背景技术：
1、神经调节蛋白(nrg；heregulin，hrg)，还称为神经胶质生长因子(ggf)及新分化因子(ndf)，是一类糖蛋白，分子量为44kd。nrg蛋白家族有四个成员：nrg-1、nrg-2、nrg-3及nrg-4。nrg(包括nrg-1)在心脏发育中发挥特别重要的作用。作为erbb家族酪氨酸激酶受体的配体，nrg-1直接与膜结合型erbb3或erbb4结合，诱导二聚化产生erbb2/erbb4、erbb2/erbb3、erbb3/erbb3及erbb4/erbb4复合物，以及后续细胞内信号传导。在动物模型中，nrg的表达诱导旁分泌信号传导，以在胚胎发育期间促进心脏组织的生长及分化，而缺失erbb2、erbb4或nrg-1中的任一种均会导致胚胎死亡。此外，阻断erbb2受体信号传导的癌症疗法已被证明具有显著的心脏毒性副作用，表明在人类中erbb2介导的信号传导不仅对于发育至关重要，且对于健康心脏组织的稳态也至关重要。
2、证据还显示，nrg-1信号转导在其他器官系统的发育及功能以及人类疾病(包括精神分裂症及头颈癌)的发病机制中发挥作用。nrg-1有许多异构体。对基因突变小鼠(基因敲除小鼠)的研究表明，具有不同n端区域或egf样结构域的异构体具有不同的体内功能。本发明是基于nrg-1βa2同功异型物。
3、内源性nrg-1结合于erbb3(her3)及erbb4(her4)且经由两者诱导信号传导。许多临床前及临床研究已显示nrg-1在各种心血管适应症中的治疗潜力，主要经由其与心肌细胞表达的erbb4(her4)的相互作用。然而，三个关键因素限制重组人类nrg-1(rhnrg-1)的临床应用及效用。第一，nrg-1经由her3的信号传导可能会促进癌症的发展和/或进展，从而引起对需要长期给药或无严重心血管(cv)风险因素的任何应用的重大关注。第二，nrg-1过度激活her3可能会破坏胃肠道(gi)上皮完整性及稳态，导致严重的gi毒性，从而失去nrg-1的治疗窗口。第三，rhnrg-1的两个临床阶段活性蛋白片段均显示短半衰期，表明可能需要繁重的剂量及给药方案来达成所需的治疗暴露水平。因此，需要提供一种基于nrg-1的治疗剂，其在各种心血管适应症中保持临床上显著的治疗潜力，但具有较低的致癌或促进癌症进展的风险、更好的gi耐受性及更有利的药代动力学(pk)概况。
4、本发明通过提供一种包含rhnrg-1活性结构域与her3特异性拮抗剂抗体的融合物的重组蛋白来解决这些需求：her3信号传导以减轻rhnrg-1的致癌风险及gi毒性的方式被阻断，同时抗体主链形式赋予典型单克隆抗体的分子半衰期，使产品的给药及施用更加方便。
技术实现思路
1、本发明提供治疗受试者的心房震颤和/或心脏纤维化的方法，其包括向受试者施用包含与单特异性erbb3(her3)单克隆抗体(mab)融合的神经调节蛋白-1(nrg-1)片段的重组融合蛋白。在一些实施方案中，心脏纤维化包括心房纤维化。
2、本发明提供治疗受试者的心房震颤的方法，其包括向受试者施用包含与单特异性erbb3(her3)单克隆抗体(mab)融合的神经调节蛋白-1(nrg-1)片段的重组融合蛋白。在一些实施方案中，心房震颤与心房纤维化有关。
3、本发明提供治疗受试者的心房纤维化的方法，其包括向受试者施用包含与单特异性erbb3(her3)单克隆抗体(mab)融合的神经调节蛋白-1(nrg-1)片段的重组融合蛋白。
4、本发明提供一种重组融合蛋白，其包含与单特异性erbb3(her3)单克隆抗体(mab)融合的神经调节蛋白-1(nrg-1)片段，用于治疗心房震颤和/或心脏纤维化的方法中。在一些实施方案中，心脏纤维化包括心房纤维化。
5、在本发明使用的方法或重组融合蛋白的一些实施方案中，nrg-1片段包含nrg-1的活性结构域。在一些实施方案中，nrg-1片段包含erbb3/4结合结构域。在一些实施方案中，nrg-1片段结合于erbb4(her4)且经由其诱导信号传导。在一些实施方案中，mab抑制经由erbb3(her3)的nrg-1信号传导。在一些实施方案中，nrg-1片段包含nrg-1β2a同功异型物。
6、在本发明使用的方法或重组融合蛋白的一些实施方案中，nrg-1片段经由其n端氨基酸使用连接子与抗体重链的c端融合。在一些实施方案中，连接子包含至少一个拷贝的seq id no:5所示的gly-gly-gly-gly-ser-gly-gly-gly-gly-ser连接子。在一些实施方案中，抗体重链的c端包含抗体的fc结构域。在一些实施方案中，单克隆抗体是糖基化的。
7、在本发明使用的方法或重组融合蛋白的一些实施方案中，nrg-1片段包含seq idno:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，mab包含seq id no:2的重链氨基酸序列。在一些实施方案中，mab包含seq id no:3的轻链氨基酸序列。在一些实施方案中，mab在seq id no:2的氨基酸234、239及434中的至少一个中包含取代突变。在一些实施方案中，至少一个取代突变包含l234f突变、s239a突变、n434a突变或其组合。在一些实施方案中，重组融合蛋白包含seq id no:3及seq id no:14的氨基酸序列。
8、在本发明使用的方法或重组融合蛋白的一些实施方案中，相对于重组nrg-1的信号诱导潜力，重组融合蛋白促进her2/4信号传导超过her2/3信号传导。在一些实施方案中，重组融合蛋白促进受试者的心肌细胞或心脏组织的增殖、分化及存活。在一些实施方案中，相对于重组nrg-1，重组融合蛋白减弱肿瘤或癌症细胞的增殖。
9、在本发明使用的方法或重组融合蛋白的一些实施方案中，施用重组融合蛋白减少心房震颤发作的持续时间，或降低心房震颤发生的频率。在一些实施方案中，施用重组融合蛋白减少心房震颤或心房纤维化的体征或症状。在一些实施方案中，心房震颤的症状包括心跳不规则、心悸、头晕、极度疲劳、呼吸短促、胸痛或其组合。在一些实施方案中，心房纤维化的体征包括胶原蛋白沉积，而施用重组融合蛋白减少心房组织中的胶原蛋白沉积。
10、在一些实施方案中，nrg-1结合于erbb4(her4)且经由其诱导信号传导。在一些实施方案中，mab抑制经由erbb3(her3)的nrg-1信号传导。
11、本发明提供一种药盒，其包含有效量的本发明的重组融合蛋白或包含本发明的重组融合蛋白的药物组合物。
12、本发明提供一种重组融合蛋白，其包含与单特异性erbb3(her3)单克隆抗体(mab)融合的神经调节蛋白-1(nrg-1)片段，用于制造治疗心房震颤和/或心脏纤维化的药物。
13、本发明的其他特征及优点将从以下详细描述的实例及附图中显而易见。但是，应当理解的是，虽然详细描述和具体实例指示本发明实施例，但仅以举例说明的方式给出，因为本领域的技术人员从这一详细描述中将显而易见在本发明的精神和范围内的各种变化和修改。
1.一种治疗受试者的心房震颤和/或心脏纤维化的方法，其包括向该受试者施用重组融合蛋白，该重组融合蛋白包含与单特异性erbb3(her3)单克隆抗体(mab)融合的神经调节蛋白-1(nrg-1)片段。
2.一种重组融合蛋白的用途，其包含与单特异性erbb3(her3)单克隆抗体(mab)融合的神经调节蛋白-1(nrg-1)片段，用于治疗受试者的心房震颤和/或心脏纤维化的方法中。
3.如权利要求1的方法或权利要求2的重组融合蛋白的用途，其中，该心脏纤维化包括心房纤维化。
4.如权利要求1至3中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该nrg-1片段包含nrg-1的活性结构域。
5.如权利要求1至4中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该nrg-1片段包含erbb3/4结合域。
6.如权利要求1至5中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该nrg-1片段结合于erbb4(her4)且经由其诱导信号传导。
7.如权利要求1至6中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该mab抑制经由erbb3(her3)的nrg-1信号传导。
8.如权利要求1至7中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该nrg-1片段包含nrg-1β2a同功异型物。
9.如权利要求1至8中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该nrg-1片段是使用连接子经由其n端氨基酸融合至该抗体重链的c端。
10.如权利要求9的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该连接子包含至少一个拷贝的seq id no:5中所列的gly-gly-gly-gly-ser-gly-gly-gly-gly-ser连接子。
11.如权利要求1至10中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该抗体重链的c端包含该抗体的fc域。
12.如权利要求1至11中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该单克隆抗体是糖基化的。
13.如权利要求1至12中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该nrg-1片段包含seq id no:4的氨基酸序列。
14.如权利要求1至13中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该mab包含seq idno:2的重链氨基酸序列。
15.如权利要求1至14中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该mab包含seq idno:3的轻链氨基酸序列。
16.如权利要求15的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该mab包含seq id no:2的氨基酸234、239及434中的至少一个的取代突变。
17.如权利要求16的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该至少一个取代突变包含l234f突变、s239a突变、n434a突变或其组合。
18.如权利要求1至8中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该重组融合蛋白包含seq id no:3及seq id no:14的氨基酸序列。
19.如权利要求1至18中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，相对于重组nrg-1的信号诱导潜力，该重组融合蛋白促进her2/4信号传导超过her2/3信号传导。
20.如权利要求1至19中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该重组融合蛋白促进该受试者的心肌细胞或心脏组织的增殖、分化及存活。
21.如权利要求1至20中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该重组融合蛋白相对于重组nrg-1减弱肿瘤或癌症细胞的增殖。
22.如权利要求1至21中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，施用该重组融合蛋白减少心房震颤发作的持续时间，或降低心房震颤发生的频率。
23.如权利要求1至22中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其中，施用该重组融合蛋白减少心房震颤或心脏纤维化的体征或症状。
24.如权利要求23的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该心房震颤的症状包括心跳不规则、心悸、头晕、极度疲劳、呼吸短促、胸痛或其组合。
25.如权利要求23的方法或重组融合蛋白的用途，其中，该心脏纤维化的体征包括胶原蛋白含量或沉积，且其中施用该重组融合蛋白减少心脏组织的胶原蛋白含量或沉积。
26.如权利要求1至25中任一项的方法或重组融合蛋白的用途，其包括向该受试者施用0.1mcg/kg至5mg/kg的该重组融合蛋白。
27.一种药盒，其包括治疗有效量的重组融合蛋白，该重组融合蛋白包含与单特异性erbb3(her3)单克隆抗体(mab)融合的神经调节蛋白-1(nrg-1)片段，用于治疗受试者的心房震颤和/或心脏纤维化。
