本发明涉及黄花菜通乳研究，具体是一种黄花菜通乳活性及其成分研究方法。
背景技术：
1、黄花菜是我国的一种特色蔬菜，但近年来干黄花菜的价格持续走低。如何开发黄花菜药用功能经济附加值、促进本地区种植产业发展，是摆在科技工作者面前的一道难题。黄花菜为百合科萱草属植物，其食用部分为未开放的花蕾，不仅营养价值高、且具有良好的药用价值，同时本地区资源丰富，因此扩大其药用功能开发前景广阔。
2、产妇哺乳期内，产妇乳汁减少或无乳可下，称“产后缺乳”。一般发生于分娩之后，在产后半个月内较常见，亦可发生于整个哺乳期。我国目前临床上产后缺乳发病率约占产妇的20％-30％。据全国母乳喂养学术研讨会报道，目前产后1个月纯母乳喂养率为47％-62％，产后4个月纯母乳喂养率仅为16％-34.4％，主要原因就是产后缺乳。剖宫产率高及产妇精神压力过大等原因导致产后缺乳发病率逐年上升，因此对黄花菜通乳活性及其功能成分研究非常重要。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种黄花菜通乳活性及其成分研究方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种黄花菜通乳活性及其成分研究方法，包括黄花菜通乳效果研究、分析黄花菜成分和探究黄花菜功能成分通乳活性与机制；
3、所述黄花菜通乳效果研究，包括通乳效果分析和安全性分析；
4、所述分析黄花菜成分，采用hplc法和gc-ms法检测化学成分与功能成分；
5、所述探究黄花菜功能成分通乳活性与机制，包括细胞实验和动物实验。
6、优选的，所述通乳效果机安全性分析步骤为：
7、步骤一：以产妇是否使用标准餐与黄花菜食疗配方餐，将100-200例产妇分为观察组和实验组，并记录年龄、分娩方式与孕周；
8、步骤二：通过产妇产后排出的乳汁量少甚至全无，不足以喂养婴儿，乳房松软，无胀痛感，挤压乳汁点滴而出，质地稀薄作为产妇缺乳的诊断标准；
9、步骤三：排除乳房畸形、乳头内陷畸形者、有重大疾病史、内分泌疾病者；
10、步骤四：观察两组产妇食欲、热卡摄入、精神状况等。观察新生儿体重、小便次数、小便清澈度、稀释度；大便颜色、性状以及新生儿是否自己放开乳房、满意表情入睡，母亲是否喂哺前乳房饱满，喂哺后变软，观察乳汁色泽、黏稠度、分泌量。泌乳量：足够喂养为3分、基本喂够2分、不够喂1分，无乳为0分，观察时间为5天，每天记录1次；
11、步骤五：安全性评价记录产妇进食过程中头痛、腹痛、呕吐、腹泻不适反应，出现相关症状，停止食用相关餐食，并观察至不适反应消失。
12、优选的，所述分析黄花菜中的化学成分和功能成分，化学成分分析方法为：用乙醇水溶液作为萃取剂，干黄花菜样品经破碎过20目筛，取100g在常温(10-30℃)下分别用水溶液、25％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、100％乙醇萃取12小时，期间保持搅拌，然后经离心(10000rpm,20min)分离萃取液与残渣，萃取液在-60℃下冻干48小时得到黄花菜提取物粉末，使用前密封储存于-20℃冰箱，高效液相色谱法(hplc)其检测化学成分,hplc条件：c18柱(250×4.6mm、5um)，流动相(0.05mmol/l kh2po4：甲醇(v/v)＝50：50混合溶液)，紫外检测波长350nm，流速1ml/min，柱温20℃，取粉末样品0.3g加入10ml甲醇水溶液(70：30)稀释后进样20ul。
13、优选的，所述功能成分分析方法为：采用hplc和薄层层析法(tlc)检测总黄酮含量，取黄花菜提取物粉末溶于甲醇溶液，以芦丁为对照分析不同浓度总黄酮成分，hplc条件参照化学成分分析，tlc条件：硅胶g薄板(50×20cm)1块，展开剂：苯：吡啶：甲酸(36：9：5)1ml，对照品：1％芦丁甲醇液1ml，显色剂：1％三氯化铝乙醇液2ml，利用紫外光测定显色斑点的rf值，采用气质联用色谱仪(gc-ms)分析不同浓度黄花菜及王不留行醇溶液中酯类成分：gc条件：db-ffap石英毛细柱(30m×
14、0.25mm,0.25μm)，载气为氦气，进样口温度230℃，不分流进样，质量扫描范围m/z35-500，利用计算机检索并与图谱库(ntst 05)的标准质谱图进行对照，对组分进行定性，采用峰面积归一法计算各化学成分的相对含量。
15、优选的，所述探究黄花菜功能成分通乳活性与机制中细胞实验方法为：首先利用casy细胞分析仪检测含不同浓度总黄酮的黄花菜提取液对奶牛乳腺上皮细胞增殖及活力的影响，原代正常培养的泌乳中期奶牛乳腺上皮细胞经以下处理：第一组为正常培养基；第二组为正常培养基+催乳素组(5ug/ml)；第三组为正常培养基+含不同浓度总黄酮的黄花菜提取液，接着测定含不同浓度总黄酮的黄花菜提取液对奶牛乳腺上皮细胞分泌乳糖和β-乳酪蛋白的影响：取对数生长周期乳腺上皮细胞分为3组：对照组、催乳素组(5ug/ml)和黄花菜提取液组，每个样品做3个平行实验，用纯水重悬并收集6h、12h、36h、48h及72h的细胞置于冰上，用匀浆器机械搅碎细胞，0.22um滤膜过滤裂解细胞叶后用于乳糖和β-酪蛋白的hplc检测。
16、优选的，所述探究黄花菜功能成分通乳活性与机制中动物实验方法为：
17、一、分组：将产后icr母鼠分为5组，分别为阳性对照组、空白对照组、黄花菜组；
18、二、药物/食物干预：按表1分组对动物进行灌胃，对照组给予等体积生理盐水灌胃，灌胃7d后处死，取母鼠乳腺组织进行指标检测；
19、三、采用elisa法测定prl含量。
20、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
21、1、本发明中通过对祁东黄花菜通乳功能成分(黄酮类、酯类等)及其含量进行分析，建立奶牛乳腺上皮细胞系，对含不同浓度总黄酮的黄花菜提取液进行不同时间干预后收集细胞，用casy细胞分析仪检测细胞活力及活细胞数，同时采用hplc检测β-酪蛋白与乳糖分泌情况，对产后icr母鼠灌胃给予含不同浓度酯类成分的黄花菜提取液一周，利用elisa法测定催乳素(prl)含量，同时采用免疫组织化学法检测prlr与β-酪蛋白的表达，分析其通乳活性与机制，促进农产品特色转化，带动地方重点产业经济发展。
1.一种黄花菜通乳活性及其成分研究方法，其特征在于：包括黄花菜通乳效果研究、分析黄花菜成分和探究黄花菜功能成分通乳活性与机制；
2.根据权利要求1所述的一种黄花菜通乳活性及其成分研究方法，其特征在于：所述通乳效果及安全性分析步骤为：
3.根据权利要求1所述的一种黄花菜通乳活性及其成分研究方法，其特征在于：所述分析黄花菜中的化学成分和功能成分，化学成分分析方法为：用乙醇水溶液作为萃取剂，干黄花菜样品经破碎过20目筛，取100g在常温(10-30℃)下分别用水溶液、25％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、100％乙醇萃取12小时，期间保持搅拌，然后经离心(10000rpm,20min)分离萃取液与残渣，萃取液在-60℃下冻干48小时得到黄花菜提取物粉末，使用前密封储存于-20℃冰箱，高效液相色谱法(hplc)其检测化学成分,hplc条件：c18柱(250×4.6mm、5um)，流动相(0.05mmol/l kh2po4：甲醇(v/v)＝50：50混合溶液)，紫外检测波长350nm，流速1ml/min，柱温20℃，取粉末样品0.3g加入10ml甲醇水溶液(70：30)稀释后进样20ul。
4.根据权利要求3所述的一种黄花菜通乳活性及其成分研究方法，其特征在于：所述功能成分分析方法为：采用hplc和薄层层析法(tlc)检测总黄酮含量，取黄花菜提取物粉末溶于甲醇溶液，以芦丁为对照分析不同浓度总黄酮成分，hplc条件参照化学成分分析，tlc条件：硅胶g薄板(50×20cm)1块，展开剂：苯：吡啶：甲酸(36：9：5)1ml，对照品：1％芦丁甲醇液1ml，显色剂：1％三氯化铝乙醇液2ml，利用紫外光测定显色斑点的rf值，采用气质联用色谱仪(gc-ms)分析不同浓度黄花菜及王不留行醇溶液中酯类成分：gc条件：db-ffap石英毛细柱(30m×0.25mm,0.25μm)，载气为氦气，进样口温度230℃，不分流进样，质量扫描范围m/z35-500，利用计算机检索并与图谱库(ntst 05)的标准质谱图进行对照，对组分进行定性，采用峰面积归一法计算各化学成分的相对含量。
5.根据权利要求1所述的一种黄花菜通乳活性及其成分研究方法，其特征在于：所述探究黄花菜功能成分通乳活性与机制中细胞实验方法为：首先利用casy细胞分析仪检测含不同浓度总黄酮的黄花菜提取液对奶牛乳腺上皮细胞增殖及活力的影响，原代正常培养的泌乳中期奶牛乳腺上皮细胞经以下处理：第一组为正常培养基；第二组为正常培养基+催乳素组(5ug/ml)；第三组为正常培养基+含不同浓度总黄酮的黄花菜提取液，接着测定含不同浓度总黄酮的黄花菜提取液对奶牛乳腺上皮细胞分泌乳糖和β-乳酪蛋白的影响：取对数生长周期乳腺上皮细胞分为3组：对照组、催乳素组(5ug/ml)和黄花菜提取液组，每个样品做3个平行实验，用纯水重悬并收集6h、12h、36h、48h及72h的细胞置于冰上，用匀浆器机械搅碎细胞，0.22um滤膜过滤裂解细胞叶后用于乳糖和β-酪蛋白的hplc检测。
6.根据权利要求5所述的一种黄花菜通乳活性及其成分研究方法，其特征在于：所述探究黄花菜功能成分通乳活性与机制中动物实验方法为：
