本发明涉及一种植物提取物的制备与应用，具体涉及一种从枸杞叶中制备防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物的方法，属于中药提取。
背景技术：
1、枸杞叶，又叫天精草，含有枸杞多糖、黄酮及多种对人体有益的微量元素、氨基酸等成分。早期研究显示枸杞叶具有抗疲劳、降血脂及耐缺氧等作用。但没有得到有效的开发、利用。因此，对枸杞叶进行利用开发是实现枸杞副产物高值化利用的关键。
2、非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,nafld)是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。而非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,nash)是非酒精性脂肪性肝病病情进展的关键阶段，伴有肝细胞球囊化、炎症和肝细胞损伤疾病。非酒精性脂肪性肝炎(nash)又称代谢性脂肪性肝炎，是病理变化与酒精性肝炎相似但无过量饮酒史的临床综合征，好发于中年特别是超重肥胖个体。非酒精性脂肪性肝炎与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病、高脂血症等代谢紊乱关系密切，其主要特征为肝细胞大泡性脂肪变伴肝细胞损伤和炎症，严重者可发展为肝硬化。但至今无有效药物问世。
3、目前，国内已经公开了利用揽香素(cn117503738a)、桧木醇(cn117547525a)、苯并呋喃衍生物(cn117430574a)等小分子化合物和巧玲花提取物(cn117338836a)、萆薢总皂苷(cn116712500a)等植物提取物以及中药组合物(cn117224602a,cn116115724a)等在防治非酒精性脂肪性肝炎中的应用，而用枸杞叶总黄酮提取物防治非酒精性脂肪性肝炎的方法未见报道。
技术实现思路
1、本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，而提供一种从枸杞叶中制备防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物的方法，得到的提取物对非酒精性脂肪性肝炎具有良好的药效作用，可用于保健食品、功能食品及新药的开发。
2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
3、本发明首先提供一种从枸杞叶中制备防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物的方法，包括以下步骤：
4、(1)枸杞叶总黄酮提取：
5、以枸杞叶为原料，用提取溶剂进行回流提取得到提取液，回流提取数次且合并数次提取液后进行过滤得到滤液，减压浓缩滤液得到浓缩液，将浓缩溶液作为上样液；
6、(2)大孔树脂合成：
7、将一定比例聚合单体、交联剂、功能单体、致孔剂和引发剂混合后分散于含有分散剂的去离子水溶液中，在一定条件下进行合成反应，合成反应结束后进行过滤，过滤后得到的固体利依次采用去离水和乙醇水溶液进行洗涤，然后将其置于真空干燥箱内干燥后得到大孔树脂；
8、(3)枸杞叶总黄酮分离纯化：
9、将步骤(2)中得到的大孔树脂装柱，将步骤(1)中得到的上样液经过大孔树脂柱进行吸附，然后先用去离子水进行洗脱、再利用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，对洗脱液进行减压蒸馏后，将产物置于真空干燥箱内进行干燥得枸杞叶总黄酮提取物，所述的枸杞叶总黄酮提取物即为防治非酒精性脂肪性肝炎植物提取物。
10、上述技术方案中，步骤(1)中，所述的提取溶剂为水或者质量分数为30％～80％的乙醇水溶液，枸杞叶与提取剂的固液比为1:5～1:50，其中枸杞叶质量以克计，提取剂体积以毫升计，每次回流提取时间为1～5h，提取1～5次。
11、上述技术方案中，步骤(1)中，所述的过滤是利用10～100目滤网进行的；所述的浓缩是利用旋转蒸发仪进行的，浓缩时的温度为20～80℃、压力为5～30kpa，浓缩液体积为枸杞叶质量的1～100倍，其中浓缩液体积单位以ml计、枸杞叶质量单位以g计。
12、上述技术方案中，步骤(2)中，所述的聚合单体为苯乙烯、丙烯酸酯类等中的任意一种；所述的交联剂为二乙烯基苯、乙二醇二甲基丙烯酸酯等中的任意一种，其质量为聚合单体质量的10％～800％；所述的功能单体为乙烯基吡咯烷酮、乙烯基咪唑、乙烯醇、乙烯基吡啶等中的任意一种，其质量为聚合单体质量的10％～200％；所述的引发剂为偶氮二异丁腈、过氧化苯甲酰等中的任意中，其质量为聚合单体、交联剂和功能单体总质量的1％～10％；所述的致孔剂为甲苯、二甲苯、正庚烷等中的任意一种，其质量为聚合单体、交联剂和功能单体总质量的10％～500％。
13、上述技术方案中，步骤(2)中，所述的分散剂为明胶、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮等中的任意一种，含有分散剂的去离子水溶液中分散剂的质量浓度为0.1～5％；聚合单体、交联剂和功能单体的总质量与含分散剂的去离子水溶液的质量比为1：1～200。
14、上述技术方案中，步骤(2)中，所述的大孔树脂的合成利用悬浮聚合技术进行合成反应，反应时进行搅拌，搅拌速度为40～1000rpm，反应温度为40～100℃、反应时间为4～48h；所述的过滤是利用10～100目滤网进行的；所述的采用去离子水进行洗涤，洗涤次数为1～5次，所述的采用乙醇水溶液进行洗涤，乙醇水溶液的质量分数为20％～100％，洗涤次数为1～3次；所述的置于干燥箱中干燥，干燥温度为20～80℃、压力为10～30kpa，干燥至水含量低于10％。
15、上述技术方案中，步骤(3)中，所述的大孔树脂采用湿法装柱，装柱径高比为1：(5～20)；所述的上样液，体积为2bv～20bv，流速为2bv/h～20bv/h；所述的去离子水，洗脱时体积为2bv～30bv，流速为5bv/h～30bv/h；乙醇水溶液洗脱时的体积为2bv～20bv，流速为2bv/h～20bv/h，所述的乙醇水溶液的质量分数为20％～90％。
16、上述技术方案中，步骤(3)中，所述的减压蒸馏，蒸馏压强为2～50kpa，蒸馏温度20～70℃；所述的真空干燥箱内进行干燥，干燥温度为20～80℃，干燥压力为2～40kpa，干燥至含水量低于5％。
17、本发明的目的之二是提供一种经过上述方法制备后得到的防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物，其中总黄酮含量为60％～95％。
18、本发明的目的之三是提供一种所述的防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物在制备预防和治疗非酒精性脂肪性肝炎药物方面的应用。
19、本发提供了一种从枸杞叶中制备防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物的方法，可从枸杞叶中制备高纯度枸杞叶总黄酮提取物，将枸杞叶总黄酮提取物用于具有非酒精性脂肪性肝炎的动物实验，所述的动物实验为mcd饲料诱导的具有非酒精性脂肪性肝炎的小鼠，从动物实验可知，本发明中的提取物在防治非酒精性脂肪性肝炎的防治与预防中取得显著疗效，得到的枸杞叶总黄酮提取物具有较好的防治非酒精性脂肪性肝炎作用，可用于保健食品、功能食品及药物的开发；本方法工艺路线简单、分离成本低，制备过程安全，适合工业化生产。
1.一种从枸杞叶中制备防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的提取溶剂为水或者质量分数为30％～80％的乙醇水溶液，枸杞叶与提取剂的固液比为1:5～1:50，每次回流提取时间为1～5h，提取1～5次；所述的过滤是利用10～100目滤网进行的；所述的浓缩是利用旋转蒸发仪进行的，浓缩时的温度为20～80℃、压力为5～30kpa，浓缩液体积为枸杞叶质量的1～100倍，其中浓缩液体积单位以ml计、枸杞叶质量单位以g计。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的聚合单体为苯乙烯、丙烯酸酯类等中的任意一种；所述的交联剂为二乙烯基苯、乙二醇二甲基丙烯酸酯等中的任意一种，其质量为聚合单体质量的10％～800％；所述的功能单体为乙烯基吡咯烷酮、乙烯基咪唑、乙烯醇、乙烯基吡啶等中的任意一种，其质量为聚合单体质量的10％～200％；所述的引发剂为偶氮二异丁腈、过氧化苯甲酰等中的任意中，其质量为聚合单体、交联剂和功能单体总质量的1％～10％；所述的致孔剂为甲苯、二甲苯、正庚烷等中的任意一种，其质量为聚合单体、交联剂和功能单体总质量的10％～500％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的分散剂为明胶、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮等中的任意一种，含有分散剂的去离子水溶液中分散剂的质量浓度为0.1～5％；聚合单体、交联剂和功能单体的总质量与含分散剂的去离子水溶液的质量比为1：1～200。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的大孔树脂的合成利用悬浮聚合技术进行合成反应，反应时进行搅拌，搅拌速度为40～1000rpm，反应温度为40～100℃、反应时间为4～48h；所述的过滤是利用10～100目滤网进行的；所述的采用去离子水进行洗涤，洗涤次数为1～5次，所述的采用乙醇水溶液进行洗涤，乙醇水溶液的质量分数为20～100％，洗涤次数为1～3次；所述的置于干燥箱中干燥，干燥温度为20～80℃、压力为10～30kpa，干燥至水含量低于10％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的大孔树脂采用湿法装柱，装柱径高比为1：(5～20)；所述的上样液，体积为2bv～20bv，流速为2bv/h～20bv/h；所述的去离子水，洗脱时体积为2bv～30bv，流速为5bv/h～30bv/h；所述的乙醇水溶液的质量分数为20％～90％，乙醇水溶液洗脱时的体积为2bv～20bv，流速为2bv/h～20bv/h。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的减压蒸馏，蒸馏压强为2～50kpa，蒸馏温度20～70℃；所述的真空干燥箱内进行干燥，干燥温度为20～80℃，干燥压力为2～40kpa，干燥至含水量低于5％。
8.一种根据权利要求1-7任一项所述的方法制备后得到的防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物，其特征在于，所述的防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物，其中总黄酮含量为60％～95％。
9.一种权利要求8所述的防治非酒精性脂肪性肝炎的提取物在制备预防和治疗非酒精性脂肪性肝炎药物方面的应用。
