本发明属于动物细菌学和分子生物学，涉及一株杂交瘤细胞的制备及其应用。具体涉及涉及胞内劳森菌外膜蛋白ompa特异性单克隆抗体及其制备方法和应用。
背景技术：
1、胞内劳森菌(lawsonia intracellularis,li)主要引起猪增生性回肠炎(porcineproliferative enteropathy,ppe)，其以增生性出血性肠病(phe)和猪肠道腺瘤病(pia)为典型症状。li主要感染断奶仔猪及育肥猪，呈急性型、慢性型与亚临床型三种临床症状，其中慢性型最为常见，严重时也会出现腹泻，甚至死亡。猪增生性肠炎是集约化养殖场常见疾病之一，广泛流行于世界各主要养猪国家，对养猪业的危害除偶尔会引起中大猪的急性死亡外，主要的危害是猪群体中广泛存在的li慢性感染严重影响了饲料报酬率，给全球养殖业造成了重大的经济损失。
2、到目前为止，有6株li基因组序列保存在美国国家生物技术信息中心(ncbi)数据库中，包括两株猪源致病性分离株的全基因组序列。li菌株完整基因组包括一条1.4mb的染色体和三个27、39和194kb的质粒基因组，含1324个orf，分子研究多种动物物种包括马和仓鼠在内的胞内劳森菌分离株，显示出与猪分离株16s-rna有98％的同源性。此外，不同胞内劳森菌的外膜蛋白和免疫印迹的表型表征显示各分离株之间只有微小的差异，且抗原相关性不受影响。证明了胞内劳森菌各分离株间很少或没有出现遗传变异。
3、其中胞内劳森菌外膜蛋白ompa由340个氨基酸组成，其为亲水蛋白，且具有良好的免疫原性及保守性。尽管胞内劳森菌中外膜蛋白ompa的相关分子机制尚未得到表征，但在许多致病菌中，由于其在膜外的高度表达，ompa样蛋白参与多种重要的致病作用，包括细菌粘附、入侵或细胞内存活，以及逃避宿主防御或促炎细胞因子产生的刺激因子。这些致病作用最常与中枢神经系统、呼吸系统和泌尿生殖系统疾病有关。因此，ompa蛋白也成为潜在的亚单位疫苗候选抗原之一。
4、目前，国内外用于诊断胞内劳森菌感染的方法主要是血清学和检测粪便样品的各种pcr方法。pcr是实验室和临床上最为常用的病原学检测手段。pcr仅适用于感染动物排菌期粪便样品的检测，粪便中基因组提取步骤较为繁琐，不适用于检测大批样品。血清学诊断主要依靠酶联免疫吸附法(elisa)及间接免疫荧光试验(ifa)，这两种方法不仅具有较高的敏感性和特异性，且抗胞内劳森菌的特异性抗体能够在体内存在更长时间，缺点则是在感染后至少两周才能检测到抗体。近年来，国内猪场由ppe带来的经济损失愈发严重，因此亟需要胞内劳森菌的鉴别诊断方法进行我国猪群胞内劳森菌流行病学调查、疫苗免疫效果评估及防控净化效果评估等。
5、由于国内在血清学诊断方面尚无商业化的elisa检测试剂盒，需要提供一种成熟的elisa检测方法弥补本领域的空白。本发明通过细胞融合杂交瘤技术制备了胞内劳森菌外膜蛋白ompa特异性单克隆抗体，并建立了wb、ifa及阻断elisa等免疫学检测方法。
技术实现思路
1、本发明针对所要解决的技术问题，克服现有技术的不足而提供具体涉及一株杂交瘤细胞的制备及其应用。具体涉及涉及胞内劳森菌外膜蛋白ompa特异性单克隆抗体及其制备方法和应用。
2、一种胞内劳森菌外膜蛋白ompa特异性单克隆抗体的制备和应用，使用细胞融合杂交瘤技术制备胞内劳森菌外膜蛋白ompa特异性单克隆抗体，并将制备的胞内劳森菌外膜蛋白ompa特异性单克隆抗体成功应用于各种免疫学试验，基于制备的重组抗原及其单克隆抗体建立了检测胞内劳森菌外膜蛋白ompa抗体的阻断elisa检测方法，可用于商品化试剂盒的开发。
3、本发明的技术方案之一在于，提供了胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体的制备，所述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体由杂交瘤细胞株5f2产生，该细胞株被命名为杂交瘤细胞株5f2，hybridoma cell line5f2,该杂交瘤细胞株5f2于2023年9月15日送交中国.武汉.武汉大学保藏；保藏编号为cctcc no：c2023263。
4、本发明的胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体可用于胞内劳森菌外膜蛋白ompa的免疫学检测。
5、进一步的，所述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体可用于elisa、wb或ifa实验进行胞内劳森菌外膜蛋白ompa的检测。
6、本发明的技术方案之二在于，提供一种抗体制剂，所述抗体制剂包含上述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体，或所述抗体制剂包含所述单克隆抗体的片段。
7、进一步所述的抗体制剂，用于有效诊断或检测胞内劳森菌。
8、本发明的技术方案之三在于，提供所述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体在阻断elisa检测胞内劳森菌中的应用。
9、本发明还提供了上述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体、抗体制剂在制备诊断或检测胞内劳森菌中的应用。
10、本发明通过原核表达的胞内劳森菌外膜蛋白ompa制备出两株单克隆抗体胞内劳森菌外膜蛋白ompa的两株单抗可以用于多种免疫学检测，包括elisa、wb与ifa，用途广泛。同时，基于制备的重组抗原和其中一株单克隆抗体，探索优化出可用于检测胞内劳森菌的阻断elisa方法，与现有的商品化试剂盒相比，符合率较高。
11、本发明提供的胞内劳森菌外膜蛋白ompa特异性单克隆抗体是胞内劳森菌研究的特定有用工具，已成功地应用于各种免疫学试验，包括酶联免疫吸附试验(elisa、蛋白质印迹(wb)与免疫荧光(ifa)实验。同时，本发明建立了检测胞内劳森菌的阻断elisa方法，为胞内劳森菌检测提供了新的参考。
12、保藏证明和存活信息的说明
13、保藏菌株：杂交瘤细胞株5f2的分类命名为hybridoma cell line 5f2，保藏编号为cctccno：c2023263，保藏日期为2023年9月15日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。
1.一种胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体的制备，其特征在于：所述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体由杂交瘤细胞株5f2产生，该杂交瘤细胞株5f2的保藏编号为cctccno：c2023263。
2.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述胞内劳森菌外膜蛋白ompa的编码核苷酸序列如seq id no:1所示，胞内劳森菌外膜蛋白ompa的编码的氨基酸序列如seqid no:2所示。
3.胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体，其特征在于：所述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体可用于胞内劳森菌外膜蛋白ompa的免疫学检测。
4.根据权利要求3所述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体，其特征在于：所述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体可用于elisa、wb或ifa实验中胞内劳森菌外膜蛋白ompa的检测。
5.一种抗体制剂，所述抗体制剂包含有权利要求1所述.胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体，或由该抗体制剂包含所述单克隆抗体的核苷酸片段。
6.根据权利要求4所述的抗体制剂，其特征在于：所述抗体制剂用于非诊断目的的有效诊断或检测胞内劳森菌。
7.权利要求1所述胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体在非诊断目的的在阻断elisa检测胞内劳森菌抗体中的应用。
8.权利要求1所述的胞内劳森菌外膜蛋白ompa单克隆抗体在非诊断目的的制备诊断或检测胞内劳森菌试剂盒中的应用。
