1.本发明涉及家禽育种技术领域，尤其涉及一种家禽精液稀释缓冲液及其制备方法，以及一种家禽精液的冷存方法。
背景技术：2.目前，随着家禽的推广普及，越来越多的家禽饲养户及生产厂家开始采用人工授精技术，这对提高种禽的利用率和节省种禽饲料具有重要意义。家禽人工授精技术是现代育种和生产中必不可少的手段，其主要优越性是加速良种化进程；提高优秀家禽的利用率；利于防止疾病的相互传播等。由于家禽精子的密度大且采精量很少，一般将家禽精液稀释后输精，精液冷冻稀释液是保障精液冷冻降温过程中的缓冲和生存环境，是冷冻保存精液的必要基础物质，它必须具备较强的缓冲能力、适宜的ph值及渗透压，采用精液冷冻稀释液可最大限度地利用优秀种禽的精液，更能节约饲养成本，可提高经济效益。
3.一般情况下，正常的精液是比较黏稠的，它是由精子和精浆两部分组成。精子是在睾丸内产生，并且在附睾内成熟，再通过雄性输精管道排出，在精液中占的比例约为5％左右。目前，精液冷冻稀释液主要成分有冷冻保护剂、缓冲液、盐类、糖类以及抗生素等。随着人们对禽类食品需求量的日益增加，中国养禽业规模化与集约化程度逐年提高，稀释液不仅可以使密度高、容量低的精液分布均勾，扩大其精液量，增强其授精能力，充分提高优良种禽的配种效率，而且还能短期甚至长期保存精液，利于运输。
4.目前如何确定家禽稀释缓冲液的化学成分是一个十分复杂的课题。同一稀释缓冲液对不同动物的精液作用不同，并且同种物质且不同的物质剂量对同种动物精液作用亦不同，同时家禽精液经过冷冻保存后，对家禽精子造成的机械损伤直接导致解冻后精子活力的下降，目前如何制备一种适用于家禽的稀释缓冲液，成为目前需要解决的技术问题。
技术实现要素：5.本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种家禽精液稀释缓冲液及其制备方法，以及一种家禽精液的冷存方法。
6.一种家禽精液稀释缓冲液，包括：第一组分和第二组分；第一组分包括：基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄，基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄的质量比为80-130：1-5：1-5；第二组分包括：基础缓冲液、复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺，基础缓冲液、复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺的质量比为80-130：1-5：20-30：1-5；其中，基础缓冲液包括：葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水；葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水的质量比为1-5：1-5：5-10：0.01-0.05：0.01-0.05：150-250。
7.优选地，复合溶液a包括：咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、双蒸水；咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、双蒸水的质量比为0.01-0.05：0.01-0.05：10-20。
8.优选地，咖啡酸苯乙酯、表儿茶素的质量比为0.02-0.04：0.02-0.04。
9.优选地，复合溶液b包括：槲皮素、海藻酸、双蒸水；槲皮素、海藻酸、双蒸水的质量
比为0.01-0.05：0.01-0.05：10-20。
10.优选地，槲皮素、海藻酸的质量比为0.02-0.04：0.02-0.04。
11.优选地，基础缓冲液的ph值为7-7.5。
12.上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法，包括如下步骤：
13.(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a；
14.(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b；
15.(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀，调节体系ph值为7-7.5得到基础缓冲液；
16.(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分；
17.(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
18.一种家禽精液的冷存方法，包括如下步骤：将家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第一组分混合均匀，分装于冻存管内，降温至2-5℃，再加入上述家禽精液稀释缓冲液中第二组分混合均匀，移入液氮气相中熏蒸2-6min，加入至液氮中冷冻保存。
19.优选地，家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第一组分的质量比为1：5-7。
20.优选地，家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第二组分的质量比为1：2-5。
21.本发明的技术效果如下所示：
22.(1)由于咖啡酸苯乙酯结构中含有o-二羟基(儿茶酚)苯基结构，可有效清除自由基，本发明采用其与表儿茶素复配，不仅可清除体系中自由基，而且可与参与自由基生成的金属离子反应，从源头减少自由基的产生。将第一组分首先与家禽精液混合复配，可有效维持精子细胞内氧化还原系统的平衡，降低过氧化反应对精子质膜结构的损伤，进而提高精子活力。
23.而咖啡酸苯乙酯表面的酚羟基，可有效降低精液低温环境下冰晶的形成量，减少针形冰晶的形成，即使未添加二甲基甲酰胺，也可减少冰晶对精子的机械性损伤，最终提高家禽冷冻精液的存活率、活力、顶体完整性和质膜完整性。
24.(2)本发明采用槲皮素与海藻酸配合，可有效降低液氮冷冻过程中精子的冷应激，并可避免液氮环境细胞膜通透性增强和膜上通道受损，有效维持低温环境精子代谢平衡，避免低温环境镜子膜发生结构损伤，有效改善冷冻效果。
25.其中，槲皮素亲水性差，其结构上的苯环可与蛋白质脯氨酸残基、酚羟基的氢键作用，并吸附或渗透到脂质双分子层中与膜相互作用，从而保护精子质膜和顶体结构的完整性，而配合海藻酸与膜上的生物大分子如糖类、蛋白质等形成稳定复合物，从而维持精子膜构。
26.本发明在冷冻保存过程中，降温至5℃后，加入第二组分进行液氮熏蒸后进行液氮冷冻，可有效维持超低温环境下精子膜构及其结构功能，保证解冻后精子保持正常的运动性能。本精液稀释液普遍适用于鸡、鸭、鹅等家禽精液的稀释或超低温冷冻保存。
附图说明
27.图1为采用实施例5、对比例1-2的方法冻存复苏后4℃时精子存活率对比图。
28.图2为采用实施例5、对比例1-2的方法冻存复苏后精子的畸形率和顶体完整率对
比图。
29.图3为采用实施例5、对比例1-2的方法冻存复苏后精子进行受精测试，其产蛋率、受精率、死淘率的对比图。
具体实施方式
30.下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
31.实施例1
32.一种家禽精液稀释缓冲液，包括：第一组分和第二组分。
33.第一组分包括：基础缓冲液80kg，复合溶液a1kg，灭活卵黄1kg。复合溶液a包括：咖啡酸苯乙酯0.01kg，表儿茶素0.01kg，双蒸水10kg。
34.第二组分包括：基础缓冲液80kg，复合溶液b1kg，灭活卵黄20kg，二甲基甲酰胺1kg。复合溶液b包括：槲皮素0.01kg，海藻酸0.01kg，双蒸水10kg。
35.其中，基础缓冲液包括：葡萄糖1kg，柠檬酸1kg，三羟甲基氨基甲烷5kg，青霉素0.01kg，链霉素0.01kg，双蒸水150kg。
36.上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法，包括如下步骤：
37.(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a；
38.(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b；
39.(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀，调节体系ph值为7-7.5得到基础缓冲液；
40.(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分；
41.(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
42.一种家禽精液的冷存方法，包括如下步骤：将家禽精液与第一组分按质量比为1：5混合均匀，分装于冻存管内，降温至2℃，加入第二组分混合均匀，家禽精液与第二组分的质量比为1：2，移入液氮气相中熏蒸2min，加入至液氮中冷冻保存。
43.实施例2
44.一种家禽精液稀释缓冲液，包括：第一组分和第二组分。
45.第一组分包括：基础缓冲液130kg，复合溶液a5kg，灭活卵黄5kg。复合溶液a包括：咖啡酸苯乙酯0.05kg，表儿茶素0.05kg，双蒸水20kg。
46.第二组分包括：基础缓冲液130kg，复合溶液b5kg，灭活卵黄30kg，二甲基甲酰胺5kg。复合溶液b包括：槲皮素0.05kg，海藻酸0.05kg，双蒸水20kg。
47.其中，基础缓冲液包括：葡萄糖5kg，柠檬酸5kg，三羟甲基氨基甲烷10kg，青霉素0.05kg，链霉素0.05kg，双蒸水250kg。
48.上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法，包括如下步骤：
49.(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a；
50.(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b；
51.(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀，调节体系ph值为7-7.5得到基础缓冲液；
52.(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分；
53.(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
54.一种家禽精液的冷存方法，包括如下步骤：将家禽精液与第一组分按质量比为1：7混合均匀，分装于冻存管内，降温至5℃，加入第二组分混合均匀，家禽精液与第二组分的质量比为1：5，移入液氮气相中熏蒸6min，加入至液氮中冷冻保存。
55.实施例3
56.一种家禽精液稀释缓冲液，包括：第一组分和第二组分。
57.第一组分包括：基础缓冲液90kg，复合溶液a4kg，灭活卵黄2kg。复合溶液a包括：咖啡酸苯乙酯0.04kg，表儿茶素0.02kg，双蒸水17kg。
58.第二组分包括：基础缓冲液90kg，复合溶液b4kg，灭活卵黄22kg，二甲基甲酰胺4kg。复合溶液b包括：槲皮素0.02kg，海藻酸0.04kg，双蒸水13kg。
59.其中，基础缓冲液包括：葡萄糖4kg，柠檬酸2kg，三羟甲基氨基甲烷8kg，青霉素0.02kg，链霉素0.04kg，双蒸水180kg。
60.上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法，包括如下步骤：
61.(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a；
62.(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b；
63.(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀，调节体系ph值为7-7.5得到基础缓冲液；
64.(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分；
65.(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
66.一种家禽精液的冷存方法，包括如下步骤：将家禽精液与第一组分按质量比为1：5.5混合均匀，分装于冻存管内，降温至3℃，加入第二组分混合均匀，家禽精液与第二组分的质量比为1：4，移入液氮气相中熏蒸3min，加入至液氮中冷冻保存。
67.实施例4
68.一种家禽精液稀释缓冲液，包括：第一组分和第二组分。
69.第一组分包括：基础缓冲液120kg，复合溶液a2kg，灭活卵黄4kg。复合溶液a包括：咖啡酸苯乙酯0.02kg，表儿茶素0.04kg，双蒸水13kg。
70.第二组分包括：基础缓冲液120kg，复合溶液b2kg，灭活卵黄28kg，二甲基甲酰胺2kg。复合溶液b包括：槲皮素0.04kg，海藻酸0.02kg，双蒸水17kg。
71.其中，基础缓冲液包括：葡萄糖2kg，柠檬酸4kg，三羟甲基氨基甲烷6kg，青霉素0.04kg，链霉素0.02kg，双蒸水220kg。
72.上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法，包括如下步骤：
73.(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a；
74.(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b；
75.(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀，调节体系ph值为7-7.5得到基础缓冲液；
76.(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分；
77.(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第
二组分。
78.一种家禽精液的冷存方法，包括如下步骤：将家禽精液与第一组分按质量比为1：6.5混合均匀，分装于冻存管内，降温至4℃，加入第二组分混合均匀，家禽精液与第二组分的质量比为1：3，移入液氮气相中熏蒸5min，加入至液氮中冷冻保存。
79.实施例5
80.一种家禽精液稀释缓冲液，包括：第一组分和第二组分。
81.第一组分包括：基础缓冲液100kg，复合溶液a3kg，灭活卵黄3kg。复合溶液a包括：咖啡酸苯乙酯0.03kg，表儿茶素0.03kg，双蒸水15kg。
82.第二组分包括：基础缓冲液100kg，复合溶液b3kg，灭活卵黄25kg，二甲基甲酰胺3kg。复合溶液b包括：槲皮素0.03kg，海藻酸0.03kg，双蒸水15kg。
83.其中，基础缓冲液包括：葡萄糖3kg，柠檬酸3kg，三羟甲基氨基甲烷7kg，青霉素0.03kg，链霉素0.03kg，双蒸水200kg。
84.上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法，包括如下步骤：
85.(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a；
86.(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b；
87.(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀，调节体系ph值为7-7.5得到基础缓冲液；
88.(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分；
89.(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
90.一种家禽精液的冷存方法，包括如下步骤：将家禽精液与第一组分按质量比为1：6混合均匀，分装于冻存管内，降温至3.5℃，加入第二组分混合均匀，家禽精液与第二组分的质量比为1：3.5，移入液氮气相中熏蒸4min，加入至液氮中冷冻保存。
91.对比例1
92.一种家禽精液稀释缓冲液，包括：第一组分和第二组分。
93.第一组分包括：基础缓冲液100kg，灭活卵黄3kg。
94.第二组分包括：基础缓冲液100kg，灭活卵黄25kg，二甲基甲酰胺3kg。
95.其中，基础缓冲液包括：葡萄糖3kg，柠檬酸3kg，三羟甲基氨基甲烷7kg，青霉素0.03kg，链霉素0.03kg，双蒸水200kg。
96.上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法，包括如下步骤：
97.(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀，调节体系ph值为7-7.5得到基础缓冲液；
98.(4)向基础缓冲液依次加入灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分；
99.(5)向基础缓冲液依次加入二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
100.一种家禽精液的冷存方法，包括如下步骤：将家禽精液与第一组分按质量比为1：6混合均匀，分装于冻存管内，降温至3.5℃，加入第二组分混合均匀，家禽精液与第二组分的质量比为1：3.5，移入液氮气相中熏蒸4min，加入至液氮中冷冻保存。
101.对比例2
102.一种家禽精液稀释缓冲液，包括：基础缓冲液100kg，复合溶液3kg，二甲基甲酰胺
25kg，灭活卵黄3kg。复合溶液包括：咖啡酸苯乙酯0.03kg，表儿茶素0.03kg，槲皮素0.03kg，海藻酸0.03kg，双蒸水15kg。
103.其中，基础缓冲液包括：葡萄糖3kg，柠檬酸3kg，三羟甲基氨基甲烷7kg，青霉素0.03kg，链霉素0.03kg，双蒸水200kg。
104.上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法，包括如下步骤：
105.(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液；
106.(2)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀，调节体系ph值为7-7.5得到基础缓冲液；
107.(3)向基础缓冲液依次加入复合溶液、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀。
108.一种家禽精液的冷存方法，包括如下步骤：将家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液按质量比为1：9.5混合均匀，分装于冻存管内，降温至3.5℃，移入液氮气相中熏蒸4min，加入至液氮中冷冻保存。
109.选择皖西白羽肉鸡养殖基地20只健康白羽肉鸡，采用腹背联合按摩法采集鸡精液，采集的精液进行混合，采集过程中要求精液无粪便、血液等污染。
110.采用实施例5和对比例1-2所得家禽精液稀释缓冲液按实施例5和对比例1-2的各自冷存方法对上述白羽肉鸡精液进行冻存7d。
111.将各组冻存精液复苏后，置于4℃保存，间隔时间段取样检测精子的存活率，记录精子的存活时间。
112.精子存活时间(h)＝检查间隔时间的总和-最末两次检查间隔时间/2
113.经检测：精子存活时间如下：实施例5组的存活时间为204h，对比例1组的存活时间为84h，对比例2组的存活时间为156h。精子的存活率如图1所示，白羽肉鸡精液4℃保存120h时，精子的存活率最高。
114.将各组冻存精液复苏后，进行精子畸形率的检测及精子顶体染色观察，具体如下：
115.(1)精子畸形率检测染色
116.准备洁净的载玻片进行涂片，风干后用95％的酒精固定3min，蒸馏水冲洗晾干，用蓝墨水染色，水洗晾干后镜检，每样抹片两张。记录视野下200个精子的畸形率。
117.畸形率＝200个精子中畸形精子总数
÷
200
×
100％
118.(2)精子顶体染色
119.准备洁净的载玻片进行涂片，风干后用中性福尔马林溶液固定15min，蒸馏水冲洗晾干，姬姆萨染液扣染2h，水洗晾干后镜检，每样抹片两张。记录视野下200个精子的顶体完整率。
120.顶体完整率＝200个精子中顶体完整精子总数
÷
200
×
100％
121.精子畸形率和精子顶体完整率如图2所示，实施例5组的畸形率最低，而精子顶体完整率最高。
122.本技术人认为：这是由于本发明采用咖啡酸苯乙酯与表儿茶素复配，不仅可清除体系中自由基，而且可与参与自由基生成的金属离子反应，从源头减少自由基的产生。咖啡酸苯乙酯表面的酚羟基，可有效降低精液低温环境下冰晶的形成量，减少针形冰晶的形成，即使未添加二甲基甲酰胺，也可减少冰晶对精子的机械性损伤，最终提高家禽冷冻精液的存活率、活力、顶体完整性和质膜完整性。同时采用槲皮素与海藻酸配合，可有效降低液氮
冷冻过程中精子的冷应激，并可避免液氮环境细胞膜通透性增强和膜上通道受损，有效维持低温环境精子代谢平衡，避免低温环境镜子膜发生结构损伤，有效改善冷冻效果。
123.将各组冻存精液复苏后，检测总抗氧化能力(t-aoc)、过氧化氢酶(cat)活性、超氧化物歧化酶(sod)活性、丙二醛(mda)含量和活性氧(ros)水平，具体如下：
[0124] 实施例5对比例1对比例2t-aoc，u/ml12.458.2610.37cat，u/ml18.9113.3915.72sod，u/ml274.59222.64251.45mda，nmol/ml4.459.027.36ros level478487736821
[0125]
如上表所示，实施例5的总抗氧化能力、过氧化氢酶活性和超氧化物歧化酶活性最高，而丙二醛含量和活性氧水平最低。
[0126]
本技术人认为：这是由于本发明将第一组分首先与家禽精液混合复配，可有效维持精子细胞内氧化还原系统的平衡，降低过氧化反应对精子质膜结构的损伤，进而提高精子活力。
[0127]
将各组冻存精液复苏后，预热至37℃备用，母鸡输精用翻肛法，每只母鸡每5d输精1次，每次输入稀释精液30-50μl。于输精后的48h收集种蛋，种蛋在产出1周以内入孵，于孵化的第7d照蛋测定受精率。
[0128]
如图3所示，实施例5的产蛋率和受精率最高，而死淘率最低。
[0129]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
技术特征：1.一种家禽精液稀释缓冲液，其特征在于，包括：第一组分和第二组分；第一组分包括：基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄，基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄的质量比为80-130：1-5：1-5；第二组分包括：基础缓冲液、复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄，基础缓冲液、复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺的质量比为80-130：1-5：20-30：1-5；其中，复合溶液a包括：咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、双蒸水；咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、双蒸水的质量比为0.01-0.05：0.01-0.05：10-20；复合溶液b包括：槲皮素、海藻酸、双蒸水；槲皮素、海藻酸、双蒸水的质量比为0.01-0.05：0.01-0.05：10-20；基础缓冲液包括：葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水；葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水的质量比为1-5：1-5：5-10：0.01-0.05：0.01-0.05：150-250。2.根据权利要求1所述家禽精液稀释缓冲液，其特征在于，复合溶液a中，咖啡酸苯乙酯、表儿茶素的质量比为0.02-0.04：0.02-0.04。3.根据权利要求1所述家禽精液稀释缓冲液，其特征在于，复合溶液b中，槲皮素、海藻酸的质量比为0.02-0.04：0.02-0.04。4.根据权利要求1所述家禽精液稀释缓冲液，其特征在于，基础缓冲液的ph值为7-7.5。5.一种如权利要求1-4任一项所述家禽精液稀释缓冲液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a；(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b；(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀，调节体系ph值为7-7.5得到基础缓冲液；(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分；(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺搅拌均匀得到第二组分。6.一种家禽精液的冷存方法，其特征在于，包括如下步骤：将家禽精液与如权利要求1-5任一项所述家禽精液稀释缓冲液中第一组分混合均匀，分装于冻存管内，降温至2-5℃，再加入如权利要求1-5任一项所述家禽精液稀释缓冲液中第二组分混合均匀，移入液氮气相中熏蒸2-6min，加入至液氮中冷冻保存。7.根据权利要求6所述家禽精液的冷存方法，其特征在于，家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第一组分的质量比为1：5-7。8.根据权利要求6所述家禽精液的冷存方法，其特征在于，家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第二组分的质量比为1：2-5。
技术总结本发明公开了一种家禽精液稀释缓冲液，包括：第一组分和第二组分；第一组分包括：基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄，基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄的质量比为80-130：1-5：1-5；第二组分包括：基础缓冲液、复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄，基础缓冲液、复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺的质量比为80-130：1-5：20-30：1-5；其中，基础缓冲液包括：葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水；葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水的质量比为1-5：1-5：5-10：0.01-0.05：0.01-0.05：150-250。250。250。
技术研发人员：叶鹏飞 邵赛赛 刘孟学 唐孝通 刘文全 熊光旭 靳二辉 李升和
受保护的技术使用者：蚌埠市华信禽业有限公司
技术研发日：2022.09.08
技术公布日：2022/11/1
