本发明涉及医学检验，具体涉及一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法。
背景技术：
1、iga肾病(iganephropathy，igan)是目前全球范围内最常见的原发性肾小球肾炎，其临床表现多样，主要表现为镜下血尿或肉眼血尿，可伴不同程度蛋白尿、高血压和肾功能损伤，20％～40％的igan于诊断后20年内进展至终末期肾病，目前被广泛接受的是igan多重打击假说，该假说认为igan患者循环中半乳糖缺乏的iga1(galactose-deficientiga1，gd-iga1)水平增高，gd-iga1作为自身抗原诱发了自身抗体igg的产生，gd-iga1与自身抗体igg结合形成免疫复合物(immunecomplex，gd-iga1-iggic)并沉积于肾小球系膜区，沉积的ic通过激活补体，诱发炎性因子释放等多种途径最终导致肾脏损伤，由于不良结果部分是延迟诊断的结果，因此迫切需要早期诊断策略导致及时的医疗干预。
2、目前igan的确诊主要依赖于有创性肾活检，即直接进行肾脏活检，然而，肾穿刺检查是一项较为复杂的、技术含量较高的检查方法，一般需要在三级以上医院及其相关检测机构配合进行，普及性较差，另外，肾穿刺是一种侵入性检测手段，检测存在风险，受试者遭受身体上的痛苦的同时还有可能引发内出血，因此现有的有创性肾活检的操作复杂、实用性较差、检测风险高；同时由于不良结果部分是延迟诊断的结果，因此，现有的诊断方式无法早期进行igan诊断，无法为患者提供积极治疗措施。
3、综上所述，研发一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法，仍是医学检验技术领域中急需解决的关键问题。
技术实现思路
1、针对现有技术所存在的问题，本发明的目的在于提供一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法。
2、为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
3、一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法，包括以下步骤：
4、s1、试剂准备：选择适用的生物标志物试剂盒；
5、s2、通过采血的方式，采取受试者的部分血液作为生物样本；
6、s3、通过流式细胞学检测方法来检测细胞表面cd16b；
7、s4、通过酶联免疫吸附剂测定法elisa来检测外周血游离cd16b，即外周血scd16b；
8、s5、根据检测细胞表面cd16b和外周血游离cd16b表达情况，将两者联合，实现对igan的诊断。
9、本发明进一步设置为：在步骤s1中，所述生物标志物试剂盒中包括：流式分选中性粒细胞cd16b试剂，识别外周血游离cd16b的抗体、洗涤液、稀释液、封闭液、终止液和显色液，且在进行生物样本检测前，需要确保生物标志物试剂盒中的试剂质量和试剂有效期，同时生物样本需要进行适当的预处理以提取目标分析物。
10、本发明进一步设置为：在步骤s3中，包括以下步骤：
11、s30、一次细胞重悬：对待测样本进行细胞处理计数后，使用细胞洗涤液重悬细胞，使细胞浓度为1×107/ml；
12、s31、对照设置：空白对照管、同型对照管和待测样本管中分别取每管100μl上述重悬的细胞，使每管细胞数达到1×106/管；
13、s32、一抗孵育：空白对照管中不加抗体，在同型对照管和待测样本管中分别加入5μl同型抗体和cd16b抗体，并且充分混匀，在室温条件下孵育30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管，使细胞和抗体充分反应；
14、s33、一次细胞清洗：加入适量细胞洗涤液，在转速1000rpm条件下离心5min，弃上清，并反复洗涤两次；
15、s34、二次细胞重悬：使用100μl细胞洗涤液重悬细胞；
16、s35、二抗孵育：向三个反应管中分别加入适量的荧光标记的二抗，充分混匀，室温避光孵育30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管；
17、s36、二次细胞清洗：加入适量细胞洗涤液，在转速1000rpm条件下离心5min，弃上清，反复洗涤两次；
18、s37、上机检测：使用100μl细胞洗涤液重悬细胞后，上机检测，先测空白对照管和同型对照管，再测待测样本管。
19、本发明进一步设置为：在步骤s30中，所述细胞洗涤液为含2％牛血清白蛋白bsa的磷酸缓冲盐溶液pbs。
20、本发明进一步设置为：在步骤s4中，包括以下步骤：
21、s40、加样：在酶标板的空白孔中加入50μl标准品/样品稀释液，在酶标板的其余孔中加入标准品/待测样品50μl，贴上封板胶，在37℃条件下放置60min；
22、s41、一次洗板：在酶标板的每一个孔中加入300μl的洗涤液并振荡浸泡2min，滤纸印干；
23、s42、一抗加入：在酶标板的每一个孔中加入100μl鼠抗人cd16b抗体稀释液，在37℃条件下放置60min；
24、s43、二次洗板：在酶标板的每一个孔中加入300μl的洗涤液并振荡浸泡2min，滤纸印干；
25、s44、二抗加入：在酶标板的每一个孔中加入100μl山羊抗鼠igg稀释液，在37℃条件下放置60min；
26、s45、加辣根过氧化物酶hrp：其每一个孔加入100μl1x的生物素化抗体工作液，贴上封板胶；
27、s46、三次洗板：在酶标板的每一个孔中加入300μl的洗涤液并振荡浸泡2min，滤纸印干；
28、s47、显色：每孔加入提前配置好的特定底物100μl，贴上封板胶纸，混匀后置于37℃暗处反应10—20min，酶催化产生彩色反应，且具体显色时间根据显色结果而定；
29、s48、终止反应：向每孔加入100μl终止液并混匀，停止反应，阻断底物的氧化反应，维持产色稳定；
30、s49、在上述终止反应的30min内用酶标仪在450nm处测定产生的色素的吸光值，即od值。
31、本发明进一步设置为：在步骤s47中，所述特定底物为tmb混合液或abts混合液，所述tmb混合液为3,3',5,5'-四甲基联苯二胺，所述abts混合液为2,2'-联氨基二(2-甲基丙酰氧)乙烷磺酸铵。
32、本发明进一步设置为：在步骤s48中，在进行结果判断与计算时，以标准品浓度作横坐标、od值作纵坐标绘制出标准曲线，根据样品od值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。
33、有益效果
34、采用本发明提供的技术方案，与已知的公有技术相比，具有如下有益效果：
35、本发明中，通过采血的方式，取受试者的部分血液作为生物样本进行判断，血液作为一种重要的体液，不仅取样容易，患者接受度高，而且还可以随时采血检测病情变化，通过血清标志物检测对igan的诊断及病情评估方面具有很大的价值，取得血清标志物后，再利用生物标志物试剂盒，通过流式细胞学检测方法来检测细胞表面cd16b，通过酶联免疫吸附剂测定法elisa来检测外周血scd16b，根据检测细胞表面cd16b和外周血游离cd16b表达情况，将两者联合，实现对igan的诊断，本发明通过检测生物标志物细胞表面cd16b和外周血游离cd16b的表达水平，将细胞表面cd16b和外周血scd16b联合能更高效地为igan诊断提供了预判，能够判断生物样本的受试者是否患有igan，有助于疾病的早期筛查，利于临床医生迅速掌握患者病情，同时该检测判断方法便捷、检测周期短、检测成本降低，与传统的肾活检等方法相比，该操作简单、无创、实用性较强、能反复进行检测病情变化，同时可更提前预判igan的发生发展，更早的提供积极治疗措施，延缓疾病进展，尿毒症的发生。
1.一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法，其特征在于，在步骤s1中，所述生物标志物试剂盒中包括：流式分选中性粒细胞cd16b试剂，识别外周血游离cd16b的抗体、洗涤液、稀释液、封闭液、终止液和显色液，且在进行生物样本检测前，需要确保生物标志物试剂盒中的试剂质量和试剂有效期，同时生物样本需要进行适当的预处理以提取目标分析物。
3.根据权利要求1所述的一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法，其特征在于，在步骤s3中，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法，其特征在于，在步骤s30中，所述细胞洗涤液为含2％牛血清白蛋白bsa的磷酸缓冲盐溶液pbs。
5.根据权利要求1所述的一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法，其特征在于，在步骤s4中，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法，其特征在于，在步骤s47中，所述特定底物为tmb混合液或abts混合液，所述tmb混合液为3,3',5,5'-四甲基联苯二胺，所述abts混合液为2,2'-联氨基二(2-甲基丙酰氧)乙烷磺酸铵。
7.根据权利要求5所述的一种cd16b作为生物标志物的iga肾病判断方法，其特征在于，在步骤s48中，在进行结果判断与计算时，以标准品浓度作横坐标、od值作纵坐标绘制出标准曲线，根据样品od值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。
