本发明涉及至少一种乳杆菌菌株，其在减少和/或预防人类急性心理社会压力的至少一种有害影响的方法中使用，其中该方法包括通过施用有效剂量的至少一种乳杆菌菌株进行治疗，优选地其中至少一种有害影响是可溶性fractalkine的水平升高，其任选地与急性心理社会压力的至少一种进一步有害影响组合。
背景技术：
1、压力是生物体对压力源(例如环境条件)的反应。压力包括身体对威胁、挑战或身体或心理障碍等状况的反应方式。这些条件、威胁、挑战或障碍被称为压力源。自主神经系统和下丘脑-垂体-肾上腺(hpa)轴是对压力做出反应的两个主要系统。
2、交感肾上腺髓质(sam)轴可通过交感神经系统激活战斗或逃跑反应，而副交感神经系统则使身体恢复稳态。hpa轴调节皮质醇的释放，这影响许多身体功能，例如代谢、心理和免疫功能。sam和hpa轴受几个大脑区域的调节，包括边缘系统、前额叶皮层、杏仁核、下丘脑和纹状体。
3、急性压力会过度激活免疫系统，导致炎症和抗炎之间的失衡。通过扰乱免疫系统的平衡，压力会诱发外周和中枢炎症。这种失衡导致心血管疾病、神经退行性疾病和癌症等多种压力相关疾病(liu等，2017，front hum neurosci；11：316)。
4、压力还会增加胃肠系统对炎症的反应，并可能重新激活先前的炎症并加速炎症过程(yaribeygi等，2017，excli j.16:1057–1072)。例如，慢性压力可能会增加炎症性肠病(ibd)的风险，而急性心理社会压力可能加剧这种风险。肠易激综合征部分可能由炎症引起，也与压力有关。
5、因此，本领域需要找到有效的方法来减少和/或预防人类急性心理社会压力的有害影响，特别是同时患有慢性压力的个体。
技术实现思路
1、本发明提供了至少一种乳杆菌菌株，其在减少和/或预防人类急性心理社会压力的至少一种有害影响的方法中使用，其中该方法包括通过施用有效剂量的所述至少一种菌株进行治疗。根据本发明，与不存在所述至少一种菌株时人类急性心理社会压力的至少一种有害影响相比，施用所述至少一种乳杆菌菌株优选地减少和/或预防人类急性心理社会压力的至少一种有害影响。
2、在第一方面，至少一种乳杆菌菌株的施用减少和/或预防作为急性心理社会压力的有害影响的可溶性fractalkine水平升高。
3、在第二个方面，至少一种乳杆菌菌株的施用减少和/或预防作为急性心理社会压力的有害影响的可溶性fractalkine水平升高，其结合减少或预防急性心理社会压力的至少一种进一步有害影响。至少一种进一步有害影响可以选自生化指标和/或生理指标。至少一种进一步有害影响可以是可溶性cd163水平升高。
4、在第三方面，至少一种乳杆菌菌株的施用减少和/或预防作为急性心理社会压力的有害影响的可溶性cd163水平升高。施用可以减少或预防急性心理社会压力的一种或多种进一步有害影响。
5、在第四个方面，所述至少一种乳杆菌菌株的施用减少和/或预防心理社会压力的至少一种有害影响，其中所述有害影响是生理指标。生理指标可以选自增加的脉搏、增加的心率、增加的高频心率变异性、增加的肠道通透性和不利的肠道功能，例如增加的腹痛、胀气和/或腹胀。
6、“用于减少和/或预防”包括这样的用途的含义：其对受试者产生预防、延迟、预防、减轻和/或消除与障碍、疾病或病症相关的一种或多种影响、症状和/或其他标记的严重程度的效果。“预防(prevent)”、“预防(prevention)”或“预防(preventing)”包含被预防的事件、影响或条件被防止、延迟、减轻(例如，严重程度降低)、阻止发生或停止的含义。这种预防通常发生在事件发生或者影响或病情显现之前，但是应当理解，这也意味着防止进一步发生相同类型的事件。还应当理解，此类术语可以包含这样的含义，即事件或条件保持在当前状态而不会变得更糟或进一步发展。
7、例如，在根据本发明施用至少一种菌株(或包括至少一种菌株的组合物)后，与不施用至少一种菌株相比，或与施用缺乏至少一种菌株的相应组合物相比，可减少相关的或急性心理社会压力发生之前的压力生化指标(例如可溶性fractalkine)的测量值至少0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或至少99％。
8、“心理社会压力”包括由社会威胁情况引起的压力的含义，其可包括社会评价、社会排斥和声称目标导向表现的‘成就’情况(参见kogler等，2015，neuroimage 119：235-251，其全部内容以引用方式并入本文)。心理社会压力可能源于满足与他人交往的需要和/或维持社会自我的需要受到威胁的情况。‘成就情况’是指个体认为他或她的表现将受到评估的情况。因此，心理社会压力包括由个体表现可能受到他人负面评价的情况引起的压力。
9、应当理解，术语“心理社会压力”包括由特定心理社会压力源诱发的影响。因此，心理社会压力源包括他人对自己的表现做出负面判断的可能性，特别是在这种判断可能导致社会排斥或缺乏成就的情况下。
10、应当理解，心理社会压力旨在排除生理压力。“生理压力”包括与身体组织的潜在损伤和身体威胁相关的压力的含义，例如疼痛、饥饿、氧化应激等(参见kogler等，2015，同上)。还应理解，心理社会压力旨在排除由身体活动或锻炼引起的压力，例如wo 00/70972中所述，以及由感染或过敏引起的任何压力。生理压力触发‘战斗或逃跑’反应，而在心理社会压力期间，注意力转向情绪调节和目标导向的行为，奖励处理减少(kogler等，2015，同上)。
11、在“急性心理社会压力”上下文中，“急性”我们包括压力源的存在和/或对压力源的压力反应受时间限制的含义。因此，急性压力源通常涉及短期挑战。例如，急性压力源(和/或对该压力源的压力反应)通常存在少于一天，例如不超过12、11、10、9、8、7小时或优选少于6、5、4、3、2或1小时。应当理解，一天内可能发生不止一次的急性心理社会压力，并且同样或相似的急性压力源可能在短时间内(例如，在24至72小时期间内)导致不止一次的急性心理社会压力，并且仍被视为引起急性压力。
12、急性心理社会压力源(或引起急性心理社会压力的刺激)的例子包括但不限于以下情况：会面；进行口头报告或演讲；正在接受考试；打重要的电话；参加重要会议；必须在截止日期(或接近迫在眉睫的截止日期)前工作；被欺负；收到意外的严重消息，例如生病、丧亲或失业。应当理解，术语“急性”旨在大体上排除术语“慢性”的含义。“慢性”我们包括持续状态的含义。应当理解，持续状态可以包括波动并且不仅包括静止状态。与“急性”的有限时间范围比较而言，对于“慢性”的情况通常需要重复或持续几天，优选地超过1、2、3、4、5或6周或超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。
13、“慢性压力”我们包括持续压力状态的含义。慢性压力通常包括对长时间遭受的情绪压力的反应，其中个体认为他们几乎无法控制或无法控制。慢性压力状态的例子是那些严重的生活事件之后的压力状态，例如丧亲时期、失业时期、孤独感或持续的婚姻问题。
14、还应理解，急性压力事件可能先于或导致慢性压力时期。例如，急性压力源可能是收到意想不到的严重消息(例如疾病、丧亲之痛或失业)，而慢性压力源可能是作为新闻主题的负面情况的持续存在(例如疾病、丧亲之痛、或失业)。
15、“急性心理社会压力的影响”包括由存在急性心理社会压力直接或间接导致的身体测量的含义。“有害”包括造成伤害或损害的含义。因此，关于“急性心理社会压力的有害影响”，我们包括了这样的含义，即急性心理社会压力可能导致、恶化或加剧对个人造成伤害或损害的特定指标。
16、优选地，急性心理社会压力的有害影响选自压力的一种或多种生物化学和/或生理指标。应当理解，急性心理社会压力的有害影响可能在急性心理社会压力发作之前、期间或之后表现出(例如，可测量)。优选地，急性心理社会压力的有害影响在急性心理社会压力发作期间和/或之后一小时内是可测量的。
17、压力的生化指标的例子包括细胞因子水平升高，尤其是炎性细胞因子和/或连蛋白(zonulin)和/或皮质醇和/或可溶性cd163。优选地，炎性细胞因子是一种或多种可溶性fractalkine(趋化因子[c-x3-c基序]配体1，由cx3cl1基因在人类中编码)。c-反应蛋白(crp，由crp基因在人类中编码)、干扰素γ(ifnγ，由ifng基因在人类中编码)、白细胞介素10(il-10或人类细胞因子合成抑制因子[csid]，在人类中由il10基因编码)、白介素1β(il-1β，由il1b基因在人类中编码)、白介素6(il-6，由il6基因在人类中编码)、白介素8(il-8或趋化因子[c-x-c基序]配体8，cxcl8，由cxcl8基因在人类中编码)，或肿瘤坏死因子α(tnfα、cachexin或恶病质素(cachectin)，由tnfa基因在人类中编码)。连蛋白(zonulin)，也称为触珠蛋白2前体(等位基因α-2[2-2]的未切割形式)，是一种由人类hp基因编码的蛋白质(参见fasano,2011，physiol rev,91(1)：151-175，其全部内容以引用方式并入本文)并调节消化道壁细胞之间紧密连接的渗透性。连蛋白(zonulin)被认为是霍乱弧菌分泌的闭塞小带毒素的哺乳动物类似物，因此，连蛋白与乳糜泻和1型糖尿病的发病机制有关。皮质醇，也称为氢化可的松，是糖皮质激素类激素中的类固醇激素，主要在肾上腺内的肾上腺皮质产生，但也有证据表明在肠道局部合成(见taves等，2011，am j physiol endocrinal metab，301(1)：e11-e24，其全部内容通过引用并入本文)。cd163(由cd163基因在人类中编码)是一种清道夫受体，属于清道夫受体富半胱氨酸家族b型。膜结合cd163具有1048个氨基酸残基的胞外结构域、单个跨膜片段和具有多个剪接变体的胞质尾.可溶性cd163(scd163)是由adam17(也称为肿瘤坏死因子-α转化酶(tace))酶切导致的膜结合受体胞外域脱落产生的。scd163存在于血浆和脑脊液中。scd163在多种炎症性疾病中上调，包括肝硬化、2型糖尿病、巨噬细胞活化综合征、戈谢病、败血症、hiv感染、类风湿性关节炎和霍奇金淋巴瘤。蛛网膜下腔出血后，scd163在脑脊液中也上调。
18、压力的生化指标可以通过本领域已知的任何合适的量度确定。优选地，压力的生化指标在血浆或血清中测量。例如，细胞因子(包括趋化因子)、肽或蛋白质的水平可以通过酶联免疫吸附测定(elisa)用与待测量的细胞因子具有特异性的抗体进行测定，或通过美国马里兰州rockville的mesoscale discovery的多重试剂盒测定。激素(例如皮质醇)的测量技术包括免疫测定(例如elisa)和液相色谱串联质谱法(lc-ms/ms)。还应当理解，压力的生化指标可以在其他生物样品中测量，例如尿液、粪便、唾液、呼吸、眼泪、淋巴液、脑脊液、滑液或组织活检。
19、压力的生理指标的例子包括增加的脉搏、增加的心率、增加的高频心率变异性、增加的肠道通透性和不利的肠道功能，例如增加的腹痛、胀气和/或腹胀。
20、压力的生理指标可以通过本领域已知的任何合适的量度确定。例如，心率的测量可以通过心电图确定，肠道功能的测量可以通过具有视觉模拟量表的问卷确定。
21、在最优选的实施方案中，压力的生化指标是可溶性fractalkine水平升高，优选地血浆中可溶性fractalkine水平升高。
22、因此，在根据本发明的优选实施方案中，至少一种乳杆菌菌株用于降低和/或预防作为人类急性心理社会压力的有害影响的血浆中可溶性fractalkine水平升高的方法中，其中该方法包括通过施用有效剂量的至少一种乳杆菌菌株进行治疗。
23、fractalkine
24、fractalkine是cx3 c趋化因子家族中唯一已知的成员，其特征在于具有三个氨基酸将n端附近的半胱氨酸隔开。在小鼠中，fractalkine也被称为神经趋化因子(neurotactin)。膜结合fractalkine(cx3cl1)有373个氨基酸(去除信号肽后的人类成熟长度)，其包括n端结构域(残基1-76)、粘蛋白样茎(残基77-317)、跨膜α螺旋(残基318-336)和细胞质尾部(残基337-373)(jones等，2010，mol interv，10(5)：263-70；bazan等，1997，nature，385：(6617)：640-644；两者的全部内容通过引用并入本文)。
25、fractalkine表达的主要部位是肺、肾和肠中的神经元和上皮细胞，炎症性病症下的内皮细胞和平滑肌细胞也可以表达fractalkine(white等，2012，同上)。在活化的内皮细胞上表达的膜结合fractalkine促进白细胞的强粘附。fractalkine通过与趋化因子受体cx3cr1(例如在nk细胞、细胞毒性t淋巴细胞和γ-δ细胞的表面上的)相互作用，引发其粘附和迁移功能。在炎症性病症下，膜锚定的fractalkine也在单核细胞上表达，表明fractalkine在炎症疾病中起作用(jones等，2010，同上)。已发现在神经元上表达的膜锚定fractalkine对小胶质细胞迁移至关重要，因为小胶质细胞表达cx3cr1受体。在空间学习后的短暂时间窗口期间，fractalkine在海马中也被上调。
26、可溶性95kda形式的fractalkine(可溶性fractalkine或加工过的fractalkine)包含趋化因子结构域和细胞外粘蛋白样茎。可溶性fractalkine是通过脱落蛋白酶adam10或adam17在粘蛋白茎基部裂解膜结合的fractalkine释放的(zunke等，2017，biochimbiophys acta mol cell res，1864(11pt b)：2059-2070)。adam10的脱落被认为是组成性的，而adam17的脱落是对细胞活化的反应，例如在炎症性病症下(white等，2012，同上)。adam10的至少两个切割位点是已知的(white等，2012，arterioscler thromb vasc biol，32：589-594)。可溶性fractalkine有效地化学吸引t细胞、单核细胞和自然杀伤(nk)细胞。
27、已显示fractalkine及其受体cx3cr1的量在多种形式的癌症、炎症性疾病和心血管疾病中增加。例如，据报道，在冠状动脉斑块破裂的患者中可溶性fractalkine水平增加(ikejima等，2010，circ j，74：337-345)并且fractalkine通过对原发性人平滑肌细胞的增殖和抗凋亡作用与心血管疾病有关(white等，2010，cardiovasc res，85：825-835)。在类风湿性关节炎的滑液中也报道了可溶性fractalkine水平的增加(ruth等，2001，arthritisrheum，44：1568-1581)。已显示表达膜锚定的fractalkine的肠上皮细胞响应il-1β的刺激而脱落可溶性fractalkine(muehlhoefer等，2000，j immunol，164：3368-3376)。此外，人类肠道微血管内皮细胞已显示出响应ifn-γ和tnfα联合刺激而不是单独ifn-γ或tnfα的刺激而释放可溶性fractalkine，这在溃疡性结肠炎和克罗恩病患者的细胞中比健康对照更高(sans等，2007，gastroenterology，132(1)：139-53)。
28、在两种炎症性肠病小鼠模型中施用抗fractalkine单克隆抗体显示出积极的结果，包括抑制体重减轻，表明fractalkine在ibd发病机制中的作用(nishimura等，2009，annny acad sci，1173：350-6)。nishimura等,2009强调了fractalkine-fractalkine受体(cx3cl1-cx3cr1)相互作用在结肠炎发展中的生物学意义。
29、炎症性肠病患者的结肠显示出fractalkine水平升高和大量fractalkine受体阳性细胞。小鼠注射抗fractalkine单克隆抗体，以破坏fractalkine-fractalkine受体通路，有效抑制血管内单核细胞巡逻行为；减少结肠中炎性细胞因子的表达；在oxa诱导的小鼠结肠炎模型中维持血管完整性并显著抑制结肠炎症状(kuboi等，2019，int immunol.2019apr26；31(5)：287-302)。抗fractalkine抗体还改善了另一种ibd模型t细胞转移性结肠炎的症状。kuboi等人，2019的结果表明fractalkine-fractalkine受体轴在鼠结肠炎模型的发病机制中起着关键作用，并表明破坏fractalkine-fractalkine受体相互作用和相关通路可能是治疗炎症性肠病(ibd)的有效策略，包括克罗恩病(cd)和溃疡性结肠炎(uc)。
30、fractalkine及其受体在化疗引起的周围神经病变(cipn)中起作用。当fractalkine和fractalkine受体被高度表达时，它们激活脊髓小胶质细胞，然后通过p38/mapk信号通路产生炎症因子，如tnf-α和il-1b，导致cipn(clark和malcangio，2012，expneurol.2012apr；234(2)：283-92)。天麻素通过减少fractalkine和fractalkine受体通路抑制脊髓小胶质细胞的激活，从而缓解小鼠中诱导的cipn(qin等，drug chemtoxicol.2018dec 17：1-8)。
31、糖尿病视网膜病变(dr)的病理生理机制复杂且可能与氧化应激、nf-κb和炎症介质密切有关并且可能相关联。使用rt-pcr、蛋白质印迹分析和酶联免疫吸附测定(elisa)在糖尿病诱导的大鼠中评估各种氧化应激和炎症介质(包括fractalkine)的表达。一些大鼠接受了西洛他唑(cilostazol)治疗。在糖尿病大鼠的视网膜中，与健康大鼠相比，糖尿病小鼠的fractalkine mrna水平升高了五倍，而fractalkine表达升高了四倍。用西洛他唑治疗使fractalkine mrna的水平降低了66％，使fractalkine的表达降低了62％。监测氧化应激和炎症的其他标志物，发现西洛他唑减少糖尿病眼的炎症反应和氧化应激。西洛他唑的抗炎作用可能是通过减少氧化应激、抑制nf-κb活性和随后减少炎症介质间接实现的。西洛他唑可能通过这些机制有益于预防糖尿病视网膜病变的进展(yeh等，curr eye res2019mar；44(3)：294-302)。因此，应当理解，可溶性fractalkine的减少可能有利于提供针对其中涉及升高的可溶性fractalkine的病症或疾病的保护和/或治疗。然而，在本公开之前，在急性心理社会压力和fractalkine释放之间没有建立联系。
32、在最优选的实施方案中，根据本发明的至少一种菌株的施用可以降低或防止作为人类急性心理社会压力的有害影响的血浆中可溶性fractalkine水平升高，从而对与可溶性fractalkine升高有关的障碍、病症或疾病提供保护和/或缓解，例如癌症、化疗引起的周围神经病变(cipn)、糖尿病性视网膜病变(dr)、炎症性疾病、心血管疾病、炎症性肠病(ibd)、肠易激综合征(ibs)、溃疡性结肠炎和克罗恩病。
33、患者组
34、应当理解，根据本发明的至少一种菌株可用于在经历急性心理社会压力的任何人中减少和/或预防急性心理社会压力的至少一种有害影响。
35、特别地，至少一种菌株适用于人类(男性和/或女性)，包括青少年(12-17岁)、青年(18-30岁)和30、40、50、60、70和80岁以上的成年人。
36、待治疗的人可以是患有慢性压力的个体或没有慢性压力的个体。
37、“慢性压力”包括在shirom-melamed倦怠问卷(smbq)中得分为3.75或更高的含义(grossi等，2003，j psychosomatic res 55：309-316)。因此，待治疗的人可能具有慢性压力，其由smbq中的3.75或更高的分数表示。或者，接受治疗的人可能没有慢性压力，其由smbq中的分数低于3.75表示。
38、还应理解，“慢性压力”不旨在包括抑郁。抑郁症包括zung自评抑郁量表(zung,1965,arch gen psychiatry,12:63-70,其全部内容以引用方式并入本文中)中45分或更高的含义。
39、乳杆菌菌株
40、根据本发明的至少一种乳杆菌菌株可以是活的、灭活的或死亡的。优选地，该菌株是活的。例如，优选地将菌株冷冻干燥。
41、有利地，至少一种乳杆菌菌株是益生菌菌株。
42、益生菌被定义为“当以适当量施用时可以赋予宿主健康益处的活微生物”(hill等人,《自然评论：胃肠病学与肝脏病学(nat rev gastroenterol hepatol)》,2014,11(8):506-514)。为了使细菌符合益生菌的定义，通常必须能够在肠道中生存并在肠道中定居，在生产和储存过程中生存，并有证据表明其对消费者健康具有积极作用。
43、“至少一种益生菌菌株”包含一种或多种细菌菌株的含义，所述一种或多种细菌菌株当以足够量施用时会赋予宿主健康益处。优选地，根据本发明的第一方面的“至少一种菌株”可以选自种植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)、副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)、卷曲乳杆菌(lactobacilluscrispatus)、格氏乳杆菌(lactobacillus gasseri)、发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)、罗伊氏乳杆菌(lactobacillus reuteri)、嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus)、瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus)、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)、唾液乳杆菌(lactobacillus salivarius)和约氏乳杆菌(lactobacillusjohnsonii)。
44、优选地，根据本发明的“至少一种菌株”是植物乳杆菌的至少一种菌株。
45、优选地，植物乳杆菌的所述至少一种菌株选自植物乳杆菌dsm 15312(heal 9tm)、植物乳杆菌dsm 15313(heal 19tm)、植物乳杆菌dsm 15316(heal 99tm)、植物乳杆菌dsm6595(299tm)、植物乳杆菌dsm 9843植物乳杆菌dsm 32131(gos42tm)、植物乳杆菌dsm 17852(lb3etm)和植物乳杆菌dsm 17853(lb7ctm)。
46、植物乳杆菌dsm 15312(heal 9tm)、植物乳杆菌dsm 15313(heal 19tm)和植物乳杆菌dsm 15316(heal 99tm)由普诺碧公司于2002年11月27日保藏于德国mascheroder weg1b,d-38124braunschweig的dsmz-deutsche sammlung von mikroorganismen undzellkulturen gmbh。
47、植物乳杆菌dsm 6595(299tm)于1991年7月2日以普诺碧(即，普诺碧公司)的名义保藏于德国mascheroder weg 1b,d-3300braunschweig的dsm-deutsche sammlung vonmikroorganismen und zellkulturen gmbh。
48、植物乳杆菌dsm 9843由普诺碧公司于1995年3月16日保藏于德国mascheroder weg 1b,d-38124braunschweig的dsm-deutsche sammlung vonmikroorganismen und zellkulturen gmbh。
49、植物乳杆菌dsm 32131(gos42tm)由普诺碧公司于2015年9月2日保藏于德国inhoffenstr.7b,d-38124braunschweig的的德国微生物和细胞培养物保藏库(leibnizinstitute dsmz-german collection of microorganisms and cell cultures)。
50、植物乳杆菌dsm 17852(lb3etm)和植物乳杆菌dsm 17853(lb7ctm)由probac ab于2006年1月6日保藏在德国mascheroder weg 1b,d-38124braunschweig的dsmz-deutschesammlung von mikroorganismen und zellkulturen gmbh。随后将与微生物保藏dsm17852和dsm 17853相关的所有权利和义务授予普诺碧公司，其现在已成为dsm 17852和dsm17853菌株的保藏人。
51、优选地，至少一种植物乳杆菌菌株能够粘附到肠上皮并在肠中持续存在。该物种的特定菌株包含甘露糖特异性粘附素(adlerberth等，1996，appl environ microbiol，62(7)：2244-2251，其全部内容通过引用并入本文)，其包括植物乳杆菌dsm 15312(heal 9tm)、植物乳杆菌dsm 15316(heal 99tm)、植物乳杆菌dsm 9843和植物乳杆菌dsm 6595(299tm)。
52、最优选地，植物乳杆菌的至少一种菌株是植物乳杆菌dsm 15312(heal 9tm)。
53、组合物
54、根据本发明的至少一种菌株可以存在于包括至少一种合适的载体的组合物中。例如，载体可以是稀释剂或赋形剂。所述组合物可以呈固体或液体制剂的形式，并且因此所述至少一种载体可以是固体或液体或可以包括至少一种固体组分和至少一种液体组分两者。
55、合适的液体载体的实例包含水、牛奶、椰子水、水果饮料和果汁、牛奶代用品(大豆饮料、燕麦饮料、坚果和其它基于植物的饮料)、起泡饮料、油制剂(包括坚果油或植物油的一种或多种，例如椰子、油菜籽、橄榄、玉米/玉蜀黍)；棕榈；甘油、丙二醇和其它水性溶剂。
56、合适的固体载体或赋形剂的实例包含麦芽糖糊精、菊粉、纤维素(如微晶纤维素(mcc)、羟丙基甲基纤维素(hpmc)或羟丙基纤维素(hpc))、糖醇、高分子量聚乙二醇、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸、崩解剂(如淀粉(优选地为玉米、马铃薯、木薯或其它植物淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复杂的硅酸盐)以及制粒粘合剂(如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶和阿拉伯树胶)。另外，可以包含润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石粉。
57、在根据本发明的第一方面的实施方案中，载体可以选自药学上和/或营养上(食物级)可接受的载体或赋形剂。例如，载体材料可以是食物。
58、合适的药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂的实例包含本领域的技术人员熟知的载体、赋形剂和稀释剂，例如在《雷明顿：药学科学与实践(remington:the science andpractice of pharmacy)》,第19版,第1和2卷(编辑gennaro,1995,马克出版公司(mackpublishing company))中给出的载体、赋形剂和稀释剂。
59、“食品级”包括符合“公认安全”(gras)标准的载体、成分和赋形剂。
60、“食品”包括任何可食用的物质，可为有机体提供营养或支持。合适的食品载体的实例包含饮料(例如，果汁)、乳制品(例如，酸奶、奶酪、冰淇淋、婴儿配方食品和涂抹食品，如人造黄油)、乳制品替代产品(例如，大豆、坚果或其它基于植物的饮料、酸奶和涂抹食品)、基于谷物的产品(例如，面包、饼干、早餐谷物、意大利面和干食品条(如健康条))和婴儿食品(例如，水果泥和/或蔬菜泥)。
61、根据本发明的组合物可以是干燥的非发酵组合物、发酵组合物或干燥的发酵组合物。在此上下文中，发酵具体地包含在厌氧条件下通过乳杆菌发酵乳酸。在干燥的非发酵组合物的情况下，在受试者摄入之前基本上不发生发酵，并且因此发酵仅在受试者摄入组合物之后在胃肠道中进行。
62、因此，在根据本发明的一些实施方案中，所述组合物呈食品的形式，其中所述食品是基于谷物的产品、乳制品、果汁饮料或发酵食品。
63、发酵食品的实例包含发酵乳制品(如酸奶、开菲尔(kefir)或酸奶昔(lassi))、无乳发酵替代乳品(如椰奶开菲尔)、基于发酵谷物的产品(如燕麦、燕麦片、玉米、高粱、小麦)、发酵蔬菜(如德国泡菜、韩国泡菜或咸菜)、发酵豆类或大豆(如纳豆或丹贝)和发酵茶(如康普茶)。不含乳制品的牛奶替代品的其他实例包括杏仁、大豆和燕麦类“ghurts”。
64、在根据本发明的一些实施方案中，所述至少一种菌株存在于非天然存在的组合物中，例如，组合物不仅包括益生菌菌株和水。
65、在使用中，在向哺乳动物施用之前，可以将根据本发明的至少一种菌株或包括所述至少一种菌株的组合物与液体或固体载体混合。例如，受试者可以在摄入之前将所述至少一种菌株或其组合物与包括一种或多种液体的载体混合，所述一种或多种液体选自水、牛奶、椰子水、水果饮料和果汁、牛奶代用品(大豆饮料、燕麦饮料、坚果和其它基于植物的饮料)、起泡饮料或其它一些水性溶剂或饮料。类似地，可以将所述至少一种菌株或其组合物与由一种或多种食品组成的载体混合。合适的食品载体包含燕麦片载体、大麦载体、发酵的或非发酵乳制品，如酸奶、冰淇淋、奶昔、果汁、饮料、汤、面包、饼干、意大利面、早餐谷物、干食品条(包含健康条)、基于植物的食品(如大豆产品)、涂抹酱、婴儿食品、婴儿营养品、婴儿配方食品、出生时的母乳替代品。
66、优选地，制剂是含有日剂量或单位、每日亚剂量或其适当部分的包括菌株的组合物的单位剂量。
67、根据本发明的组合物可以是膳食补充剂。“膳食补充剂”包含旨在通过口食用例如丸剂、胶囊剂、片剂或液体剂来补充饮食的制成品的含义。膳食补充剂可能含有生命必需的物质和/或尚未被证实对生命至关重要的物质，但可能具有有益的生物学作用。当根据本发明的组合物为膳食补充剂的形式时，要添加的载体包括本领域技术人员公知的那些，例如在remington:the science and practice of pharmacy,19th ed.,vol.1&2(ed.gennaro,1995,mack publishing company)中给出的那些。膳食补充剂中通常使用的任何其它成分是技术人员已知的，并且也可以常规地与至少一种菌株一起添加。
68、根据本发明的组合物可以以溶液、悬浮液、乳剂、片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、锭剂、口香糖或栓剂的形式提供。
69、例如，在优选实施方案中，根据本发明的组合物是包括经过冷冻干燥的乳杆菌的胶囊形式的膳食补充剂。
70、在根据本发明的实施方案中，所述至少一种菌株以约1×106到约1×1014cfu/剂量，优选地约1×108到约1×1012cfu/剂量，更优选地约1×109到约1×1011cfu/剂量，并且最优选地约1×1010cfu/剂量的量存在(例如，存在于组合物中)。如果所述至少一种菌株由多于一种菌株组成，则此量表示菌株的组合的总cfu/剂量。例如，所述至少一种菌株可以以约1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010、1×1011、1×1012或约1×1013cfu/剂量的量存在。所述至少一种菌株可以以约1×1014、1×1013、1×1012、1×1011、1×1010、1×109、1×108或约1×107cfu/剂量的量存在。根据本发明的至少一种菌株也可以单独用于在摄取之前添加或混合至少一种菌株的水或任何其它水性媒剂中。
71、根据本发明的组合物可以以片剂、胶囊剂、粉剂、珠粒剂、酏剂、溶液或悬浮液的形式口服、经颊或舌下施用，其可以含有调味剂或着色剂，用于立即释放、延迟释放或控制释放应用。该组合物可以以粉末组合物的形式施用，诸如速溶微生物组合物，例如在wo 2017/060477中或在普诺碧的英国专利申请1708932.7或普诺碧的与速溶技术有关的公开文献wo 2018/224509中描述的那些，所有上述三个文献的全部内容通过引用并入本文。如果粉末不在速溶的微生物组合物中，则其可能适合于在摄入前添加到食品(例如酸奶)或饮料(例如水或牛奶)中。
72、当组合物呈粉末的形式时，通常将所述组合物填充在密封的容器中，所述容器提供氧气和湿气屏障，以保护和维持在组合物中细菌的活力。因此，在组合物呈粉末的形式的情况下，优选地将组合物包装在密封的铝箔棒中，其中每个棒包括一个剂量的组合物，即，一个剂量的细菌。合适的容器的非限制性实例包含棒、袋、小袋或胶囊。在优选实施方案中，容器是通常通过焊接密封的铝箔或聚乙烯棒。棒通常被配置成易于撕开。棒可以具有撕开凹口。
73、根据本发明的组合物可以调配成控释固体剂型，例如在wo 03/026687和美国专利第8,007,777号和第8,540,980号中描述的控释固体剂型中的任何一种，所述文献的全部内容通过引用并入本文。所述组合物可以调配成层状剂型，例如普诺碧的包含在wo 2016/003870中描述的任何层状剂型的技术，所述文献的全部内容通过引用并入本文。
74、片剂可以通过压制或模制，任选地与一种或多种辅助成分一起制成。压制片剂可以通过在合适的机器中压制呈自由流动形式(如粉末或颗粒剂)的(例如，经过冷冻干燥的)至少一种益生菌菌株来制备，任选地与粘合剂(例如，聚维酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，淀粉乙醇酸钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂混合。可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物来制备模制片剂。片剂可以任选地被包衣或刻痕，并且可以被调配为使得使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素来提供其中活性成分的缓慢或控释，以提供期望的释放曲线。
75、治疗方法
76、本发明还提供了一种用于减少和/或预防人的急性心理社会压力的至少一种有害影响的方法，其中该方法包括通过对人施用有效剂量的至少一种乳杆菌菌株或其组合物进行治疗。
77、特别地，该治疗方法包括上述用途的方法，其是根据上述本发明方面的至少一种菌株。
78、“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包含被治疗的疾病或病状得到改善、严重程度降低、消除、不再发生、防止进一步发生、延迟和/或停止的含义。术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”还包括延迟、防止、降低严重性和/或消除一种或多种症状、效果、适应症和/或与给定疾病或病状相关的其他标志物的含义。当这些术语之一用于疾病或病状的上下文中时，此类治疗通常在疾病或病状显现之后进行。还应当理解，此类术语可以包含这样的含义，即疾病或病状保持在当前状态而不会变得更糟或进一步发展。
79、通过根据本发明的方法治疗的人可以是上文关于本发明的较早方面给出的任何人。例如，人可以是男人或女人，并且可以是青少年(12-17岁)、青年(18-30岁)或30、40、50、60、70或80岁以上的成年人。
80、根据本发明的方法的施用可以包含如以上关于本发明的第一方面描述的口服、经颊或舌下施用。
81、根据本发明的方法的施用可以包含至少一天、两天、三天、四天、五天、六天或七天一次或至少一周一次、两次、三次、四次、五次、六次或七次施用。优选地每天至少一次进行施用。根据本发明的方法施用可包括重复施用至少一、二、三、四、五或六天，或至少一、二、三或四周。优选地，每天至少重复施用一次，持续至少7天，例如至少一周，优选至少两周，更优选至少三周，最优选至少四周。
82、根据本发明，根据本发明的方法的施用优选地为约1×106到约1×1014cfu/单位剂量，优选地为约1×108到约1×1012cfu/单位剂量，更优选地为约1×109到约1×1011cfu/单位剂量，并且最优选地为约1×1010cfu/单位剂量的单位剂量。根据本发明的方法的施用优选地产生的有效剂量为约1×106到约1×1014cfu/单位剂量，优选地为约1×108到约1×1012cfu/单位剂量，更优选地为约1×109到约1×1011cfu/单位剂量，并且最优选地为约1×1010cfu/单位剂量。优选地，每个受试者每天至少施用一个单位剂量，例如每天一个单位剂量。因此，根据本发明的方法的施用优选地产生的每日剂量为约1×106到约1×1014cfu/天，优选地为约1×108到约1×1012cfu/天，更优选地为约1×109到约1×1011cfu/天，并且最优选地为约1×1010cfu/天。
83、应当理解的是，优选的每日剂量也可以通过施用多于一个亚剂量来实现，例如，通过每天两次施用包括优选的每日剂量的一半的单位剂量来实现。因此，有效剂量的优选范围也可以表示在任何实际单位剂量下要达到的优选每日剂量。
84、可以指示受试者将治疗有效量的根据本发明的至少一个菌株或根据本发明第一方面的组合物与水、另一种水性溶剂或食品(例如酸奶)一起食用。
85、应当理解，根据本发明的方法应该优选在急性心理社会压力发作之前进行，以便根据本发明的至少一种菌株可以具有减少和/或预防由随后的急性心理社会压力源引起的急性心理社会压力的至少一种有害影响的作用。因此，优选在急性心理社会压力发作前至少1、2、3、4、5或6天，更优选在急性心理社会压力发作前至少1、2、3或4周，开始施用根据本发明的至少一种菌株。
86、在根据本发明的优选实施方案中，用于减少和/或预防人中急性心理社会压力的至少一种有害影响的方法包括通过向人施用1010cfu的根据本发明的至少一种菌株或其组合物治疗至少30天。
87、通过减少和/或预防人类急性心理社会压力的至少一种有害影响，根据本发明的治疗方法可有效治疗、预防或减少疾病、病症或病状的至少一种症状。特别地，通过降低和/或预防作为人类急性心理社会压力的有害影响的血浆中可溶性fractalkine水平升高，根据本发明的治疗方法可以有效地治疗、预防或减轻选自癌症、化疗引起的周围神经病变(cipn)、糖尿病性视网膜病变(dr)、炎症性疾病、心血管疾病、炎症性肠病(ibd)、肠易激综合征(ibs)、溃疡性结肠炎和克罗恩病的一种或多种疾病、病症或病状的至少一种症状。在根据本发明的此类方法中，优选地，急性心理社会压力的有害影响是可溶性fractalkine水平升高，特别是在血浆中。
88、在方法中的用途
89、本发明的另一方面提供了包含根据本发明的至少一种菌株或其组合物的组合物在减少和/或预防人中急性心理社会压力的至少一种有害影响的方法中的用途。特别地，该方法是根据本发明的上述方法的方法。
90、在本说明书中对于一份显然在前公开的文件的列举或者讨论不应必然地被视为是承认所述文件是现有技术的一部分或者是公知常识。
91、现在将参考以下实施例和附图更详细地描述本发明。
1.一种用于减少和/或预防人的急性心理社会压力的至少一种有害影响的方法，其中所述方法包括通过对人施用有效剂量的至少一种乳杆菌菌株进行治疗，并且其中所述有害影响是可溶性fractalkine的水平升高。
2.一种用于减少和/或预防人的急性心理社会压力的至少一种有害影响的方法，其中所述方法包括通过对人施用有效剂量的至少一种乳杆菌菌株进行治疗，并且其中所述至少一种有害影响是可溶性fractalkine的水平升高以及急性心理社会压力的至少一种进一步的有害影响。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述急性心理社会压力的至少一种进一步的有害影响选自压力的生化指标和/或生理指标中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述生化指标选自一种或多种细胞因子的水平升高，尤其是炎性细胞因子，优选地皮质醇和/或可溶性cd163中的一种或多种。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，其中所述进一步的有害影响是可溶性cd163水平升高。
6.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述可溶性fractalkine的水平升高是可溶性fractalkine的血浆水平升高。
7.根据任一前述权利要求所述的方法，其中待治疗的人具有慢性压力。
8.根据权利要求7所述的方法，其中在shirom-melamed倦怠问卷中慢性压力由3.75或更高的分数表示。
9.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述至少一种乳杆菌菌株的有效剂量为每剂约1×106至约1×1014菌落形成单位(cfu)。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述至少一种乳杆菌菌株的有效剂量为每剂约1×108至约1×1012cfu。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述至少一种乳杆菌菌株的有效剂量为每剂约1×109至约1×1011cfu。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述至少一种乳杆菌菌株的有效剂量为每剂约1×1010cfu。
13.根据任一前述权利要求所述的方法，其中每天至少施用一次有效剂量的所述至少一种乳杆菌菌株。
14.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述有效剂量每天施用，持续至少一周。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述有效剂量每天施用，持续至少四周。
16.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述至少一种乳杆菌菌株选自种植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、卷曲乳杆菌、格氏乳杆菌、发酵乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、干酪乳杆菌、唾液乳杆菌和约氏乳杆菌。
17.根据权利要求16所述的方法，其中至少一种植物乳杆菌菌株选自植物乳杆菌dsm15312、植物乳杆菌dsm 15313、植物乳杆菌dsm 15316、植物乳杆菌dsm 6595、植物乳杆菌dsm 9843、植物乳杆菌dsm 32131、植物乳杆菌dsm 17852和植物乳杆菌dsm 17853。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述至少一种植物乳杆菌菌株能够粘附到肠上皮并在肠中持续存在。
19.根据权利要求16至18中任一项所述的方法，其中所述至少一种植物乳杆菌菌株包含甘露糖特异性粘附素。
20.根据权利要求16至19中任一项所述的方法，其中所述至少一种植物乳杆菌菌株是植物乳杆菌dsm 15312(heal 9tm)。
21.根据任一前述权利要求所述的方法，其中以包含至少一种载体材料、赋形剂材料和/或稀释剂材料的组合物的形式施用所述至少一种乳杆菌菌株。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述组合物以溶液、悬浮液、乳剂、片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、锭剂、口香糖或栓剂的形式提供。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述组合物以胶囊的形式提供。
24.根据权利要求21所述的方法，其中所述载体材料是食物。
25.至少一种乳杆菌菌株，其在减少和/或预防人的急性心理社会压力的至少一种有害影响的方法中使用，其中所述方法包括通过施用有效剂量的至少一种乳杆菌菌株进行治疗并且其中所述有害影响是可溶性fractalkine的水平升高。
26.至少一种乳杆菌菌株，其在减少和/或预防人的急性心理社会压力的至少一种有害影响的方法中使用，其中所述方法包括通过施用有效剂量的至少一种乳杆菌菌株进行治疗并且其中所述至少一种有害影响是可溶性fractalkine的水平升高以及急性心理社会压力的至少一种进一步的有害影响。
27.根据权利要求25所述使用的至少一种乳杆菌菌株，其中急性心理社会压力的所述至少一种进一步的有害影响选自压力的一种或多种生化指标和/或生理指标，任选地其中所述生化指标选自一种或多种细胞因子的水平升高，尤其是炎性细胞因子，优选地是可溶性cd163或皮质醇的水平升高。
28.一种根据权利要求21中限定的组合物，其用于减少和/或预防人的急性心理社会压力的至少一种有害影响。
29.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其用于治疗、预防和/或减轻人的癌症、炎性疾病、心血管疾病、炎性肠病、肠易激综合征(ibs)、溃疡性结肠炎和/或克罗恩病的至少一种症状的方法中。
30.根据权利要求25至27中任一项所述使用的至少一种乳杆菌益生菌菌株，其中所述使用是用于治疗、预防和/或减轻人的癌症、化疗引起的周围神经病变(cipn)、糖尿病性视网膜病变(dr)、炎性疾病、心血管疾病、炎性肠病、肠易激综合征(ibs)、溃疡性结肠炎和/或克罗恩病的至少一种症状的方法中。
31.根据权利要求28所述使用的组合物，其中所述使用是用于治疗、预防和/或减轻人的癌症、化疗引起的周围神经病变(cipn)、糖尿病性视网膜病变(dr)、炎性疾病、心血管疾病、炎性肠病、肠易激综合征(ibs)、溃疡性结肠炎和/或克罗恩病的至少一种症状的方法中。
