本发明属于生物医药，具体涉及靶向巨噬细胞的雾化吸入ps-sr纳米粒及其制备方法和应用。
背景技术：
1、肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤整体中占比约为50％以上，是肿瘤中重要的一类免疫细胞。肿瘤相关巨噬细胞有两种不同功能状态的表型，m1(促炎)和m2(抗炎)表型。m1巨噬细胞能够吞噬肿瘤细胞，实现抑制肿瘤生长以及复发，m2巨噬细胞则恰恰相反，其主要功能是促进肿瘤细胞生长与侵袭。resiquimod(r848)是toll样受体7和8(tlr7/tlr8)的激动剂，是一种免疫响应调节剂，具有tlr7/8激动活性，诱导细胞因子如tnf-α，il-12和no的上调。已报导r848可将促肿瘤型巨噬细胞极化为抗肿瘤型巨噬细胞用于免疫治疗。然而游离的r848给药会引起非特异性的全身性炎症反应，在临床应用过程中受到了很大的限制，因此需要新的策略更加精准地调节r848的活性。
2、cd47与sirpα结合后，向巨噬细胞传递“别吃我”信号，从而抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，导致肿瘤细胞得以逃逸免疫监视。shp099是有口服活性的shp2抑制剂，能够有效地阻断肿瘤细胞和巨噬细胞中cd47-sirpα的下游蛋白shp2，阻断肿瘤细胞在巨噬细胞内的逃逸，使得巨噬细胞对于肿瘤细胞的清除能力增强。
3、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，ps)又称丝氨酸磷脂，二酰甘油酰磷酸丝氨酸，是一类普遍存在的磷脂，通常位于细胞膜的内层，是细胞膜组分之一，与一系列的膜功能有关。当细胞凋亡时，ps外翻表达于细胞膜外。巨噬细胞识别凋亡细胞表达的ps，然后通过efferocytosis作用清除它们。
4、因此，利用巨噬细胞识别并清除表达ps的细胞的特性，研发一种能够有效靶向巨噬细胞，将r848和shp099递送至巨噬细胞内，使r848和shp099发挥作用的同时，减少机体不良反应的纳米制剂是必不可少的。目前的静脉注射给药是抗肿瘤治疗的常见手段，但静脉注射往往给患者带来诸多不便和痛苦，并且通常需要专业人员进行静脉注射操作，导致患者需要频繁前往医院进行治疗，从而影响患者的依从性。因次，探索一种更为便捷、有效且患者易于接受的治疗方法具有重要意义。为改善肿瘤患者的治疗效果和预后效果带来了希望。
技术实现思路
1、针对上述不足，本发明提供了一种靶向巨噬细胞的雾化吸入ps-sr纳米粒及其制备方法和应用。本发明提供的ps-sr纳米粒包括shp099、r848和ps脂质体。本发明提供的ps-sr纳米粒，通过雾化吸入即能靶向巨噬细胞，将r848和shp099递送至巨噬细胞内。r848将m2型巨噬细胞极化为m1型，释放促炎性细胞因子实现抗肿瘤作用；shp099通过抑制巨噬细胞内cd47-sirpα的下游蛋白shp2，阻断肿瘤细胞在巨噬细胞内逃逸，使巨噬细胞的肿瘤细胞清除能力增强。激活的巨噬细胞将抗原呈递t细胞，有效地激活机体的t细胞免疫，进一步对肿瘤部位的癌细胞进行杀伤，实现对转移瘤的高效抑制。
2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
3、一方面，本发明提供了一种雾化吸入的ps-sr纳米粒，所述的ps-sr纳米粒包括shp099、r848和ps脂质体，所述的ps脂质体包括脑ps、dspc和胆固醇；
4、所述的shp099的结构式如式ⅰ所示，所述的r848的结构式如式ⅱ所示；
5、
6、具体地，所述的shp099、r848和ps脂质体的浓度比为2-4：4-6：3-3.5。
7、优选地，所述的shp099、r848和ps脂质体的浓度比为3：5：3.25。
8、具体地，所述的ps脂质体中脑ps、dspc和胆固醇的浓度比为4-6：3-5：0.5-2。
9、优选地，所述的ps脂质体中脑ps、dspc和胆固醇的浓度比为5：4：1。
10、具体地，所述的ps脂质体的粒径≤100nm。
11、具体地，所述的ps脂质体的制备方法为：
12、s1、将脑ps、dspc和胆固醇加入氯仿溶液中，搅拌5min，减压下蒸发，形成ps脂质膜；
13、s2、ps脂质膜水合后纯化，形成ps脂质体。
14、优选地，所述的ps-sr纳米粒的雾化方法为通过雾化器进行雾化。
15、具体地，所述的ps-sr纳米粒的制备方法包括：
16、s1、将含有shp099的有机溶剂与含有r848的有机溶剂混合均匀，得到混合溶液；
17、s2、向混合溶液中加入ps脂质体，减压下蒸发，形成ps-sr脂质膜；
18、s3、ps-sr脂质膜水合后纯化，形成ps-sr纳米粒。
19、具体地，步骤s1中所述含有shp099的有机溶剂与含有r848的有机溶剂的投入体积为1：1-2。
20、优选地，步骤s1中所述含有shp099的有机溶剂与含有r848的有机溶剂的投入体积为1：1.5。
21、具体地，步骤s1中所述含有shp099的有机溶剂中含有5-15mg/ml shp099。
22、优选地，步骤s1中所述含有shp099的有机溶剂中含有10mg/ml shp099。
23、具体地，步骤s2中所述含有r848的有机溶剂中含有5-15mg/ml r848。
24、优选地，步骤s2中所述含有r848的有机溶剂中含有10mg/ml r848。
25、优选地，步骤s1中所述的有机溶剂包括为甲醇。
26、具体地，步骤s1包括将shp099甲醇溶液和r848甲醇溶液混合均匀，加入到含氯仿的圆底烧瓶中，搅拌。
27、优选地，所述的shp099甲醇溶液和r848甲醇溶液的混合溶液与氯仿的体积比为1：8。
28、具体地，步骤s2中所述的ps脂质体与所述的混合溶液的投入体积比为7：20。
29、具体地，步骤s2中所述的减压下蒸发的目的为蒸发有机溶剂。
30、具体地，步骤s3中所述的水合所用的溶液包括但不限于pbs、生理盐水或纯化水。
31、优选地，步骤s3中所述的水合所用的溶液为pbs。
32、具体地，步骤s3中所述的水合包括如下步骤：(1)添加pbs水浴超声水合5分钟；(2)70℃下，20w探头超声再水合2分钟。
33、具体地，步骤s3中所述的纯化包括过滤和透析。
34、优选地，所述的过滤所用滤膜为0.45μm滤膜。
35、优选地，所述的过滤的目的为去除游离脂质聚集体。
36、优选地，所述的透析过程为：将ps-sr封装于分子截留量为500的透析袋中，置于含ddh2o的透析缸中透析4小时。
37、优选地，所述的透析的目的为除去未包载的游离药物。
38、在某些实施例中，可以通过调节shp099、r848、ps脂质体的投入量或pbs的加入量，从而调整ps-sr浓度。
39、又一方面，本发明提供了上述ps-sr纳米粒的制备方法，所述的制备方法包括：
40、s1、将含有shp099的有机溶剂与含有r848的有机溶剂混合均匀，得到混合溶液；
41、s2、向混合溶液中加入ps脂质体，减压下蒸发，形成ps-sr脂质膜；
42、s3、ps-sr脂质膜水合后纯化，形成ps-sr纳米粒。
43、具体地，步骤s1中所述含有shp099的有机溶剂与含有r848的有机溶剂的投入体积为1：1-2。
44、优选地，步骤s1中所述含有shp099的有机溶剂与含有r848的有机溶剂的投入体积为1：1.5。
45、具体地，步骤s1中所述含有shp099的有机溶剂中含有5-15mg/ml shp099。
46、优选地，步骤s1中所述含有shp099的有机溶剂中含有10mg/ml shp099。
47、具体地，步骤s2中所述含有r848的有机溶剂中含有5-15mg/ml r848。
48、优选地，步骤s2中所述含有r848的有机溶剂中含有10mg/ml r848。
49、优选地，步骤s1中所述的有机溶剂包括为甲醇。
50、具体地，步骤s1包括将shp099甲醇溶液和r848甲醇溶液混合均匀，加入到含氯仿的圆底烧瓶中，搅拌。
51、优选地，所述的shp099甲醇溶液和r848甲醇溶液的混合溶液与氯仿的体积比为1：8。
52、具体地，步骤s2中所述的ps脂质体与所述的混合溶液的投入体积比为7：20。
53、具体地，步骤s2中所述的减压下蒸发的目的为蒸发有机溶剂。
54、具体地，步骤s3中所述的水合所用的溶液包括但不限于pbs、生理盐水或纯化水。
55、优选地，步骤s3中所述的水合所用的溶液为pbs。
56、具体地，步骤s3中所述的水合包括如下步骤：(1)添加pbs水浴超声水合5分钟；(2)70℃下，20w探头超声再水合2分钟。
57、具体地，步骤s3中所述的纯化包括过滤和透析。
58、优选地，所述的过滤所用滤膜为0.45μm滤膜。
59、优选地，所述的过滤的目的为去除游离脂质聚集体。
60、优选地，所述的透析过程为：将ps-sr封装于分子截留量为500的透析袋中，置于含ddh2o的透析缸中透析4小时。
61、优选地，所述的透析的目的为除去未包载的游离药物。
62、在某些实施例中，可以通过调节shp099、r848、ps脂质体的投入量或pbs的加入量，从而调整ps-sr浓度。
63、又一方面，本发明提供了上述ps-sr纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。
64、具体地，所述的药物的剂型包括溶液剂、混悬剂或气雾剂。
65、具体地，所述的ps-sr纳米粒靶向巨噬细胞，将r848和shp099递送至巨噬细胞内，实现抗肿瘤作用。
66、具体地，所述的肿瘤包括转移瘤。
67、优选地，所述的肿瘤包括肺癌转移瘤、乳腺癌转移瘤、结直肠癌转移瘤、胃癌转移瘤、肝癌转移瘤、胰腺癌转移瘤或前列腺癌转移瘤。
68、进一步优选地，所述的肿瘤为乳腺癌肺转移瘤。
69、又一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述的药物组合物中含有上述ps-sr纳米粒。
70、本发明的有益效果为：
71、本发明提供的ps-sr纳米粒，通过雾化吸入即能靶向巨噬细胞，将r848和shp099递送至巨噬细胞内。r848将m2型巨噬细胞极化为m1型，释放促炎性细胞因子实现抗肿瘤作用；shp099通过抑制巨噬细胞内cd47-sirpα的下游蛋白shp2，阻断肿瘤细胞在巨噬细胞内逃逸，使巨噬细胞的肿瘤细胞清除能力增强。激活的巨噬细胞将抗原呈递t细胞，有效地激活机体的t细胞免疫，进一步对肿瘤部位的癌细胞进行杀伤，实现对转移瘤的高效抑制。
1.一种雾化吸入的ps-sr纳米粒，其特征在于，所述的ps-sr纳米粒包括shp099、r848和ps脂质体，所述的ps脂质体包括脑ps、dspc和胆固醇；
2.根据权利要求1所述的ps-sr纳米粒，其特征在于，所述的shp099、r848和ps脂质体的浓度比为2-4：4-6：3-3.5。
3.根据权利要求1所述的ps-sr纳米粒，其特征在于，所述的ps脂质体中脑ps、dspc和胆固醇的浓度比为4-6：3-5：0.5-2。
4.根据权利要求1所述的ps-sr纳米粒，其特征在于，所述的ps脂质体的制备方法为：
5.权利要求1-4任一项所述的ps-sr纳米粒的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：
6.权利要求1-4任一项所述的ps-sr纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括溶液剂、混悬剂或气雾剂。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的ps-sr纳米粒靶向巨噬细胞，将r848和shp099递送至巨噬细胞内，实现抗肿瘤作用。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤包括肺癌转移瘤、乳腺癌转移瘤、结直肠癌转移瘤、胃癌转移瘤、肝癌转移瘤、胰腺癌转移瘤或前列腺癌转移瘤。
10.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中含有权利要求1-4任一项所述的ps-sr纳米粒。
