本发明涉及中药成分分析检测方法领域，具体涉及一种基于一测多评法的寒喘祖帕颗粒中5种活性成分含量的测定方法。
背景技术：
1、寒喘祖帕颗粒为《中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册》收载药品，具有镇咳、化痰、温肺止喘等功效，临床主要用于急性感冒，寒性“乃孜来”所致的咳嗽及异常黏液质性哮喘的治疗，由神香草、铁线蕨、甘草浸膏、小茴香、芹菜子、胡芦巴、芸香草、玫瑰花、荨麻子9味药材组成。目前，对于寒喘祖帕颗粒的研究多集中在药效及作用机制，关于寒喘祖帕颗粒的成分分析及含量测定报道较少。临床常用寒喘祖帕颗粒市售制剂及配方颗粒，由于市售制剂与配方颗粒的煎煮方法存在差异，难以实现对成分的有效控制，进而影响疗效，而传统中药复方多存在不同组分间相互协同发挥药效的特点，因此针对复方中单一成分进含量测定存在无法全面进行质量控制的问题。
2、现行寒喘祖帕颗粒质量标准鉴别项下用两种对照药材和三个对照品分别采用三个薄层展开系统分别对制剂中3种药材进行薄层鉴别，即鉴别制剂中的玫瑰花、甘草和胡芦巴，无法全面控制寒喘祖帕颗粒的质量；且其中供试品溶液制备过程复杂且耗时较长，三种展开系统使用了较多的有机溶剂，毒性较大且污染环境。最新发布的《寒喘祖帕颗粒国家药品标准修订草案公示稿》含量测定项中仅采用高效液相色谱法(hplc)对甘草浸膏中的甘草酸铵的含量作为有效成分质量控制指标，而对其他8味药材的质量标准控制尚未提及。
3、除现行质量标准外，寒喘祖帕质量标准相关的文献研究也较少。刘慧英(刘慧英,王志君,刘田旺.反相hplc法测定寒喘祖帕颗粒中甘草酸的含量[j].中国民族医药杂志,2007(03):40-41)及王桂芬(王桂芬.维吾尔医成药寒喘祖帕颗粒中甘草酸的含量测定[j].中国民族医药杂志,2010,16(06):40-41)等采用反相hplc法测定寒喘祖帕颗粒中甘草酸的含量，未对其他8味药材进行分析测定；金晓红(金晓红,桂红武,耿伟.寒喘祖帕颗粒的质量标准研究[j].中国药房,2012,23(15):1405-1406)等采用薄层色谱(tlc)法对寒喘祖帕颗粒中玫瑰花、小茴香进行了定性鉴别，采用hplc法仅对甘草浸膏中的甘草酸铵进行了含量测定；而寒喘祖帕颗粒作为一种由9味药材组成的复方，所含化学成分复杂，单一成分的含量测定可能影响其质量控制。
4、因此，急需开发一种高效、全面的含量测定分析方法，实现对寒喘祖帕颗粒较为全面的质量控制。
技术实现思路
1、本发明的目的就是提供一种测定寒喘祖帕颗粒中多种成分的检测方法。
2、在本发明的第一方面，提供了一种同时分析寒喘祖帕颗粒中多种成分的方法，其中，所述多种成分包括秦皮乙素，和选自下组的两种或两种以上：芹菜苷、柚皮素、3'-甲氧基芹菜苷、甘草酸；
3、所述方法包括以下步骤：
4、将供试品溶液或对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，并采用如下高效液相色谱条件进行检测：
5、键合硅胶色谱柱；
6、流动相：流动相a为含醋酸和乙腈的水溶液，
7、流动相b为乙腈；
8、其中，流动相a的体积占比为浓度a→浓度b→浓度c进行梯度洗脱，其中浓度a为90vol％～95vol％，浓度b为57vol％～62vol％，浓度c为90vol％～95vol％；
9、所述供试品溶液为寒喘祖帕颗粒经醇提过滤处理后得到。
10、在另一优选例中，所述方法还包括步骤：
11、(1)以秦皮乙素为内参，按公式：fi＝(as×cr)/(ar×cs)计算，计算芹菜苷、柚皮素、3'-甲氧基芹菜苷和/或甘草酸的相对校正因子fi，
12、其中，
13、fi为其他成分对照品溶液与秦皮乙素对照品溶液的绝对校正因子之比，即相对校正因子，
14、cs为秦皮乙素对照品溶液的浓度，
15、as为秦皮乙素对照品溶液的检测峰面积，
16、cr为其他成分对照品溶液的浓度，
17、ar为其他成分对照品溶液的检测峰面积；
18、(2)根据秦皮乙素与芹菜苷、3'-甲氧基芹菜苷、柚皮素和/或甘草酸的相对校正因子，结合检测得到的秦皮乙素含量，分别计算得到供试品溶液中芹菜苷、柚皮素、3'-甲氧基芹菜苷和/或甘草酸的含量。
19、在另一优选例中，所述键合硅胶色谱柱中键合基团选自：c8、c18。
20、在另一优选例中，所述键合硅胶色谱柱为辛烷基键合硅胶c18柱。
21、在另一优选例中，所述键合硅胶色谱柱的尺寸为250nm×4.6nm，5μm。
22、在另一优选例中，所述键合硅胶色谱柱选自下组：shim-pack vp-ods色谱柱、hypersil bds c18色谱柱。
23、在另一优选例中，所述高效液相色谱仪选自下组：lc-20ab-4、1260infinity ii。
24、在另一优选例中，所述流动相a中，醋酸为冰醋酸。
25、在另一优选例中，所述流动相a中，醋酸的浓度为1～5vol％，乙腈的的浓度3～8vol％，优选地，醋酸的浓度为2vol％，乙腈的的浓度5.5vol％。
26、在另一优选例中，所述方法通过流动相a的体积占比为92vol％→60vol％→90vol％进行梯度洗脱。
27、在另一优选例中，所述梯度洗脱的时长为70～90min，例如72min。
28、在另一优选例中，所述梯度洗脱程序为0～12min，92％～90％a；12～35min，90％～87％a；35～57min，87％～79％a；57～64min，70％～60％a；64～70min，60％～90％a；70～71min，90％a。
29、在另一优选例中，所述色谱条件还包括进样体积，进样体积为2-50μl，优选5-20μl，例如10μl。
30、在另一优选例中，所述色谱条件还包括检测波长，检测波长为360-370nm(0-t1)、270-290nm(t1-t2)，其中，t1为30-40min，t2为70-90min，
31、优选地，检测波长为365nm(0-35min)、280nm(35-72min)。
32、在另一优选例中，所述色谱条件还包括流速，流速为0.8-1.5ml/min，优选0.8-1.2ml/min。
33、在另一优选例中，所述色谱条件还包括柱温，柱温为30-45℃，优选34-40℃。
34、在另一优选例中，秦皮乙素与芹菜苷的相对校正因子为2.2-2.8，例如2.48、2.5。
35、在另一优选例中，秦皮乙素与3'-甲氧基芹菜苷的相对校正因子为1.3-1.8，例如1.5、1.7。
36、在另一优选例中，秦皮乙素与柚皮素的相对校正因子为0.7-1.0，例如0.8、0.9。
37、在另一优选例中，秦皮乙素与甘草酸的相对校正因子为24-32，例如35、30。
38、在另一优选例中，所述供试品溶液通过以下方法制备，所述方法包括：
39、s1、将寒喘祖帕颗粒研磨，与低级醇混合，超声提取；
40、s2、过滤，得到所述供试品溶液。
41、在另一优选例中，所述低级醇选自下组：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇，优选甲醇。
42、在另一优选例中，所述寒喘祖帕颗粒与低级醇的质量体积比为0.1-1g/ml，优选0.4g/ml。
43、在另一优选例中，所述超声提取的时间为10-60min，优选20min。
44、在另一优选例中，所述步骤s1还包括：在超声提取之后，冷却至室温，再次称重，用甲醇补足由于甲醇挥发而减失的重量。
45、在另一优选例中，所述过滤是指用0.22μm滤膜过滤。
46、在另一优选例中，所述对照品溶液通过以下方法制备，所述方法包括：
47、分别精密称取各个成分，置量瓶中，使用低级醇定容，即得。
48、在另一优选例中，所述低级醇选自下组：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇，优选甲醇。
49、在另一优选例中，所述芹菜苷对照品溶液中，芹菜苷的质量浓度为450-500μg·ml-1，例如480μg·ml-1。
50、在另一优选例中，所述柚皮素对照品溶液中，柚皮素的质量浓度为450-500μg·ml-1，例如480μg·ml-1。
51、在另一优选例中，所述秦皮乙素对照品溶液中，秦皮乙素的质量浓度为450-500μg·ml-1，例如480μg·ml-1。
52、在另一优选例中，所述3'-甲氧基芹菜苷对照品溶液中，3'-甲氧基芹菜苷的质量浓度为1500-2000μg·ml-1，例如1600μg·ml-1。
53、在另一优选例中，所述甘草酸对照品溶液中，甘草酸的质量浓度为4.50-5μg·ml-1，例如4.8μg·ml-1。
54、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
1.一种同时分析寒喘祖帕颗粒中多种成分的方法，其中，所述多种成分包括秦皮乙素，和选自下组的两种或两种以上：芹菜苷、柚皮素、3'-甲氧基芹菜苷、甘草酸；
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述键合硅胶色谱柱为辛烷基键合硅胶c18柱。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相a中，醋酸的浓度为1～5vol％，乙腈的的浓度3～8vol％，优选地，醋酸的浓度为2vol％，乙腈的的浓度5.5vol％。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件还具有以下一个或多个特征：
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，秦皮乙素与芹菜苷的相对校正因子为2.2-2.8；
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液通过以下方法制备，所述方法包括：
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对照品溶液通过以下方法制备，所述方法包括：
9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述低级醇选自下组：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇，优选甲醇。
10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述超声提取的时间为10-60min，优选20min。
