本发明涉及生物医药，具体涉及一种红细胞载药微颗粒及其应用。
背景技术：
1、肿瘤严重威胁人类健康。传统的肿瘤治疗方法，例如化疗、放疗副作用强、治疗后易复发。新兴的肿瘤免疫治疗为肿瘤治疗提供了新的途径，然而肿瘤免疫治疗对于多数肿瘤的治疗效果并不能让人满意。如何将肿瘤免疫治疗方法与传统的肿瘤治疗方法结合起来，提高疗效，是目前亟待解决的问题。
2、近年来，细胞外囊泡作为细胞之间物质、能量和信息的交换载体，成为目前各项研究的热点。微颗粒(microparticle，mp)属于细胞外囊泡的一种，是细胞在接收到各种刺激或凋亡信号时，细胞质膜包裹了细胞的一部分蛋白质、脂质、核酸等成分，形成的囊泡状结构，直径在100nm～1000nm之间。
3、mp可以作为化疗药物的载体，将化疗药物递送到肿瘤部位，高效杀伤肿瘤细胞，同时降低化疗药物的副作用。用于制备载药微颗粒的细胞有肿瘤细胞、间充质干细胞、巨噬细胞、树突状细胞等多种细胞类型，这些细胞普遍存在不易获得，体内数目少、体外扩大培养周期长等缺点。另外，mp携带来源于母细胞的遗传物质dna、rna等核酸片段，载药微颗粒将核酸片段重新引入人体可能会导致受体细胞发生基因重组、基因突变，甚至引发肿瘤，这种长期风险隐患是目前常见载药微颗粒无法回避的问题。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本发明提供了一种红细胞载药微颗粒，该红细胞载药微颗粒不含核酸，避免了其它类型细胞制备的微颗粒携带母细胞核酸而在肿瘤治疗的过程中向受体细胞递送核酸带来的潜在危害。
2、本发明第一方面，提供一种红细胞载药微颗粒，是按照以下步骤进行制备：
3、利用电穿孔法处理红细胞悬液，加入药物，得到混合物；
4、紫外线照射混合物，照射完成后培养以使红细胞释放载药微颗粒，差速离心，得到红细胞载药微颗粒；
5、其中，所述电穿孔法处理是使用方波在电压200v～300v下间隔电击，所述紫外线照射是在强度280j/m2～330j/m2下照射1h～1.5h；
6、其中，红细胞悬液源自于动物或人的离体外周血。
7、作为本发明的一个优选实施例，紫外线照射强度为300j/m2，照射时间为1.5h。
8、作为本发明的一个优选实施例，利用电穿孔法处理红细胞悬液的参数设置为：方波，电压200v～300v，时间5ms～10ms，电击次数5次～8次，间隔时间7s～10s。
9、作为本发明的一个优选实施例，所述培养是在二氧化碳培养箱中培养18h～24h。
10、作为本发明的一个优选实施例，所述药物为阿霉素(dox)或甲氨蝶呤(mtx)。
11、进一步优选地，红细胞悬液的浓度为3×108个/ml～5×108个/ml，质量浓度为5mg/ml～10mg/ml的dox或者40mg/ml～50mg/ml的mtx与所述红细胞悬液的体积比均为4～5∶3.5～4。
12、作为本发明的一个优选实施例，在加入药物前使用rpmi 1640培养液稀释电穿孔处理过的红细胞悬液，所述rpmi 1640培养液中含有10％的胎牛血清，所述rpmi 1640培养液与红细胞悬液的体积比为300～350∶3.5～4。
13、作为本发明的一个优选实施例，所述差速离心是按照以下步骤进行：
14、培养液经1800×g～2000×g、4℃离心10min～15min，除去红细胞；取上清，13000×g～14000×g、4℃离心2min～5min，除去细胞碎片；取上清，13000×g～14000×g、4℃离心1h～1.5h，所得沉淀即为红细胞载药微颗粒。
15、本发明第二方面，提供一种组合物，其所述的红细胞载药微颗粒。该组合物中还可以包括其他辅料或载体以将组合物制备成适宜临床需求的药物制剂。具体辅料或载体的种类及用量可根据所要制备的制剂进行选择，制剂的制备按照药学上常规的方法进行即可。
16、本发明第三方面，提供一种所述的红细胞载药微颗粒或所述的组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
17、本发明第四方面，提供一种所述的红细胞载药微颗粒或所述的组合物在制备激发肿瘤患者机体免疫反应的药物中的应用。
18、与现有载药微颗粒及制备方法相比，本发明的有益效果在于：
19、1、由红细胞制备的载药微颗粒不含核酸，避免了其它类型细胞制备的载药微颗粒携带母细胞核酸而在肿瘤治疗的过程中，向受体细胞递送核酸带来的潜在危害。
20、2、红细胞载药微颗粒不仅可以直接杀伤肿瘤细胞，而且可以调动机体免疫细胞参与抗肿瘤免疫发应，发挥化疗和免疫治疗的双重作用，提高疗效。
21、3、本发明精简了常规电穿孔方法制备载药微颗粒的步骤，如省去了药物和红细胞共孵育的步骤；同时优化了制备方法，提高了制备效率。
22、4、本发明提供的红细胞载药微颗粒，所用红细胞取材方便，体内数量多。这使得红细胞载药微颗粒的原材料极易获得，无需体外扩大培养，节约了时间，同时降低成本。
1.一种红细胞载药微颗粒，其特征在于，是按照以下步骤进行制备：
2.根据权利要求1所述的红细胞载药微颗粒，其特征在于，紫外线照射强度为300j/m2，照射时间为1.5h。
3.根据权利要求1所述的红细胞载药微颗粒，其特征在于，利用电穿孔法处理红细胞悬液的参数设置为：方波，电压200v～300v，时间5ms～10ms，电击次数5次～8次，间隔时间7s～10s。
4.根据权利要求1所述的红细胞载药微颗粒，其特征在于，所述培养是在二氧化碳培养箱中培养18h～24h。
5.根据权利要求1所述的红细胞载药微颗粒，其特征在于，所述药物为阿霉素或甲氨蝶呤。
6.根据权利要求5所述的红细胞载药微颗粒，其特征在于，红细胞悬液的浓度为3×108个/ml～5×108个/ml，质量浓度为5mg/ml～10mg/ml的阿霉素或者40mg/ml～50mg/ml的甲氨蝶呤与所述红细胞悬液的体积比均为4～5∶3.5～4。
7.根据权利要求1所述的红细胞载药微颗粒，其特征在于，所述差速离心是按照以下步骤进行：
8.一种组合物，其特征在于，其包括权利要求1～7任一项所述的红细胞载药微颗粒。
9.一种权利要求1～7任一项所述的红细胞载药微颗粒或权利要求8所述的组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.一种权利要求1～7任一项所述的红细胞载药微颗粒或权利要求8所述的组合物在制备激发肿瘤患者机体免疫反应的药物中的应用。
