本发明涉及测定药物制剂中吐温60含量的方法，具体地，涉及一种采用液相色谱电喷雾式检测器联用技术测定药物制剂中吐温60含量的方法。
背景技术：
1、近年来，cde发布的多个仿制药研究技术指导原则中，均明确指出仿制药与参比制剂的辅料种类q1及用量q2应基本一致，有助于保证仿制药和参比制剂质量的一致性。仿制药研发人员通过信息检索，可能获得参比制剂处方的组成，但参比制剂中大部分辅料的用量无法获得，需要通过逆向工程来测得该辅料在参比制剂中的用量，例如吐温60。
2、吐温60，又称聚山梨酯60、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯，分子式c64h126o26，cas号9005-67-8，系一系列聚氧乙烯去水山梨醇的部分脂肪酸酯，是在1mol脱水山梨醇的母核上连接20mol氧乙烯单元并与1mol脂肪酸酯化得到。吐温60是一种非离子表面活性剂，对电解质有显著的抵抗力，亲水性强，广泛应用于医药、化妆品、食品等工业。在医药领域，常见于液体、半固体、固体制剂中，可以作为乳化剂、增溶剂、湿润剂、分散剂和稳定剂。
3、但是由于吐温60化学组成复杂，在制剂中往往用量较少(泡沫剂通常在1％以下)，且在泡沫剂中同时含有原料以及多种不同的辅料，导致在对其进行定量分析等方面遇到较大的困难。既要保证方法的专属性可以使吐温60不受其他成分干扰、又要保证方法有足够的灵敏度，满足微量的检测需求，因此需要开发一种适用于泡沫剂的吐温60的含量测定方法，从而实现对参比制剂中吐温60的准确定量。
4、中国药典2020年版四部将吐温60作为药用辅料收录，其化学指标主要有测定羟值、皂化值、脂肪酸组成等，但这些方法均不能快速及准确的测定药物制剂中吐温60的总体用量。
5、中国专利cn116297915a(聚山梨酯类辅料的分析鉴定方法)也仅仅提供了一种超临界流体色谱和质谱联用的方法，仅能对聚山梨酯类辅料进行鉴定，无法进行含量测定。
6、国内现有的聚山梨酯类化合物含量测定方法有多种。如紫外-可见分光光度法、薄层色谱法、荧光衍生法、凝胶色谱-蒸发光散射检测法，但是这些方法存在操作繁琐、分析时间长、峰形差、灵敏度差、无选择性、基线噪音大等缺点。
7、朱文漓等(非专利文献1)建立了反相高效液相色谱法联用蒸发光散射检测器测定康柏西普眼用注射液中辅料吐温20含量的分析方法。采用agilent poroshell 120sb-c18(2.7m,4.6mm×150mm)色谱柱,以乙腈-纯水为流动相进行梯度洗脱(0～5min,5％b；5～6min,5％b→60％b；6～10min,60％b→80％b；10～15min,80％b；15～15.01min,80％b→5％b；15.01～20min,5％b),流速0.5ml·min-1,蒸发光散射检测器漂移管温度为45℃,雾化压力设为2.8×105pa。结果:吐温20进样量在1.12～6.72μg范围内,与色谱峰面积呈良好线性关系(r2＞0.999)；高、中、低浓度样品的回收率均在100％±10％范围内。结论:本法经方法学验证可用于康柏西普眼用注射液中辅料吐温20含量的检测。
8、郑萍等(非专利文献2)公开了一种混合模式色谱和电雾式检测器测定蛋白药物中的聚山梨醇酯20的含量的方法。色谱柱为oasis max(2.1mm×20mm,30μm),柱温30℃,流动相a为2％(体积分数)甲酸的异丙醇溶液,流动相b为2％(体积分数)甲酸的水溶液,梯度洗脱,进样体积30μl；电雾式检测器,雾化室温度30℃,采样频率5hz。结果:聚山梨醇酯20的峰面积与浓度线性回归方程为y＝6.643x-0.0445(r＝0.9994),线性范围为9.4～188.0mg·ml-1；峰面积和保留时间的rsd分别为0.66％和0.04％；平均回收率为98.3％；方法定量限(s/n＝10)为1.1mg·ml-1。结论:该仪器分析方法重现性较好,样品检出限较低,可作为药物及制剂中聚山梨醇酯20的含量测定方法。
9、吐温20，别名聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯、聚氧乙烯(20)失水山梨醇单月桂酸酯、乳化剂t-20，cas号9005-64-5。
10、上述现有技术均是针对吐温20的含量测定方法，查阅文献后发现，目前尚无针对吐温60含量测定的技术文件和报道，需要开发一种对药物制剂中的吐温60进行快速、准确、灵敏的含量测定方法。
11、非专利文献
12、1)朱文漓，吴娟等，rp-hplc-elsd法测定康柏西普眼用注射液中辅料吐温20含量【j】，药物分析杂志，2014，34(6)：1073。
13、2)郑萍,刘绿叶,张艳海,袁斌,金燕，采用混合模式色谱与电雾式检测器测定蛋白药物中的聚山梨醇酯20[j]，药物分析杂志，2013，33(3)：465-469。
技术实现思路
1、本发明要解决的技术课题
2、鉴于现有技术中尚无针对药物制剂中吐温60含量测定的通用方法的报道，更无适用于泡沫剂中吐温60含量测定的方法，本发明的目的是建立一种快速、准确、灵敏度高、操作简便的检测药物制剂中吐温60的方法，特别是泡沫制剂中吐温60含量测定方法。从而可以对参比制剂中的吐温60含量进行准确定量，保证仿制药的安全性以及与参比制剂的质量一致性。
3、解决技术课题的技术手段
4、本发明提供一种测定药物制剂中吐温60含量的方法，其特征在于，采用反相液相色谱法，所述反相液相色谱条件如下：
5、色谱柱：c18柱
6、流动相a：水
7、流动相b:乙腈
8、梯度洗脱程序：
9、 时间(min) a％(v/v) b％(v/v) 0 95±2 5±2 4 95±2 5±2 6 40±2 60±2 10 20±2 80±2 15 20±2 80±2 15.1 95±2 5±2 20 95±2 5±2
10、检测器：cad检测器。
11、本发明的测定方法中，所述梯度洗脱程序优选为：
12、
13、
14、本发明的测定方法中，优选所述cad检测器的蒸发温度为35±2℃，例如可以是33℃、34℃、35℃、36℃、37℃。
15、本发明的测定方法中，优选流动相的流速为1.5±0.2ml/min的范围内，例如可以是1.5±0.1ml/min。
16、本发明的测定方法中，优选色谱柱的柱温为25℃±3℃，更优选25℃±2℃。
17、本发明的测定方法中，样品分析时，每进样1针样品后进样至少两针空白溶液，所述空白溶液是乙腈或乙腈含量在70体积％以上的乙腈水溶液。
18、本发明的测定方法中，对照品按照以下方法配制：精密称取对照品，用稀释剂溶解并稀释制得0.1±0.02mg/ml的对照品溶液。
19、本发明的测定方法中，供试品溶液按照以下方法配制:精密称取供试品，用稀释剂溶解并稀释制得0.1±0.02mg/ml的供试品溶液。
20、本发明的测定方法中，所述稀释剂是乙腈或乙腈含量在70体积％以上的乙腈水溶液。
21、本发明的测定方法中，所述药物制剂为泡沫剂。
22、本发明的测定方法中，所述液相色谱是hplc或uplc。
23、有益的技术效果
24、本发明的有益效果：
25、1.采用lc-cad，可以准确定量泡沫制剂中的吐温60，有效对参比制剂中的该成分进行解析。
26、2.该方法样品制备简便，色谱条件适用性强，适用于多种浓度、配比的泡沫制剂。
27、3.该方法经过系统验证，满足药典以及ich的基本要求，为泡沫制剂中的吐温60含量测定提供了一种新的方法。
1.一种测定药物制剂中吐温60含量的方法，其特征在于，采用反相液相色谱法，所述反相液相色谱条件如下：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述cad检测器的蒸发温度为35±2℃。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，色谱条件还包括：
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，样品分析时，每进样1针样品后进样至少两针空白溶液，所述空白溶液是乙腈或乙腈含量在70体积％以上的乙腈水溶液。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：对照品按照以下方法配制：精密称取对照品，用稀释剂溶解并稀释制得0.1±0.02mg/ml的对照品溶液。
7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：供试品溶液按照以下方法配制:精密称取供试品，用稀释剂溶解并稀释制得0.1±0.02mg/ml的供试品溶液。
8.如权利要求6或7所述的方法，所述稀释剂是乙腈或乙腈含量在70体积％以上的乙腈水溶液。
9.如权利要求1或2所述的方法，所述药物制剂为泡沫剂。
10.如权利要求1或2所述的方法，所述液相色谱是hplc或uplc。
