本发明涉及药物分析，特别涉及一种微球制剂中司盘80含量的检测方法。
背景技术：
1、司盘80又名失水山梨醇单油酸酯，属于非离子型表面活性剂，hlb值4.3，具有乳化、分散、润湿等性能，乳化效力很高，可与其它乳化剂复配使用，是一种很好的油包水型(w/o)乳化剂，常用做增溶剂、乳化剂、稳定剂、分散剂等。
2、司盘80作为常见的油包水(o/w)型药用辅料，常用做注射液及口服液的增溶剂或乳化剂、胶囊剂用分散剂、软膏剂用乳化剂和基质、栓剂用基质等。在各类缓控释制剂及靶向制剂中，如微球、纳米粒、脂质体以及非表面活性剂囊泡等，司盘80常作为工艺助剂，其在工艺过程中直接影响高端复杂制剂的尺寸大小、表面形态、包封率、稳定性，进而影响药物的释放行为、人体吸收程度以及载体材料的安全性。工艺中加入司盘80很难完全去除，为保障制剂的质量，有必要对司盘80的残留量进行控制，因此需要进行更加高效的分离检测手段辅助研究，有利于对复杂制剂中的痕量司盘80含量进行精准控制。
3、由于司盘80是以山梨醇和油酸为原料，通过山梨醇的失水醚化和与油酸酯化反应制得。山梨醇是一种多元醇，其脱水结构复杂，形成的失水产物均可与油酸发生酯化反应，且存在不同的酯化反应点，可生成单油酸酯、双油酸酯和三油酸酯等，最终得到的司盘80实际上是酯类化合物组成的一种混合物。
4、在常规气相色谱和液相色谱中检测均会出现多个峰，且制剂的其他多组分易对其检测产生干扰。另外，司盘80沸点为463.43℃，难以气化，采用气相色谱检测灵敏度较差，如采用高效液相色谱法，由于司盘80对紫外吸收较弱，再采用紫外检测器检测响应较弱，无法进行检测；而采用通用型示差检测器进行检测，其多组分导致灵敏度及专属性差。目前虽有采用液质联用技术可提高检测灵敏度及专属性，实现对司盘80含量的检测，但其分析设备要求较高，不一定适用于生产环境。因此，为便于产业化检测应用需求，需要一种简单快速的司盘80检测分析方法。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种微球制剂中司盘80含量的检测方法，旨在解决现有司盘80含量的检测方法专属性差、灵敏度低以及检测准确度低的技术问题。
2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
3、一种微球制剂中司盘80含量的检测方法，包括以下步骤：
4、(1)前处理：
5、将待测制剂依次加入二氯甲烷、正己烷进行溶解分散，离心后取上清液，获得浓度为20±2mg/ml待测制剂溶液；
6、将司盘80标准品依次加入二氯甲烷、正己烷进行溶解分散，获得司盘80标准曲线溶液；将空白基质依次加入二氯甲烷、正己烷进行溶解分散，离心后取上清液，获得空白基质溶液；
7、(2)高效液相色谱检测：将待测制剂溶液、司盘80标准曲线溶液、空白基质溶液进行高效液相色谱检测，分别获得待测制剂色谱图、司盘80标准曲线色谱图和空白基质色谱图；
8、(3)由所述司盘80标准曲线色谱图和所述空白基质色谱图进行比对确定司盘80代表峰：以司盘80标准曲线色谱图中不同于所述空白基质色谱图的最强色谱峰作为司盘80代表峰；
9、(4)由所述司盘80标准曲线溶液浓度的对数值和所述司盘80标准曲线色谱图中司盘80代表峰峰面积的对数值建立线性回归方程；
10、(5)根据所述线性回归方程及所述待测制剂色谱图中司盘80代表峰峰面积的对数值，计算待测制剂中司盘80含量。由所述待测制剂色谱图和所述空白基质色谱图进行比对确定司盘80代表峰：以待测制剂色谱图中不同于所述空白基质色谱图的最强色谱峰作为司盘80代表峰。
11、步骤(1)中，二氯甲烷：正己烷的体积为比1：9～1.5。本发明研究团队发现，不是本发明溶剂组合的比例及添加顺序，均不能实现本发明的理想检测。作为优选，二氯甲烷：正己烷的体积比1：4。
12、步骤(2)中，所述高效液相色谱检测参数设置为：
13、进样量为5ul～100ul；
14、以正己烷和异丙醇为流动相进行梯度洗脱；
15、流动相的流速为0.8～1.2ml/min；
16、色谱柱柱温为25～35℃，色谱柱包括alltima silica柱；
17、蒸发光散射检测器的载气为氮气，压力为40psi，增益值为1～100；漂移管温度为40～80℃，喷雾器模式为制冷。
18、作为优选，进样量为50ul，流动相的流速为1ml/min，增益值10，色谱柱柱温为30℃，漂移管温度为60℃。
19、流动相正己烷和异丙醇的体积比为100～50：0～50，起始梯度洗脱为正己烷：异丙醇为100：0。
20、以正己烷和异丙醇为流动相进行梯度洗脱的方案选择以下之一：
21、方案一：
22、0分钟，正己烷100％，异丙醇0％；
23、10分钟，正己烷90％，异丙醇10％；
24、11分钟，正己烷50％，异丙醇50％；
25、18分钟，正己烷50％，异丙醇50％；
26、方案二：
27、0分钟，正己烷100％，异丙醇0％；
28、5分钟，正己烷90％，异丙醇10％；
29、6分钟，正己烷50％，异丙醇50％；
30、13分钟，正己烷50％，异丙醇50％；
31、方案三：
32、0分钟，正己烷100％，异丙醇0％；
33、20分钟，正己烷90％，异丙醇10％；
34、21分钟，正己烷50％，异丙醇50％；
35、28分钟，正己烷50％，异丙醇50％。
36、步骤(3)中，所述最强色谱峰为峰面积最大的峰。
37、步骤(4)中，所述司盘80标准曲线溶液的浓度为0.26ug/ml～104ug/ml；浓度梯度至少为5个。作为优选，所述司盘80标准曲线溶液的浓度为5.2ug/ml～52ug/ml。
38、所述待测制剂为注射用醋酸奥曲肽微球。
39、步骤(1)中，所述空白基质中除司盘80外，其他各组分与待测制剂中处方量一致。空白基质溶液中，含有相同浓度的待测制剂中除司盘80外的其他组分。
40、在同一批次或者合成工艺相同的情况下，司盘80中各组分及其比例是固定的，当检测方法相同时，色谱图中所选代表峰对应的组分也是一致的，能够实现对司盘80准确定量。
41、本发明的有益效果是：
42、(1)本发明通过依次加入二氯甲烷与正己烷结合其特定体积比进行前处理，能够有效排除制剂中其他多组分的干扰，与后续检测步骤的特定流动相及梯度设置相协调关联，无需特殊检测设备，即可实现制剂中的检测准确性。
43、(2)本发明通过对司盘80与制剂其他各组分的物理性质分析，结合物质的溶解性和极性特点，通过前处理步骤结合利用色谱柱固定相及流动相对物质极性的选择，对适用的溶剂及梯度筛选进行了大量试验，从而实现多组分的司盘80能够以一个代表峰的形式检出，显著提高制剂中的检测灵敏度。
44、(3)本发明的前处理步骤结合起始梯度洗脱，有效保障司盘80代表峰出峰的高灵敏度。
45、(4)本发明解决了制剂中其他多组分干扰的问题，有利于延长检测中色谱柱的使用寿命，又增强制剂中多组分司盘80的检测专属性和准确性，相比较于现有技术，本发明操作简便，检测快速，适用于试验及产业化各种场景的制剂检测应用。
1.一种微球制剂中司盘80含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，二氯甲烷：正己烷的体积为比1：9～1.5。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述高效液相色谱检测参数设置为：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，流动相正己烷和异丙醇的体积比为100～50：0～50，起始梯度洗脱为正己烷：异丙醇为100：0。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，以正己烷和异丙醇为流动相进行梯度洗脱的方案选择以下之一：
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述最强色谱峰为峰面积最大的峰。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述司盘80标准曲线溶液的浓度为0.26ug/ml～104ug/ml；浓度梯度至少为5个。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述司盘80标准曲线溶液的浓度为5.2ug/ml～52ug/ml。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述待测制剂为注射用醋酸奥曲肽微球。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述空白基质中除司盘80外，其他各组分与待测制剂中处方量一致。
