本发明属于细胞生物学领域，尤其涉及一种活化树突状细胞的分子、方法及其应用。
背景技术：
1、树突状细胞(dendritic cell，dc)是主要的抗原提呈细胞(antigenpresentingcell，apc)，其能够直接激活初始t细胞诱导适应性免疫应答，是先天性免疫和适应性免疫反应的重要介质，在诱导免疫耐受维持机体稳态、抗肿瘤免疫反应方面均发挥着重要作用。dc前体细胞由骨髓进入外周血，再分布到机体各组织中成为未成熟dc(immature dc，idc)。抗原或危险信号通过受体或非受体介导机制激活idc，idc活化后可募集巨噬细胞、中性粒细胞、自然杀伤细胞和非成熟淋巴细胞至炎症部位，然后idc通过淋巴管迁移至淋巴器官寻找抗原特异性t细胞，通过不同的特异性信号转导过程转变成为成熟dc(mature dc，mdc)。
2、细胞因子在免疫细胞间发挥信使作用，对协调免疫反应非常关键。gm-csf具有多种免疫调节活性，包括促进粒细胞、巨噬细胞、嗜酸性细胞的分化，激活并募集树突状细胞(dc)。gm-csf对单核细胞/巨噬细胞产生tnf-α有刺激作用。tnf-α是一种具有多种生物活性的细胞因子，在抗肿瘤免疫中发挥着重要作用，tnf-α通常作为刺激分子刺激dc的成熟。tnf-α与gm-csf可协同发挥作用促进dc的分化成熟，活化后的dc活化自体t细胞进一步的达到抗肿瘤的效果。然而，tnf-α与gm-csf的半寿期相差甚远，往往使其协同作用效应难以预期。因此，急需寻找新的活化树突状细胞的方法来克服细胞因子半寿期差异大对活化效果的影响。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种活化树突状细胞的分子、方法及其应用，以解决细胞因子半寿期差异大影响树突状细胞活化效果的问题。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种活化树突状细胞的分子，所述分子为tnf-α-gm-csf融合蛋白；
4、所述tnf-α-gm-csf融合蛋白的构建方法为：利用pcr重叠延伸术将tnf-α基因和gm-csf基因连接得到tnf-α-gm-csf融合基因，将tnf-α-gm-csf融合基因克隆至pbv220载体上，转化宿主菌表达得到tnf-α-gm-csf融合蛋白。
5、本发明还提供了一种活化树突状细胞的方法，用所述的活化树突状细胞的分子刺激未成熟树突状细胞。
6、优选的，所述刺激的时间为24～48h。
7、优选的，所述未成熟的树突状细胞为外周血单个核细胞。
8、优选的，所述外周血单个核细胞用含有gm-csf和il-4的无血清培养液培养。
9、优选的，所述无血清培养液中gm-csf的含量为10～20ng/ml，il-4的含量为5～15ng/ml。
10、优选的，用无血清培养液培养后使用多肽抗原、肿瘤细胞裂解物、携带抗原编码序列的重组载体或编码抗原的rna中的一种或多种培育所述未成熟的树突状细胞。
11、本发明还提供了所述的方法活化得到的树突状细胞在制备dc疫苗或抗肿瘤的药物中的应用。
12、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
13、本发明的tnf-α-gm-csf融合蛋白克服了tnf-α和gm-csf这2种细胞因子由于半寿期差异大而影响活化效果的缺陷，并带来新的效应，可促进dc细胞的活化和增殖，能促进dc细胞的吞噬活性，使其高水平表达cd80、cd86及cd83表面分子标记，同时能够高水平分泌的il-12，使树突状细胞充分成熟并高效活化自体t细胞，从而提高肿瘤治疗效果。
1.一种活化树突状细胞的分子，其特征在于，所述分子为tnf-α-gm-csf融合蛋白；
2.一种活化树突状细胞的方法，其特征在于，用权利要求1所述的活化树突状细胞的分子刺激未成熟树突状细胞。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述刺激的时间为24～48h。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述未成熟的树突状细胞为外周血单个核细胞。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述外周血单个核细胞用含有gm-csf和il-4的无血清培养液培养。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述无血清培养液中gm-csf的含量为10～20ng/ml，il-4的含量为5～15ng/ml。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，用无血清培养液培养后使用多肽抗原、肿瘤细胞裂解物、携带抗原编码序列的重组载体或编码抗原的rna中的一种或多种培育所述未成熟的树突状细胞。
8.权利要求3～7任意一项所述的方法活化得到的树突状细胞在制备dc疫苗或抗肿瘤的药物中的应用。
