本发明涉及分析检测，更具体地，涉及一种2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的检测方法。
背景技术：
1、2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐，cas号：88376-09-4，其结构式如下式(ⅰ)所示，是一种亮氨酸衍生物，其中，2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐可作为一种药物中间体，还可以作为一种放射性标记物广泛应用于神经性疾病的治疗中，例如帕金森病或阿尔茨海默病或心脏疾病、癌症疾病的示踪剂。然而，2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐存在对映异构体，且对映异构体的含量大小直接影响药物的手性纯度大小，从而影响药物的疗效。
2、
3、目前，由于此类氨基酸类衍生物没有紫外吸收，故测定2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体含量主要采用旋光仪进行测定，用比旋值测得的光学纯度来表征其手性纯度，较简洁快速，但在多数情况下不是很精确。该方法具有很大的局限性，例如：①必须已知在实验条件下的纯对映体的比旋值，以便与样品的测量结果进行比较；②旋光的测量或光学纯度的测定可能受到许多因素的影响，如偏振光波长、溶剂、溶液浓度、温度等，最重要的是，测量值会受到具有大比旋值的杂质的严重影响。也有相关报道提出直接用价格昂贵的通用型检测器以及昂贵的定制手性色谱柱进行测定，但这种方法的检测成本高，难以在大量生产的时候推广。所以到目前还未有2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的快速准确可靠的、检测成本低的检测方法。
4、因此，为了加强2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐的质量控制，亟需开发一种快速准确可靠的、检测成本低、能够满足大规模生产需求的2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的检测方法。
技术实现思路
1、本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的检测方法。本发明通过液相色谱法实现2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的定量检测，检测方法快速，结果准确可靠，检测成本低，能够满足大规模生产需求。
2、本发明的第一方面提供一种2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的检测方法。
3、具体地，一种2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的检测方法，包括如下步骤：
4、(1)配制空白溶液；取供试品溶于溶剂中，加入碱性溶液和含有酰卤基团的芳香族化合物，反应，调节ph值至4-6，经后处理后，制得供试品溶液；
5、(2)将所述空白溶液和所述供试品溶液分别采用液相色谱进行检测，得到色谱图a和色谱图b；
6、(3)根据所述色谱图a和色谱图b计算2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐的手性纯度及其对映异构体的含量；
7、所述液相色谱的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为正己烷；所述流动相b为异丙醇；
8、所述流动相a和流动相b的体积比为(97-99)：(3-1)；
9、所述液相色谱的柱温为5-10℃。
10、由于待测样品2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐无紫外吸收，因此无法用常规紫外检测器进行检测。针对上述问题，本发明采用衍生法，先将待测品中的2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体(2-甲基-d-亮氨酸盐酸盐)通过用含有酰卤基团的芳香族化合物进行反应，衍生化后，2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体带上了具有紫外吸收的芳香族基团，从而可实现紫外吸收，由此采用常规的紫外检测器与常规的手性色谱柱即可进行对映异构体的分离和检测，从而获知2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐的手性纯度以及其对映异构体的含量。本发明的方法无需采用价格较为高昂的通用型检测器和价格昂贵的专用手性柱，检测成本低。另外，衍生化处理后，无需进行纯化处理，通过调节hplc的检测条件，即可以直接进行检测，且检测结果准确度高。
11、优选地，步骤(1)中，所述供试品和所述含有酰卤基团的芳香族化合物的重量比为(0.5-2)：(0.5-2)。
12、进一步优选地，步骤(1)中，所述供试品和所述含有酰卤基团的芳香族化合物的重量比为(1-1.5)：(1-1.5)。
13、优选地，步骤(1)中，所述调节ph值为加入ph调节剂。
14、优选地，步骤(1)中，所述ph调节剂为乙酸、甲酸、盐酸、硝酸中的至少一种。
15、优选地，步骤(1)中，所述后处理包括：加入乙酸乙酯，取有机层减压浓缩，残留物用稀释剂溶解后，过滤，制得所述系统适用性溶液。
16、优选地，步骤(1)中，所述含有酰卤基团的芳香族化合物为苯甲酰氯、对甲苯甲酰氯、4-异丁氧基苯甲酰氯、4-甲酰基苯甲酰氯中的至少一种。
17、进一步优选地，步骤(1)中，所述含有酰卤基团的芳香族化合物为苯甲酰氯。
18、当含有酰卤基团的芳香族化合物为苯甲酰氯，当碱性溶液为三乙胺时，2-甲基-d-亮氨酸盐酸盐和苯甲酰氯的反应方程式如下：
19、
20、优选地，步骤(1)中，所述碱性溶液为三乙胺、二乙胺、氨水中的至少一种。
21、优选地，所述流动相a和流动相b的体积比为(98-99)：(2-1)。
22、优选地，所述液相色谱的稀释液为体积比为(97-99)：(3-1)的正己烷和异丙醇混合溶液。
23、进一步优选地，所述液相色谱的稀释液为体积比为(98-99)：(2-1)的正己烷和异丙醇混合溶液。
24、优选地，所述液相色谱采用等度洗脱。等度洗脱可改善分离效果。
25、优选地，所述液相色谱采用的色谱柱为chiralpak ic色谱柱。
26、优选地，所述液相色谱的进样量为5-15μl。
27、优选地，所述液相色谱的流速为0.2-0.6ml/min。
28、优选地，所述液相色谱的检测器为紫外检测器。
29、优选地，所述液相色谱的检测波长为252-256nm。
30、优选地，步骤(2)中，所述将供试品溶液采用液相色谱进行检测之前，先配制系统适用性溶液，然后进行系统适用性试验，再将供试品溶液采用液相色谱进行检测。
31、优选地，所述系统适用性试验，包括如下步骤：
32、取所述系统适用性溶液，注入液相色谱仪进行检测，记录色谱图。
33、优选地，所述系统适用性溶液的配制，包括如下步骤：
34、取对照品，溶于溶剂中，加入碱性溶液和含有酰卤的芳香族化合物，反应，调节ph值至4-6，经后处理后，制得所述系统适用性溶液。
35、优选地，所述后处理包括：加入乙酸乙酯，取有机层减压浓缩，残留物用稀释剂溶解后，过滤，制得所述系统适用性溶液。
36、优选地，所述系统适用性试验的理论板数按2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐计算应不低于5000，2-甲基-l-亮氨酸与2-甲基-d-亮氨酸分离度应大于1.5。
37、相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
38、本发明先分别配制空白溶液和供试品溶液，其中供试品还与含有酰卤基团的芳香族化合物进行了衍生化反应，赋予2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐紫外吸收基团，接着分别将空白溶液和供试品溶液进行液相色谱检测，根据两者的色谱图计算2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐的手性纯度及其对映异构体的含量；实现2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的定量检测，2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体(2-甲基-d-亮氨酸盐酸盐)能够实现有效分离，检测方法快速，结果准确可靠，检测成本低，能够满足大规模生产需求，为2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐工业化生产和质量控制提供了简便、准确、快速、可靠的对映异构体检测方法。与传统的采用旋光仪进行测定的方法相比，本发明提供的2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的手性纯度的检测方法具有准确度更高，检测结果更可靠，而且实验过程操作方便快捷的优点。
1.一种2-甲基-l-亮氨酸盐酸盐及其对映异构体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述供试品和所述含有酰卤基团的芳香族化合物的重量比为(0.5-2)：(0.5-2)。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述含有酰卤基团的芳香族化合物为苯甲酰氯、对甲苯甲酰氯、4-异丁氧基苯甲酰氯、4-甲酰基苯甲酰氯中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a和流动相b的体积比为(98-99)：(2-1)。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的稀释液为体积比为(97-99)：(3-1)的正己烷和异丙醇混合溶液。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱采用等度洗脱。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱采用的色谱柱为chiralpak ic色谱柱。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的检测器为紫外检测器。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述将供试品溶液采用液相色谱进行检测之前，先配制系统适用性溶液，然后进行系统适用性试验，再将供试品溶液采用液相色谱进行检测。
10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述系统适用性试验，包括如下步骤：
