背景技术：
1、治疗性蛋白如抗体的药物用途在过去几年中有所增加。这种治疗性蛋白主要通过静脉内(iv)途径施用。
2、替代施用途径包括皮下注射。
3、皮下注射的优点在于，它允许执业医师以相当短的时间对患者进行干预。此外，可以训练患者自己进行皮下注射。在维持剂量期间，这种自我施用特别有用，因为不需要医院护理(减少医疗资源利用)并且可能对患者的生活质量具有积极影响。
4、尽管iv递送可以将大体积的药物直接施用到血流中而没有体积限制，但是由于皮下(sc)组织中的粘弹性阻力，由于注射时产生的背压以及由于痛觉，将肠胃外药物注射到皮下组织中通常限于小于2ml的体积。因此，可以注射到皮下组织的细胞外基质中的体积是受限的。
5、为此，蛋白的皮下(sc)制剂需要待注射的最终溶液中的高蛋白浓度。
6、herceptintm(曲妥珠单抗)是以150mg冻干粉末(含有抗体、α,α-海藻糖二水合物、l-组氨酸和l-组氨酸盐酸盐和聚山梨醇酯20)的形式在欧洲销售的针对her2受体的单克隆抗体(抗her2抗体)，其应当用注射用水重构用于输注以产生约21mg/ml的注射剂量。
7、roche公司开发了的皮下制剂，下文称为sc。所述sc制剂包含重组人透明质酸酶ph20(rhuph20)，其是通过透明质酸的降解诱导sc空间的局部和瞬时改变的重组人透明质酸酶，所述透明质酸是贯穿机体发现的天然存在的糖胺聚糖，其产生对皮下细胞外基质中的大量流体流动的抗性并限制大体积sc药物递送。通过在局部注射部位降解透明质酸，透明质酸酶使得sc大量流体流动并促进大体积的sc递送。
8、然而，高量的透明质酸酶可能引起注射部位炎症的风险。因为这种透明质酸酶的存在，sc制剂在可精确注射的体积方面是受限的，大量的sc制剂可产生炎症。最大体积为约6ml。
9、为此，必须大约每两周重复注射sc制剂。
10、此外，通过使用来自免疫猕猴的循环抗体，已经证明特异性识别ph-20的循环抗体结合猕猴精子的表面。因此，不能排除rhuph20抗体对人生育力减弱的作用，因为抗精子抗体理论上可能干扰精子成熟、运动性，并且在雌性中，抗精子抗体可能通过子宫颈和子宫等阻碍进展。即使对含有市售药物的sc rhuph20进行的非临床研究在几个物种中没有显示出可再现的效果，但经免疫产生透明质酸酶抗体的雄性和雌性豚鼠中观察到可逆的不育。可再现性的潜在风险仍然是重要的，特别是对于长期用于年轻非癌症患者的药物(多发性硬化、炎性肠病等)。
11、抗体的局部施用的另一种解决方案是使用合适的载体材料延长抗体的释放。已经提出了几种基于合成或天然聚合物的水凝胶用于延长抗体的释放。水凝胶是由被大量水(水凝胶总体积的约70％)溶胀的聚合物链组成的物理或化学凝胶。例如，已经提出了基于聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)(evac)的水凝胶植入物。然而，这些植入物是用具有降解抗体的潜力的苛性溶剂形成的，并且聚合物是不可生物降解的，导致患者需要额外的手术来移除植入物。已经检查了靶向血管内皮生长因子(vegf)的称为贝伐单抗的抗血管生成抗体(产品名genentech)用于各种临床应用，包括用于治疗各种癌症、用于眼睛的黄斑变性和其它病症。一项研究检查了来自混合的乙二醇壳聚糖和氧化的藻酸盐水凝胶的贝伐单抗的递送可能用于眼部药物递送，但在3天后完全释放。此外，还有若干种生物聚合物，如载有贝伐单抗和对照igg的藻酸盐-壳聚糖水凝胶。然而，这些水凝胶仅在体外进行评价，而没有研究它们的生物可降解性或生物相容性。[flecher et al.,materials science andengineering:c,2016,59.806-809]。
12、因此，仍然需要克服现有技术的缺点并提供包含蛋白或蛋白组合的药物组合物，其可容易地由操作者注射并能够提供蛋白的持续释放，同时在注射部位引起很少或不引起炎症。
13、低炎症是有利的，因为它可以允许降低两次注射之间的时间间隔，或选择注射区域，这通常用sc制剂避免，因为存在透明质酸酶，如腹壁。另一个目的是提供或类似抗体(如或其它抗her2抗体的生物类似物)的sc制剂，其不需要透明质酸酶的存在，因此不具有与这种酶相关的炎症或毒性的风险。
技术实现思路
0、发明概述
1、本公开的实施方案e1是一种药物活性蛋白的药物制剂，其包含：
2、-有效量的蛋白或蛋白组合，
3、-壳聚糖a，其包含90至100mol％的d-葡糖胺和0至15％的n-乙酰基-d-葡糖胺，
4、-至少一种统计多糖b，其包含d-葡糖胺、n-乙酰基-d-葡糖胺和至少一种式i的糖单元：
5、
6、其中：
7、·rc是亲水基团，
8、·z是接头，所述接头为单键、包含1至12个碳原子的烃链，所述链为直链或支链的、饱和或不饱和的，并且任选地包含一个或多个优选选自氮、氧和硫的杂原子，和
9、-一种或多种药学上可接受的赋形剂。
10、本公开的实施方案e2是根据e1的药物制剂，其中所述药物制剂在生理ph和渗透压下形成水凝胶。
11、本公开的实施方案e3是根据e1的药物制剂，其中rc为具有酸性性质的基团，通常包含选自以下的化学官能团：羧基(-cooh)、磺酸基(-so2oh)、膦酸酯基(-po(oh)2)、硫醇基(-sh)、醇基(-oh)和包含螯合剂的基团。
12、本公开的实施方案e4是根据e3的药物制剂，其中rc是包含螯合剂的基团，所述螯合剂选自dota(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-n,n’,n”,n”’-四乙酸)、nota(1,4,7-三氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸)、nodaga(1,4,7-三氮杂环十二烷-1-戊二酸-4,7-二乙酸)、dotaga(2-(4,7,10-三(羧甲基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1-基)戊二酸)、dotam(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三氮杂环十二烷)、notam(1,4,7-四(氨基甲酰基甲基)-1,4,7-三氮杂环壬烷)、dotp(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(亚甲基膦酸酯)、notp(1,4,7-四(亚甲基膦酸酯)-1,4,7-三氮杂环十四烷)、teta(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-n,n’,n”,n””-四乙酸)、tetam(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-n,n’,n”,n””-四(氨基甲酰基甲基))、dtpa(二乙基三胺五乙酸)、dfo(去铁胺)、bz-dfo和bispitine([3,7]-二氮杂二环[3.3.1]壬烷)，优选选自dotaga、dfo、bz-dfo、dotam、dtpa和bispitine，更优选rc是dotaga。
13、本公开的实施方案e5是根据e1的药物组合物，其中所述统计多糖b具有通式ii：
14、
15、其中：
16、·rc是亲水基团，
17、·z为接头，所述接头为单键、包含1至12个碳原子的烃链，所述链为直链或支链的、饱和或不饱和的，并且任选地包含一个或多个优选选自氮、氧和硫的杂原子，
18、·x是0.01至0.5，
19、·y是0.05至0.5，
20、·y/x之比大于0.2，优选大于1，
21、·x+y之和大于0.1。
22、本公开的实施方案e6是根据e5的药物制剂，其中rc是具有酸性性质的基团，通常选自包含羧基(-cooh)、磺酸基(-so2oh)、膦酸酯基(-po(oh)2)、硫醇基(-sh)、醇基(-oh)的基团和包含螯合剂的基团。
23、本公开的实施方案e7是根据e6的制剂，其中rc是包含螯合剂的基团，所述螯合剂选自dota(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-n,n’,n”,n”’-四乙酸)、nota(1,4,7-三氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸)、nodaga(1,4,7-三氮杂环十二烷-1-戊二酸-4,7-二乙酸)、dotaga(2-(4,7,10-三(羧甲基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1-基)戊二酸)、dotam(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三氮杂环十二烷)、notam(1,4,7-四(氨基甲酰基甲基)-1,4,7-三氮杂环壬烷)、dotp(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(亚甲基膦酸酯)、notp(1,4,7-四(亚甲基膦酸酯)-1,4,7-三氮杂环十四烷)、teta(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-n,n’,n”,n””-四乙酸)、tetam(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-n,n’,n”,n””-四(氨基甲酰基甲基))、dtpa(二乙基三胺五乙酸)、dfo(去铁胺)、bz-dfo和bispitine([3,7]-二氮杂二环[3.3.1]壬烷)，优选选自dotaga、dfo、bz-dfo、dotam、dtpa和bispitine，更优选rc是dotaga。
24、本公开的实施方案e8是根据e1的药物制剂，其中所述统计多糖b具有通式iii：
25、
26、其中：
27、-rc1和rc2不相同，并且是亲水基团，
28、-z1和z2相同或不同，是接头，所述接头为单键、包含1至12个碳原子的烃链，所述链为直链或支链的、饱和或不饱和的，并且任选地包含一个或多个优选选自氮、氧和硫的杂原子，
29、-x是0.01至0.5，优选0.01至0.1，并且更优选0.05至0.1，
30、-y是0.01至0.5，优选0.05至2
31、-z是0至0.2，
32、-y/x之比大于0.2，优选大于1，
33、-x+y之和大于0.1。
34、本公开的实施方案e9是根据e8的药物制剂，其中rc1和rc2是具有酸性性质的基团，通常选自包含羧基(-cooh)、磺酸基(-so2oh)、膦酸酯基(-po(oh)2)、硫醇基(-sh)、醇基(-oh)的基团和包含螯合剂的基团。
35、本公开的实施方案e10是根据e9所述的药物制剂，其中rc1和/或rc2是螯合剂，rc1和/或rc2优选选自dota(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-n,n’,n”,n”’-四乙酸)、nota(1,4,7-三氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸)、nodaga(1,4,7-三氮杂环十二烷-1-戊二酸-4,7-二乙酸)、dotaga(2-(4,7,10-三(羧甲基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1-基)戊二酸)、dotam(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三氮杂环十二烷)、notam(1,4,7-四(氨基甲酰基甲基)-1,4,7-三氮杂环壬烷)、dotp(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四(亚甲基膦酸酯)、notp(1,4,7-四(亚甲基膦酸酯)-1,4,7-三氮杂环十四烷)、teta(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-n,n’,n”,n””-四乙酸)、tetam(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-n,n’,n”,n””-四(氨基甲酰基甲基))、dtpa(二乙基三胺五乙酸)、dfo(去铁胺)、bz-dfo和bispitine([3,7]-二氮杂二环[3.3.1]壬烷)，优选选自dotaga、dfo、bz-dfo、dotam、dtpa和bispitine，更优选rc1是dotaga且rc2是dfo或bz-dfo。
36、本公开的实施方案e11为根据前述实施方案中任一项的药物制剂，其中z、z1和z2独立地选自单键、包含1至12个碳原子的烃链，所述链为直链或支链的、饱和或不饱和的，并且任选地包含一个或多个优选选自氮、氧和硫的杂原子、包含1至12个碳原子的烷基，所述链为直链或支链的，以及包含2至12个碳原子的烯基链，所述链为直链或支链的，所述烷基和烯基链可被c6-c10中的一个或多个芳基和/或选自-o-、-s-、-c(o)-、-nr’-、-c(o)nr’-、-nr’-c(o)-、-nr’-c(o)-nr’-、-nr’-c(o)-o-、-o-c(o)nr’、-c(s)nr’-、-nr’-c(s)-、-nr’-c(s)-nr’的一个或多个杂原子或基团中断，所述烷基和烯基链可以被选自-or’、-coor’、-sr’、-nr’2的一个或多个原子或基团取代，每个r’独立地为h或c1-c6中的烷基，优选z、z1和z2各自独立地选自单键、包含1至12个碳原子的烷基链，所述链为直链或支链的，所述烷基链可被c6-c10中的一个或多个芳基和/或选自-o-、-s-、-c(o)-、-nr’-、-c(o)nr’-、-nr’-c(o)-、-c(s)nr’-、-nr’-c(s)-、-nr’-c(s)-nr’的一个或多个杂原子或基团中断，每个r’独立地是h或c1-c6中的烷基。
37、本公开的实施方案e12是根据e11的药物制剂，其中z、z1和z2各自是包含1至12个碳原子的烷基链。
38、本公开的实施方案e13是根据e11的药物制剂，其中z、z1和z2各自是聚乙二醇(peg)部分。
39、本公开的实施方案e14是根据e1至e13中任一项的药物制剂，其中所述统计多糖b具有100kda至1000kda，更有利地200kda至750kda，甚至更有利地250kda至500kda并且最有利地300kda至400kda的平均分子量。
40、本公开的实施方案e15是根据e1至e14中任一项的药物制剂，其用于皮下施用。
41、本公开的实施方案e16是根据e1至e15中任一项的药物制剂，其中所述水凝胶从施用之日起10至100天，优选20至65天的时段内释放所述蛋白。
42、本公开的实施方案e17是根据e1至e16中任一项所述的药物制剂，其中所述制剂的粘度为10至500pa.s，如在室温下通过旋转流变测定法在平面锥形几何结构中以0.001s-1至0.01s-1，例如0.001s-1至0.01s-1，特别是0.01s-1的剪切速率测量。
43、本公开的实施方案e18是根据e1至e17中任一项的药物制剂，其中所述制剂的ph为5.0至6.5，优选5.5至6.0。
44、本公开的实施方案e19是根据e1至e18中任一项的药物制剂，其中所述制剂的渗透压为50mosm/l至600mosm/l，优选100mosm/l至600mosm/l，更优选250mosm/l至450mosm/l，或50mosm/l至300mosm/l，优选50mosm/l至250mosm/l。
45、本公开的实施方案e20是根据e1至e19中任一项的药物制剂，其包含：
46、-5至200g/l，优选10至200g/l，更优选10至150g/l的壳聚糖a，和10至200g/l，优选20至100g/l的统计多糖b，和
47、-1g/l至200g/l，优选50至100g/l的蛋白或蛋白组合。
48、本公开的实施方案e21是根据e1至e20中任一项的药物制剂，其中所述蛋白具有10kda至250kda，优选20kda至250kda，优选100kda至250kda，优选120kda至250kda，优选150kda至250kda的分子量。
49、本公开的实施方案e22是根据实施方案e1至e21中任一项的药物制剂，其中所述蛋白或蛋白组合选自由抗体、酶、融合蛋白及其组合组成的组。
50、本公开的实施方案e23是根据e1至e22中任一项的药物制剂，其中所述制剂不含透明质酸酶。
51、本公开的实施方案e24是根据e1至e23中任一项的药物制剂，其中所述蛋白或蛋白组合包括抗体或抗体的抗原结合片段。
52、本公开的实施方案e25是根据e24的药物制剂，其中所述抗体或抗体组合选自下组：(i)嵌合的、人的或人源化的抗体，和(ii)抗体-药物缀合物。
53、本公开的实施方案e26是根据e1至e25中任一项的药物制剂，其中所述蛋白或蛋白组合是抗体或抗体组合，其结合选自her2和cd20的抗原。
54、本公开的实施方案e27是根据e27的药物制剂，其中所述抗体选自下组：曲妥珠单抗、利妥昔单抗和帕妥珠单抗或其组合。
55、本公开的实施方案e28是根据e27或e28中任一项的药物制剂，其中所述制剂包含曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的组合。
56、本公开的实施方案e29是根据e1至e28中任一项的药物制剂，其还包含至少一种药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂选自溶剂、稳定剂、表面活性剂、缓冲剂、抗微生物防腐剂、保护剂、抗氧化剂、螯合剂和填充剂。
57、本公开的实施方案e30是根据e1至e30中任一项的药物制剂，其中所述制剂包含：
58、-1g/l至200g/l，优选50至100g/l的抗体或抗体组合，特别是曲妥珠单抗、利妥昔单抗、帕妥珠单抗或达雷妥尤单抗、或曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的组合，
59、-5至200g/l，优选10至200g/l，更优选10至150g/l的壳聚糖a，和
60、20至400g/l，优选20至300g/l的统计多糖b，和
61、至少一种选自以下的赋形剂：
62、o 1至100mm的缓冲剂，优选组氨酸缓冲剂，更优选组氨酸氯化物缓冲剂如l-组氨酸盐酸盐一水合物，以提供5.0至6.5，优选5.0至6.4，更优选5.5至6.00的ph，
63、o 1至500mm的稳定剂，优选海藻糖，例如α,α-海藻糖二水合物
64、o 5至25mm的抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
65、本公开的实施方案e31是试剂盒，其特征在于其包含：
66、-至少一个第一容器，其含有如e1至e12中任一项所定义的壳聚糖a和统计多糖b，
67、-至少一个第二容器，其含有如e22至e29中任一项所定义的蛋白或蛋白组合。
68、本公开的实施方案e32是根据e31的试剂盒，其用于制备根据本公开的即用型可注射制剂。
69、本公开的实施方案e33是根据权利要求e1至e31中任一项的药物制剂或根据e32或e33中任一项的试剂盒，其用于治疗癌症，通常是乳腺癌或胃癌，或非恶性疾病。
70、本公开的实施方案e34是在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括在所述受试者中皮下施用治疗有效量的根据e27至e29中任一项的结合选自her2和cd20的抗原的抗体或抗体组合。
1.一种药物活性蛋白的药物制剂，其包含：
2.根据权利要求1所述的药物制剂，其中rc是具有酸性性质的基团，通常选自包含羧基(-cooh)、磺酸基(-so2oh)、膦酸酯基(-po(oh)2)、硫醇基(-sh)、醇基(-oh)的基团和包含螯合剂的基团。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述统计多糖b具有通式ii：
4.根据前述权利要求中任一项所述的药物制剂，其中所述制剂的粘度为10至500pa.s，如在室温下通过旋转流变测定法在平面锥形几何结构中以0.001s-1至0.01s-1，例如0.001s-1至0.01s-1，特别是0.01s-1的剪切速率测量。
5.根据前述权利要求中任一项所述的药物制剂，其中所述制剂的ph为5.0至6.5，优选5.5至6.0。
6.根据前述权利要求中任一项所述的药物制剂，其中所述制剂的渗透压为50至600mosm/l，优选100至600mosm/l，更优选250至450mosm/l，或50至300mosm/l，优选50至250mosm/l。
7.根据前述权利要求中任一项所述的药物制剂，其包含：
8.根据前述权利要求中任一项所述的药物制剂，其中所述蛋白的分子量为10kda至250kda，优选20kda至250kda，优选100kda至250kda，优选120kda至250kda，优选150kda至250kda。
9.根据前述权利要求中任一项所述的药物制剂，其中所述蛋白或蛋白组合选自下组：抗体、酶、融合蛋白及其组合。
10.根据前述权利要求中任一项所述的药物制剂，其中所述蛋白或蛋白组合包括抗体或抗体的抗原结合片段。
11.根据权利要求10所述的药物制剂，其中所述抗体选自下组：曲妥珠单抗、利妥昔单抗和帕妥珠单抗或其组合。
12.根据前述权利要求中任一项所述的药物制剂，其还包含至少一种药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂选自溶剂、稳定剂、表面活性剂、缓冲剂、抗微生物防腐剂、保护剂、抗氧化剂、螯合剂和填充剂。
13.根据前述权利要求中任一项所述的药物制剂，其中所述制剂包含：
14.一种试剂盒，其特征在于其包含：
15.根据权利要求1至13中任一项所述的药物制剂或根据权利要求14所述的试剂盒，其用于治疗癌症，通常是乳腺癌或胃癌。
