本发明涉及单克隆抗体制备，特别涉及抗度普利尤单抗的高亲和力兔单克隆抗体及其应用。
背景技术：
1、白细胞介素-4受体（il-4r，也称为cd124；il4rα）是一种i型跨膜蛋白，属于白细胞介素家族成员之一。人源il4rα全长825个氨基酸，包含信号肽、胞外区、跨膜区和胞内区。il4rα可以通过结合il-4和il-13来调节ige的产生及趋化因子和粘液的产生，il4rα在过敏反应和哮喘的发生过程中扮演着关键角色。
2、度普利尤单抗（ dupilumab）是一种全人源il-4rα的单克隆抗体，由赛诺菲（sanofi）和再生元（regeneron）公司联合开发，其可以通过特异性结合il-4rα亚基，竞争性结合il-4和il-13/il-13rα1复合物，阻断il-4和il-13诱导的il-4rα介导的信号转导，阻断2型炎症通路，降低2型炎症的病理性反应，从而抑制2型炎症反应。
3、
4、基于上述研究成果，度普利尤单抗（ dupilumab）作为儿童和成人中重度特应性皮炎、中重度哮喘患者及慢性鼻炎治疗的全人源化药物。在临床治疗过程中，抗体药物的血药浓度监测，对于药物的疗效数据及安全性数据非常重要。因此，开发一种能够高灵敏度地检测度普利尤单抗（ dupilumab）的血药浓度的检测技术，具有非常重要的意义。
技术实现思路
1、本发明提供了抗度普利尤单抗的高亲和力兔单克隆抗体及其应用，是以度普利尤单抗（dupilumab）作为免疫原，利用基于单个b淋巴细胞筛选和培养的单克隆抗体开发技术制备获得，本单克隆抗体对度普利尤单抗（ dupilumab）的检测灵敏度高。具体通过以下技术实现。
2、一种抗度普利尤单抗的高亲和力兔单克隆抗体，所述高亲和力兔单克隆抗体为第一抗体或第二抗体；
3、所述第一抗体的重链上的互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示；
4、所述第一抗体的重链上的互补决定区cdr2的氨基酸序列如seq id no.2所示；
5、所述第一抗体的重链上的互补决定区cdr3的氨基酸序列如seq id no.3所示；
6、所述第一抗体的轻链上的互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.4所示；
7、所述第一抗体的轻链上的互补决定区cdr2的氨基酸序列为gas；
8、所述第一抗体的轻链上的互补决定区cdr3的氨基酸序列如seq id no.5所示；
9、所述第二抗体的重链上的互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.10所示；
10、所述第二抗体的重链上的互补决定区cdr2的氨基酸序列如seq id no.11所示；
11、所述第二抗体的重链上的互补决定区cdr3的氨基酸序列如seq id no.12所示；
12、所述第二抗体的轻链上的互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.13所示；
13、所述第二抗体的轻链上的互补决定区cdr2的氨基酸序列为aas；
14、所述第二抗体的轻链上的互补决定区cdr3的氨基酸序列如seq id no.14所示。
15、本发明用来制备上述抗度普利尤单抗（ dupilumab）兔单克隆抗体的免疫原，为表达制备的靶向白细胞介素-4受体亚基α（il-4r-α）的全人单克隆抗体（igg4型）；制备方法为基于单个b淋巴细胞筛选和培养的单克隆抗体开发技术。
16、进一步地，所述第一抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.6所示；第一抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示。
17、更进一步地，所述第一抗体的重链的氨基酸序列如seq id no.8所示；第一抗体的轻链的氨基酸序列如seq id no.9所示。
18、进一步地，所述第二抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.15所示；第二抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.16所示。
19、更进一步地，所述第二抗体的重链的氨基酸序列如seq id no.17所示；第二抗体的轻链的氨基酸序列如seq id no.18所示。
20、本发明还提供了一种物质，所述物质包括以下任意1个方面：
21、（1）一种核酸分子或包含所述核酸分子的载体，所述核酸编码上述高亲和力兔单克隆抗体；
22、（2）一种改造细胞或重组菌株，所述改造细胞或重组菌株用于表达上述高亲和力兔单克隆抗体；
23、（3）一种抗体衍生物，所述抗体衍生物包括上述高亲和力兔单克隆抗体；
24、（4）一种药物，所述药物组合物包括治疗有效量的上述高亲和力兔单克隆抗体，或者所述抗体衍生物；
25、（5）一种检测产品，所述产品包括上述高亲和力兔单克隆抗体，或者所述核酸分子，或者所述载体，或者所述高亲和力兔单克隆抗体的衍生物。
26、进一步地，所述检测产品为检测度普利尤单抗的竞争elisa检测试剂盒。
27、更进一步地，检测度普利尤单抗的所述竞争elisa检测试剂盒中，所述第一抗体为竞争性抗体，所述第二抗体为非竞争性抗体。
28、本发明还提供了上述抗度普利尤单抗的高亲和力兔单克隆抗体的应用用途，用于不以疾病诊断和治疗为目的地检测度普利尤单抗；或者，用于制备检测度普利尤单抗的产品；或者，用于制备调节度普利尤单抗活性的产品。
29、进一步度所述产品为检测试剂、检测试剂盒、检测试纸条、检测探针或检测芯片。
30、本发明提供的检测度普利尤单抗（ dupilumab）的产品和方法，均采用了本发明提供的抗度普利尤单抗（第一抗体和/或第二抗体）。本发明声称的“不以疾病诊断和治疗为目的”是指除了临床用于诊断或检测度普利尤单抗（ dupilumab）治疗效果以外的其他应用用途和方法，例如在实验室中进行科学研究等。当然，本发明提供的高亲和力兔单克隆抗体除了可以检测度普利尤单抗（ dupilumab）的情况以外，实际上还能在临床上用于定性定量检测度普利尤单抗（ dupilumab）的场景。
31、与现有技术相比，本发明的有益之处在于：
32、1、本发明提供的抗度普利尤单抗（ dupilumab）高亲和力兔单克隆抗体，利用biacore仪器测定其第一抗体和第二抗体的亲和力，第一抗体和度普利尤单抗（ dupilumab）结合的亲和常数为7.36×10-11m，第二抗体和度普利尤单抗（ dupilumab）结合的亲和常数为9.45×10-11m；可以利用第一抗体和/或第二抗体进行度普利尤单抗（ dupilumab）的检测，或制备检测度普利尤单抗（ dupilumab）的产品。
33、2、本发明还开发了一种高灵敏度和高特异性针对度普利尤单抗（ dupilumab）的竞争法酶联免疫检测方法，在临床诊断和科研应用上具有重要的意义。本发明所提供的度普利尤单抗（ dupilumab）竞争法酶联免疫检测方法，竞争性抗体为本发明中的第一抗体，非竞争性抗体为第二抗体。当标准样品为度普利尤单抗（ dupilumab）时，第一抗体的ic50为64.59ng/ml，第二抗体显示无竞争性，所建立的方法可以用于诊断度普利尤单抗（ dupilumab）在注射患者体内总药浓度及游离药物浓度；与人igg4和人总igg均无交叉反应。
1.一种抗度普利尤单抗的高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于，所述高亲和力兔单克隆抗体为第一抗体或第二抗体；
2.根据权利要求1所述的抗度普利尤单抗的高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于，所述第一抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.6所示；第一抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示；
3.根据权利要求2所述的抗度普利尤单抗的高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于，所述第一抗体的重链的氨基酸序列如seq id no.8所示；第一抗体的轻链的氨基酸序列如seqid no.9所示；
4.一种物质，其特征在于，所述物质包括以下任意1个方面：
5.根据权利要求4所述的物质，其特征在于，所述检测产品为检测度普利尤单抗的竞争elisa检测试剂盒。
6.根据权利要求5所述的物质，其特征在于，检测度普利尤单抗的所述竞争elisa检测试剂盒中，所述第一抗体为竞争性抗体，所述第二抗体为非竞争性抗体。
7.权利要求1-3任一项所述的抗度普利尤单抗的高亲和力兔单克隆抗体的应用，其特征在于，用于不以疾病诊断和治疗为目的地检测度普利尤单抗；或者，用于制备检测度普利尤单抗的产品；或者，用于制备调节度普利尤单抗活性的产品。
8.根据权利要求7所述的度普利尤单抗的高亲和力兔单克隆抗体的应用，其特征在于，所述产品为检测试剂、检测试剂盒、检测试纸条、检测探针或检测芯片。
