本发明涉及植物培养,尤其涉及一种培育新疆紫草试管苗的增殖培养基与新疆紫草试管苗及其培育方法。
背景技术:
1、紫草为紫草科紫草属植物,始载于《神农本草经》,作为常用中药,具有清热凉血、活血解毒、透疹消斑的功效,别名:硬紫草、软紫草。
2、紫草主要成分紫草宁及其衍生物为蒽醌类化合物,具有显著抗肿瘤、抗炎和抗菌活性;紫草除做药用外,还是重要的日化用品原料,研究者已成功以其中的色素研制开发出天然色素口红,因其不含人工色素,深受广大消费者欢迎。毛状根是利用发根农杆菌ri质粒诱发的结果,具有激素自主、生长迅速、有效成分含量高且稳定等特点,是生长植物次生代谢产物新的有效途径。由于紫草独特的药用价值,同时又是天然名贵染料的来源,而其原植物资源严重缺乏。植物组织培养具有占用空间小、培养周期短、繁殖速度快、能保持原有品种的固有性状和特性等优点,是未来中药生态农业工厂化育苗的发展方向。为了解决新疆紫草资源短缺,供需失衡的矛盾,植物组织培养成为解决这一问题行之有效的途径。目前,对新疆紫草组织培养方面的研究主要集中在两个方面:一方面从紫草愈伤组织中筛选出优良细胞系,用以生产有用的次生代谢产物。另一方面,利用植物组织培养技术,诱导并筛选出优良品系,并进一步将其快速繁殖成完整植株,利用紫草离体快繁技术不仅可以满足生产上对紫草的需求,而且有利于野生紫草资源的保护,同时培育出的紫草试管苗又是重要的科研材料,是诱导紫草毛状根的最佳外植体。目前紫草组织培养中存在的主要问题是:1、紫草试管苗增殖系数较低,在培养过程中玻璃化较为明显,叶片黄化现象严重,现有培养基在紫草组织培养过程中褐化明显;2、现有新疆紫草离体繁育研究主要通过间接器官(胚轴,子叶及茎段)发生途径来完成植株再生,但是利用该方法获得的再生苗增殖系数较低,且变异几率较大;另外一条途径则为利用先诱导愈伤组织,在进行分化丛生芽,但该方法也存在:(1)愈伤组织分化率低,(2)培育周期长,(3)试管苗移栽成活率低的问题。
3、基于此,提出本发明。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种解决新疆紫草离体培养叶片黄化,玻璃化和褐化现象严重以及器官发生途径增殖系数低等问题,具体涉及一种培育新疆紫草试管苗的增殖培养基与新疆紫草试管苗及其培育方法。
2、为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
3、本发明提供了一种适于培育新疆紫草试管苗的增殖培养基,以无铵的1/2ms培养基为基础,还包括如下浓度的组分:
4、6-苄氨基嘌呤2.0~3.0mg/l、萘乙酸0.05~0.15mg/l、柠檬汁300~500mg/l、蔗糖25~35g/l、琼脂7.0~8.0g/l;
5、所述增殖培养基的ph值为5.8~6.0。
6、本发明还提供了所述的增殖培养基在培育优良的新疆紫草试管苗中的应用。
7、本发明还提供了一种新疆紫草试管苗的培育方法,包括如下步骤:
8、(1)将新疆紫草外植体消毒,得到无菌的新疆紫草外植体;
9、(2)将所述无菌的新疆紫草外植体接入启动培养基中,培养25~35d,得到无菌苗;
10、(3)将所述的无菌苗转接至增殖培养基中,培养21~25d,得到增殖苗;
11、(4)将所述增殖苗转接至生根培养基中,培养18~25d,得到新疆紫草试管苗;
12、所述增殖培养基为所述的增殖培养基。
13、优选的,所述新疆紫草外植体为剥离种皮的新疆紫草种子或去除新疆紫草根的茎段;
14、所述消毒的方法为:将新疆紫草外植体置于乙醇中,浸泡50~70s,得到初步消毒的新疆紫草外植体;将所述初步消毒的新疆紫草外植体置于过氧化氢水溶液中,浸泡10~20min,得到再次消毒的新疆紫草外植体;将所述再次消毒的新疆紫草外植体置于氨苄西林溶液中,浸泡50~70min,得到无菌的新疆紫草外植体;
15、所述乙醇的初始浓度为70~80vt%;
16、所述过氧化氢水溶液的初始浓度为10~20vt%;
17、所述氨苄西林溶液的初始浓度为450~550mg/l。
18、优选的,所述启动培养基以sh培养基为基础,还包括如下浓度的组分:
19、蔗糖15~25g/l、琼脂7.0~8.0g/l;
20、所述启动培养基的ph值为5.8~6.0。
21、优选的,所述生根培养基以1/2ms培养基为基础,还包括如下浓度的组分:
22、萘乙酸0.3~0.5mg/l、吲哚丁酸0.5~1.0mg/l、活性炭0.2~0.5g/l、蔗糖25~35g/l、琼脂7.0~8.0g/l;
23、所述生根培养基的ph为5.8~6.0。
24、优选的,步骤(2)~(4)所述培养的温度独立为23~27℃,所述培养的光照强度独立为5000~10000lx;所述培养的光照时间独立为13~15h/d。
25、本发明还提供了所述的培育方法培育得到的新疆紫草试管苗。
26、本发明还提供了利用所述的新疆紫草试管苗在培育高成活率的新疆紫草待移栽苗中的应用。
27、本发明还提供了一种新疆紫草待移栽苗的培育方法,包括如下步骤:
28、将新疆紫草试管苗炼苗3~5d,得到待培育苗;将所述待培育苗置于多菌灵溶液中浸泡30~40min后,移栽至育苗基质中,培养5~7d,得到新疆紫草待移栽苗;
29、所述炼苗的方法为开盖炼苗;
30、所述育苗基质包括如下质量比的组分:蛭石:营养土为1~2:1~2;
31、所述培养的温度为22~28℃,所述培养的光照时间为7~9h/d。
32、本发明提供了一种培育新疆紫草试管苗的增殖培养基与新疆紫草试管苗及其培育方法。利用本发明的增殖培养基培育新疆紫草试管苗,可以解决新疆紫草离体培养叶片黄化,玻璃化和褐化现象严重以及器官发生途径增殖系数低等问题。利用本发明的增殖培养基可以得到增殖系数高达3.7以上的增殖苗。
33、利用本发明的方法可以在短时间内得到新疆紫草试管苗,使其在64~85d得到移栽成活率高的新疆紫草试管苗。
1.一种适于培育新疆紫草试管苗的增殖培养基,其特征在于,以无铵的1/2ms培养基为基础,还包括如下浓度的组分:
2.权利要求1所述的增殖培养基在培育优良的新疆紫草试管苗中的应用。
3.一种新疆紫草试管苗的培育方法,其特征在于,包括如下步骤:
4.根据权利要求3所述的培育方法,其特征在于,所述新疆紫草外植体为剥离种皮的新疆紫草种子或去除新疆紫草根的茎段;
5.根据权利要求4所述的培育方法,其特征在于,所述启动培养基以sh培养基为基础,还包括如下浓度的组分:
6.根据权利要求5所述的培育方法,其特征在于,所述生根培养基以1/2ms培养基为基础,还包括如下浓度的组分:
7.根据权利要求3~6任意一项所述的培育方法,其特征在于,步骤(2)~(4)所述培养的温度独立为23~27℃,所述培养的光照强度独立为5000~10000lx;所述培养的光照时间独立为13~15h/d。
8.权利要求3~7任意一项所述的培育方法培育得到的新疆紫草试管苗。
9.利用权利要求8所述的新疆紫草试管苗在培育高成活率的新疆紫草待移栽苗中的应用。
10.一种新疆紫草待移栽苗的培育方法,其特征在于,包括如下步骤:
