本发明涉及蓝莓培育,特别涉及一种蓝莓愈伤组织诱导方法。
背景技术:
1、蓝莓的营养和经济价值较高。它富含维生素、矿物质、花青素及其他抗氧化物质,具有提高人体免疫力、软化血管、抗癌强心、明目护肝等功效,被联合国粮食及农业组织列为“人类五大健康食品之一”;由于营养价值高、口感独特、酸甜适宜,蓝莓深受消费者喜爱,市场需求大,具有较好经济发展前景。
2、我国蓝莓产业发展迅猛,育种工作亟待加强。近些年国内蓝莓种植面积逐年增加;2020年我国蓝莓总种植面积已达到6.64万公顷,总产量约34.72万吨,鲜果产量23.47万吨,超过美国成为全球最大的蓝莓生产国。我国蓝莓商业化栽培始于2000年,现有蓝莓栽培品种主要来自国外,缺乏自主研发品种。培育具有我国特色优质蓝莓新品种,是发展蓝莓产业和参与国际市场竞争的迫切需要。
3、单倍体育种是快速获得遗传纯系的捷径,可以大大缩短育种年限,加快育种进程;蓝莓愈伤组织诱导为蓝莓资源离体保存、再生和相关研究奠定材料基础的重要环节,因此对其的研究是非常有必要的。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种蓝莓愈伤组织诱导方法,具有提高蓝莓愈伤组织诱导率的技术效果。
2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的:
3、一种蓝莓愈伤组织诱导方法,包括以下步骤:
4、(1)选取田间开花前1-3天的蓝莓花蕾,去除花瓣和雄蕊,将保留了柱头及花梗的子房,置于75%乙醇溶液中消毒10-15min;
5、(2)将步骤(1)得到的保留了柱头及花梗的子房,在无菌条件下,切除柱头及子房上1/4处和花托,用灭过菌的镊子小心地取出包围在胎座上的胚珠,接种到愈伤组织诱导培养基,黑暗条件培养30天后,得到愈伤组织。
6、作为本发明的进一步设置,在步骤(1)中,所述愈伤组织诱导培养基为wpm+1.0mg/l2,4-d+0.4mg/l 6-ba+30g/l蔗糖+7g/l琼脂粉,ph为5.2-5.4。
7、作为本发明的进一步设置,在步骤(1)中,所述愈伤组织为浅黄色团状。
8、作为本发明的进一步设置,在步骤(2)中所述黑暗培养条件为25±1℃。
9、本发明的有益效果是:
10、1.本发明采用蓝莓胚珠接种到愈伤组织诱导培养基,黑暗培养30天得到浅黄色团状愈伤组织,相比于采用蓝莓组培苗叶片(愈伤组织诱导率为99.12%)和蓝莓成熟果肉诱导愈伤组织(愈伤组织诱导率为91.25%),能够明显提高愈伤组织诱导率,愈伤组织诱导率达到99.32%。
11、2.本发明以奥尼尔组培苗叶片为材料,将叶片横切两段后接种到9种培养基,黑暗条件培养30天后,统计愈伤组织诱导率,筛选出最佳愈伤组织诱导培养基为wpm+1.0mg/l2,4-d+0.4mg/l 6-ba+30g/l蔗糖+7g/l琼脂粉,ph调至5.2-5.4。
12、3.本发明使用蓝莓未受精胚珠培养可以获得单倍体愈伤,具有获得无菌材料容易、愈伤组织诱导率高等优点,为进一步开展蓝莓单倍体育种和相关理论研究提供了技术基础和实验材料。
1.一种蓝莓愈伤组织诱导方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.据权利要求1所述的一种蓝莓愈伤组织诱导方法,其特征在于:在步骤(1)中,所述愈伤组织诱导培养基为wpm+1.0mg/l 2,4-d+0.4mg/l 6-ba+30g/l蔗糖+7g/l琼脂粉,ph为5.2-5.4。
3.据权利要求1所述的一种蓝莓愈伤组织诱导方法,其特征在于:在步骤(1)中,所述愈伤组织为浅黄色团状。
4.据权利要求1所述的一种蓝莓愈伤组织诱导方法,其特征在于:在步骤(2)中所述黑暗培养条件为25±1℃。
