的工艺开发和生产过程尤为重要。
2、在细胞培养生产生物制品的工艺开发和规模化生产过程中，二氧化碳分压（pco2）主要通过增加底通和表通空气量，结合机械搅拌来控制。空气通气量的增加会改变培养体系中氧气的含量，甚至影响氧传质，致使氧气通气量增加和细胞代谢发生改变，最终导致细胞状态改变，影响整个生产过程，甚至有可能导致生产工艺放大失败。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的问题，本发明目的在于通过培养基成分调整来降低pco2，使其控制20mmhg~90mmhg之间，降低工艺控制风险；进而而有效控制细胞峰密度值，提高单细胞表达量（qp）和目标蛋白表达量。
2、为实现上述目的，本发明第一个方面公开了一种降低培养过程中二氧化碳分压及提高蛋白表达的补料培养基，所述补料培养基为af196或af176。
3、所述af176由altair cho feed+补充组分1构成；
4、其中补充组合分1包括：
5、甘氨酸，谷氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，脯氨酸，赖氨酸；
6、维生素b1，维生素b2，维生素b6，维生素b12；nacl，kcl，cacl2。
7、所述af196由af176+补充组分2构成；
8、其中，补充组分2包括：
9、cuso4·5h2o 0.5~150μm，
10、feso4 3.5~120μm，
11、znso4·7h2o 2.5~80μm，
12、mncl2·4h2o 0.5~50μm，
13、(nh4)2moo4 0.001~0.15μm，
14、na2seo3 0.003~1.6μm，
15、navo3 0.15~80μm，
16、cocl2·6h2o 0.05~150μm。
17、本发明第二个方面公开了上述补料培养基的使用方法，优选地，在培养过程中添加基础培养基与补料培养基对细胞株进行联合培养。其中基础培养基可以选自altaircho。
18、培养过程的具体方法为：
19、s1：利用基础培养基对chok1sv细胞进行复苏，传代前细胞密度控制6×106cells/ml以下，传代密度后控制0.5×106~1×106cells/ml；
20、s2：再向传代后细胞中添加补料培养基继续培养，培养完成后得到稳定驯化细胞株。
21、s1中的培养条件为：温度37℃，8%co2浓度，80%湿度，在120rpm和50mm振幅摇床中进行培养。
22、本发明第三个方面公开了上述的补料培养基在驯化细胞中的用途。优选为chok1sv细胞。
23、与现有技术相比，本发明有如下有益效果：
24、本发明技术方案通过对培养基成分的调整，使得pco2从100mmhg以上降至80mmhg以下，解决了生产规模二氧化碳的去除难的问题，同时发现在此基础上qp（单细胞表达量）提高了40%，表达量提高10%。代谢副产物铵离子降低27.7%。氧气通气量从近400ml/min降低至300 ml/min左右，以上均为从小试反应器至中试放大乃至生产亟需解决的问题，可以显著降低技术转移过程中的控制风险。
1.一种降低培养过程中二氧化碳分压及提高蛋白表达的补料培养基，其特征在于，所述补料培养基为af196和/或af176。
2.根据权利要求1所述的一种降低培养过程中二氧化碳分压及提高蛋白表达的补料培养基，其特征在于，所述af176由altair cho feed+补充组分1构成；
3.根据权利要求1或2任一项所述的一种降低培养过程中二氧化碳分压及提高蛋白表达的补料培养基，其特征在于，所述af196由af176+补充组分2构成；
4.如权利要求1-3任一项所述的补料培养基的使用方法，其特征在于，培养过程中添加基础培养基与补料培养基对细胞株进行联合培养。
5.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于，基础培养基选自altaircho。
6.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于，培养过程的具体方法为：
7.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，s1中的培养条件为：温度37℃，8%co2浓度，80%湿度，在120rpm和50mm振幅摇床中进行培养。
8.如权利要求1-3任一项所述的补料培养基在驯化细胞中的用途。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述细胞优选为chok1 sv细胞。
