本发明属于纳米生物，具体涉及铁皮石斛外泌体及其制备和在治疗炎症药物中的应用。
背景技术：
1、植物外泌体与植物提取物存在明显差异。植物提取物只要包含某一单一类别成分，如石斛提取物主要成分为石斛多糖；而植物外泌体是直径为20-500nm的具有一定刚性的微囊结构，主要包含脂质、蛋白质和核酸等化学成分，在细胞间物质运送、信息传递和调节生理过程等方面发挥着重要作用。现有植物外泌体的制备方法主要通过植物组织的机械破碎收集汁液，并通过沉淀法或超速离心法提取外泌体。然而，机械破壁法虽然操作简单，但容易破坏外泌体的结构和活性，而低浓度和低活性的外泌体产品将限制其在安全性要求比较高的化妆品、药物载体、疾病治疗等领域的应用。
2、炎症反应过程是机体为清除致炎因子和修复组织损伤的保护性生理反应，而炎症反应失衡与包括自身免疫性疾病、肿瘤、组织修复障碍等多种疾病密切相关。目前，缺乏安全有效的抗炎治疗方法，亟需研发安全、高效的抗炎策略。铁皮石斛(dendrobiumofficinale kimura et migo)为兰科石斛属多年生附生草本植物，研究表明铁皮石斛提取物中的多糖可以增强内皮细胞的抵抗力，减轻细胞氧化应激和炎症反应，从而保护内皮细胞免受损害。铁皮石斛外泌体继承了铁皮石斛提取物的抗炎活性，并具有更强的细胞亲和力和靶向性，有望成为一种新型、高效的抗炎治疗策略。
技术实现思路
1、本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供铁皮石斛外泌体及其制备和在治疗炎症药物中的应用。
2、为实现上述目的，本发明提供了一种铁皮石斛外泌体的制备方法，包括以下步骤：
3、s1、将铁皮石斛加入酶解剂酶解，获得铁皮石斛汁液；
4、s2、离心分离所述石斛汁液，收集上清液；
5、s3、超高速离心分离所述上清液，收集沉淀物；
6、s4、蔗糖梯度离心所述沉淀物，取蔗糖层纯化处理后，得到铁皮石斛外泌体。
7、本发明的铁皮石斛外泌体的制备方法，通过酶催化降解植物细胞壁，分离释放出外泌体，再通过蔗糖梯度离心结合差速离心的方法纯化，不仅可以保留外泌体的完整结构和生物活性，还可以提高外泌体的产量和生产效率，制备出活性更高的石斛来源外泌体。
8、在某些具体的实施方式中，所述铁皮石斛选自丹霞铁皮石斛。
9、在某些更具体的实施方式中，所述酶解剂包括果胶蛋白酶、纤维素酶；所述果胶蛋白酶为1-5mg/g铁皮石斛；所述纤维素酶为1-5mg/g铁皮石斛。
10、在某些更具体的实施方式中，所述酶解剂的酶解时间为12-24h，酶解温度为20-40℃。
11、在某些更具体的实施方式中，步骤s2所述离心的方法为：将石斛汁液在3000-5000g的条件下离心10-30min，获得第一上清液，以确保去除较大颗粒杂质而保留外泌体；将所述第一上清液在8000-11000g的条件下离心1-2h，获得所述上清液，以确保最大程度收集外泌体。
12、在某些更具体的实施方式中，步骤s3所述的超高速离心的转速为130000-150000g,时间为1-3h,以有效分离外泌体和其他细胞器件。
13、在某些更具体的实施方式中，步骤s4所述的蔗糖梯度离心的方法为：先将蔗糖浓度为15％，30％、45％和60％(g/v)的蔗糖溶液以及所述沉淀物添加至超速离心管中，在130000-150000g的条件下超速离心0.5-2h，取浓度为45-60％之间的蔗糖层。
14、在某些更具体的实施方式中，步骤s4所述的纯化处理的方法为：用超滤管把蔗糖去除换成磷酸盐缓冲液(pbs)，加入5倍体积的pbs，以3000-5000g转速离心0.5-1h，以去除残留的杂质，提高外泌体纯度。
15、本发明还提供了一种铁皮石斛外泌体，该铁皮石斛外泌体为采用本发明提供的制备方法制备得到的铁皮石斛外泌体。
16、本发明的铁皮石斛外泌体，具有较好的抗炎、抗氧化效果，具有以下有益效果：1)清除dpph自由基；2)抑制ros生成；3)抑制炎症因子tnf-α、il-6、il-1β和inos mrna的表达。
17、本发明还提供了一种铁皮石斛外泌体在制备治疗银屑病皮炎药物中的应用。
18、为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本发明。
1.一种铁皮石斛外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述铁皮石斛选自丹霞铁皮石斛。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶解剂包括果胶蛋白酶、纤维素酶；所述果胶蛋白酶为1-5mg/g铁皮石斛；所述纤维素酶为1-5mg/g铁皮石斛。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述酶解剂的酶解时间为12-24h，酶解温度为20-40℃。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s2所述离心的方法为：将所述石斛汁液在3000-5000g的条件下离心10-30min，获得第一上清液；将所述第一上清液在8000-11000g的条件下离心1-2h，获得所述上清液。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s3所述超高速离心的转速为130000-150000g,时间为1-3h。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s4所述蔗糖梯度离心的方法为：先将蔗糖浓度为15％，30％、45％和60％(g/v)的蔗糖溶液以及所述沉淀物添加至超速离心管中，在130000-150000g的条件下超速离心0.5-2h，取浓度为45-60％之间的蔗糖层。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s4所述纯化处理的方法为：用超滤管把蔗糖去除换成磷酸盐缓冲液(pbs)，加入5倍体积的pbs，以3000-5000g转速离心0.5-1h。
9.一种铁皮石斛外泌体，由权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到。
10.一种如权利要求9所述的铁皮石斛外泌体在制备治疗银屑病皮炎药物中的应用。
