本发明涉及蛋白纯化领域，具体涉及bmcpap3-a2蛋白作亲和标签在纯化目的蛋白中的应用，还涉及利用bmcpap3-a2蛋白作为亲和标签纯化目的蛋白的方法。
背景技术：
1、在自然界中，海洋节肢动物坚硬的外壳、软体动物的表皮、昆虫、真菌和藻类的细胞壁中都可发现几丁质的存在。几丁质资源丰富、价格低廉，作为生物材料能很大程度降低成本。在生物体内，还存在几丁质结合蛋白或几丁质酶，这些蛋白能通过含有的几丁质结合域和几丁质结合，共同构成生物表皮、气管等重要结构。如昆虫表皮中就含有多种几丁质结合蛋白，其中，cpap家族同源性较高，众多研究发现cpap家族在昆虫生长发育中不可或缺。研究学者对多种昆虫的cpap家族进行分析，分为cpap1和cpap3家族，分别含有1个和3个称为chtbd2的几丁质结合域，这些chtbd2能通过疏水作用力和几丁质高度特异性结合。
2、cpap3家族和几丁质有较强的结合能力，且几丁质又是优良的生物材料，是否可将二者结合特性用于蛋白纯化，把几丁质作为填料，cpap3蛋白作为亲和标签。目前在纯化实验中常用的亲和标签，有gst、his等。neb公司也推出利用枯草芽孢杆菌几丁质结合域作为纯化标签的产品。因此，在本研究中，选用具有三个chtbd2的家蚕bmcpap3-a2作为亲和标签，获得了改进的质粒载体，构建了一种新的蛋白固定化纯化体系。本研究为降低工业纯化蛋白的成本、提高纯化蛋白效率提供了参考。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为亲和标签在纯化目的蛋白中的应用；本发明的目的之二在于提供利用bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为亲和标签纯化目的蛋白的方法。
2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
3、1、bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为亲和标签在纯化目的蛋白中的应用，所述bmcpap3-a2蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示；所述bmcpap3-a2截短蛋白的氨基酸如seq id no.14或seq id no.15所示；所述纯化目的蛋白的填料为几丁质。
4、2、利用bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为亲和标签纯化目的蛋白的方法，包括如下步骤：将目的蛋白的n端通过tev酶切位点与bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白融合表达，将表达的融合蛋白固定在几丁质基质上，通过tev酶孵育，在tev酶切位点处特异性酶切，从而将bmcpap3与目的蛋白分割开，bmcpap3标签仍残留在几丁质基质上，而目的蛋白进入溶液上清中，得到纯化后的目的蛋白。
5、本发明优选的，所述tev酶与融合蛋白的比例为1：100。
6、本发明优选的，所述酶切的温度为30℃。
7、本发明优选的，tev酶切后使用0.5m nacl溶液洗脱。
8、本发明优选的，所述将目的蛋白的n端通过tev酶切位点与bmcpap3-a2蛋白融合表达的方法如下：使用seq id no.3和seq id no.7所述引物，从含bmcpap3-a2基因的质粒中扩增得到c段含有tev酶切位点的bmcpap3-a2基因序列，然后用seq id no.5或seq id no.6所述引物扩增含有egfp基因的质粒，得到egfp基因，再以扩增得到的含有tev酶切位点的bmcpap3-a2基因序列和egfp基因作为模板，以seq id no.3和seq id no.6所示序列为引物扩增得到融合蛋白序列，将融合蛋白序列的基因序列连入p28质粒后转入大肠杆菌bl21，诱导表达获得。
9、本发明优选的，所述诱导表达的条件是在16℃、180rpm下诱导20h。
10、本发明的有益效果在于：本发明通过将bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为几丁质纯化目的蛋白的亲和标签，在亲和标签bmcpap3-a2和目的蛋白之间，引入了tev酶特异性识别序列，获得了一种新的纯化系统。酶切孵育后可从融合蛋白中去除几丁质亲和标签，将目的蛋白从几丁质基质上释放出来。为蛋白纯化获得无标签蛋白提供了新的方法，也为bmcpap3型蛋白功能的应用提供了方向。
1.bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为亲和标签在纯化目的蛋白中的应用，其特征在于：所述bmcpap3-a2蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示；所述bmcpap3-a2截短蛋白的氨基酸如seq id no.14或seq id no.15所示；所述纯化目的蛋白的填料为几丁质。
2.利用bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为亲和标签纯化目的蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：将目的蛋白的n端通过tev酶切位点与bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白融合表达，将表达的融合蛋白固定在几丁质基质上，通过tev酶孵育，在tev酶切位点处特异性酶切，从而将bmcpap3与目的蛋白分割开，bmcpap3标签仍残留在几丁质基质上，而目的蛋白进入溶液上清中，得到纯化后的目的蛋白。
3.根据权利要求2所述利用bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为亲和标签纯化目的蛋白的方法，其特征在于：所述tev酶与融合蛋白的比例为1：100。
4.根据权利要求2所述利用bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为亲和标签纯化目的蛋白的方法，其特征在于：所述酶切的温度为30℃。
5.根据权利要求2所述利用bmcpap3-a2蛋白或bmcpap3-a2截短蛋白作为亲和标签纯化目的蛋白的方法，其特征在于：tev酶切后使用0.5m nacl溶液洗脱。
6.根据权利要求2所述利用bmcpap3-a2蛋白作或bmcpap3-a2截短蛋白为亲和标签纯化目的蛋白的方法，其特征在于：所述将目的蛋白的n端通过tev酶切位点与bmcpap3-a2蛋白融合表达的方法如下：使用seq id no.3和seq id no.7所述引物，从含bmcpap3-a2基因的质粒中扩增得到c段含有tev酶切位点的bmcpap3-a2基因序列，然后用seq id no.5或seqid no.6所述引物扩增含有egfp基因的质粒，得到egfp基因，再以扩增得到的含有tev酶切位点的bmcpap3-a2基因序列和egfp基因作为模板，以seq id no.3和seq id no.6所示序列为引物扩增得到融合蛋白序列，将融合蛋白序列的基因序列连入p28质粒后转入大肠杆菌bl21，诱导表达获得。
7.根据权利要求6所述利用bmcpap3-a2蛋白作为亲和标签纯化目的蛋白的方法，其特征在于：所述诱导表达的条件是在16℃、180rpm下诱导20h。
