1.本发明涉及一种快速测定西瓜花粉活力的方法，属于植物种植技术领域。
背景技术：2.传统种子生产中，都是采摘父本雄花后直接用于授粉，每天的花粉量和花粉活力变化不定，棚内温度、通风、长势、整枝情况和花的节位都会影响雄花品质。授粉时根据雄花数量分配授粉花朵用量，数量充足时一朵雄花授一朵雌花，数量不足时，一朵雄花授两朵雌花，授粉后没能坐瓜的再留雌花进行二次授粉。此过程不但人工成本高，也会因为有活力的花粉数量不足导致瓜内的种子数量减少，造成制种产量降低。
3.花粉活力检测技术能够有效解决上述传统种子生产中存在的技术问题。授粉前几天开始监测雄花质量并及时调整种植方式，授粉时提前检测花粉活力、调整雄花用量，保证授粉所需有活力的花粉数量达标，从而提高了坐瓜率，降低了用工成本，有效提高了单瓜种子数量，整体制种产量较以前提高了1-2倍。
4.现有花粉活力检测方法中，采用固体培养基，配制时需要先加热，培养基中多含有植物激素需要有机溶剂溶解，配制繁琐，培养时间长，需4-5小时，且不宜长期存放，不适用于实际生产。另外，现有利用现有培养基培养需要黑暗培养，且要求培养温度为25-28℃。
技术实现要素：5.本发明为克服现有技术弊端，提供一种快速测定西瓜花粉活力的方法，利用液体培养基，不含激素，配置后的液体储备液可以存放一年以上，利用此培养液培养花粉，仅需20min即可观察结果，且培养时仅室温放置即可，无需特殊要求。
6.本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
7.一种快速测定西瓜花粉活力的方法，所述方法包括如下步骤：
8.步骤a、配置储备液：600-800ml水中添加无水cacl
2 0.9-1.2g，kno30.9-1.0g，mgso4·
7h2o 0.3-0.5g，kcl 0.1-0.3g，h3bo
3 0.1-0.12g，完全溶解后定容至1l得到储备液，常温存放；
9.步骤b、活力检测培养液的配制：在上述制备得到的储备液中添加蔗糖1.0-1.5g/10g，蔗糖完全溶解后得到活力检测培养液；
10.步骤c、活力检测：培养皿内铺一张用水浸湿的滤纸，滤纸上放置一载玻片，载玻片上滴1-2滴活力检测培养液，将要检测的西瓜鲜花在培养液上蘸几下，此时可以观察到花粉数量，盖上培养皿盖，常温下培养20-30min；相同的检测方法随机检测同一批雄花3-5朵；
11.步骤d、观察花粉管萌发情况，计算花粉活力百分数：在40
×
10倍显微镜下观察花粉管生长情况，花粉管长度超过花粉直径的为有活力的花粉粒，有活力的花粉粒除以花粉粒总数为花粉活力百分数，取3-5个视野计算花粉活力百分数后取平均值。
12.上述快速测定西瓜花粉活力的方法，所述步骤a中，储备液中，包括cacl21g/l、kno
3 0.95g/l、mgso4·
7h2o 0.37g/l、kcl 0.175g/l和h3bo
3 0.1g/l。
13.上述快速测定西瓜花粉活力的方法，所述步骤b在储备液中添加蔗糖量优选为1.2g/10g。
14.上述快速测定西瓜花粉活力的方法，所述步骤b制备的活力检测培养液直接用于花粉活力检测或者冷藏存放小于7天后进行花粉活力检测。
15.本发明的有益效果是：
16.本发明西瓜花粉活力检测采用的液体培养基中不含激素，配制的储备液可以存放一年以上，活力检测时，仅需向储备液中加入蔗糖即可进行花粉培养，更适用于生产基地使用。
17.利用本发明液体培养基进行花粉萌发培养，仅需20-30min即可观察培养结果，培养效率更高，更具实际应用价值；且培养过程在室温放置即可，无特殊要求。利用本发明液体培养基培养的花粉管萌发率高达90％及以上。
附图说明
18.图1为本发明实施例1的西瓜花粉萌发前显微镜检图；
19.图2为实施例1的西瓜花萌发后显微镜检测；
20.图3为对比例1的西瓜花萌发后显微镜检测；
21.图4为对比例2的西瓜花萌发后显微镜检测；
22.图5为对比例3的西瓜花萌发后显微镜检测。
具体实施方式
23.本发明液体培养基中包含cacl
2 0.9-1.2g/l、kno
3 0.9-1.0g/l、mgso4·
7h2o0.3-0.5g/l、kcl 0.1-0.3g/l、h3bo
3 0.1-0.12g/l以及蔗糖1.0-1.5g/10g，钙元素、硼元素和蔗糖是花粉管萌发的必须营养物质。蔗糖作为花粉管萌发的碳源，为花粉萌发提供能量的同时，必须要控制其添加量，以保证溶液的渗透压，保证萌发率，即花粉活力百分数。钙、硼含量的多少也会影响西瓜花粉的萌发，经过我们大量实验探索，得到本发明钙和硼的添加量，超出此范围的添加量，培养得到的西瓜花粉活力百分数均会降低。
24.下面结合实施例对本发明作进一步说明。
25.实施例1
26.快速测定西瓜花粉活力的方法，包括如下步骤：
27.步骤a、配置储备液：800ml水中添加无水cacl
2 1g，kno
3 0.95g，mgso4·
7h2o 0.37g，kcl 0.175g，h3bo
3 0.1g，完全溶解后定容至1l得到储备液，常温存放；
28.步骤b、活力检测培养液的配制：在上述制备得到的储备液中添加蔗糖1.2g/10g，蔗糖完全溶解后得到活力检测培养液；
29.步骤c、活力检测：培养皿内铺一张用水浸湿的滤纸，滤纸上放置一载玻片，载玻片上滴1-2滴活力检测培养液，将要检测的西瓜鲜花在培养液上蘸几下，此时可以观察到花粉数量，盖上培养皿盖，常温下培养20min；
30.步骤d、观察花粉管萌发情况，计算花粉活力百分数：在40
×
10倍显微镜下观察花粉管生长情况，花粉管长度超过花粉直径的为有活力的花粉粒，有活力的花粉粒除以花粉粒总数为花粉活力百分数，取3-5个视野计算花粉活力百分数后取平均值，得到花粉活力百
分数为95％。如图1和图2，分别为西瓜花粉萌发前后的显微镜检图。
31.实施例2
32.快速测定西瓜花粉活力的方法，包括如下步骤：
33.步骤a、配置储备液：700ml水中添加无水cacl
2 0.9g，kno
3 1g，mgso4·
7h2o 0.4g，kcl 0.2g，h3bo
3 0.11g，完全溶解后定容至1l得到储备液，常温存放；
34.步骤b、活力检测培养液的配制：在上述制备得到的储备液中添加蔗糖1.3g/10g，蔗糖完全溶解后得到活力检测培养液；
35.步骤c、活力检测：培养皿内铺一张用水浸湿的滤纸，滤纸上放置一载玻片，载玻片上滴1-2滴活力检测培养液，将要检测的西瓜鲜花在培养液上蘸几下，此时可以观察到花粉数量，盖上培养皿盖，常温下培养25min；
36.步骤d、观察花粉管萌发情况，计算花粉活力百分数：在40
×
10倍显微镜下观察花粉管生长情况，花粉管长度超过花粉直径的为有活力的花粉粒，有活力的花粉粒除以花粉粒总数为花粉活力百分数，取3-5个视野计算花粉活力百分数后取平均值，花粉活力百分数为92％。
37.实施例3
38.快速测定西瓜花粉活力的方法，包括如下步骤：
39.步骤a、配置储备液：600ml水中添加无水cacl
2 1.1g，kno
3 0.9g，mgso4·
7h2o 0.5g，kcl 0.3g，h3bo
3 0.12g，完全溶解后定容至1l得到储备液，常温存放；
40.步骤b、活力检测培养液的配制：在上述制备得到的储备液中添加蔗糖1.5g/10g，蔗糖完全溶解后得到活力检测培养液；
41.步骤c、活力检测：培养皿内铺一张用水浸湿的滤纸，滤纸上放置一载玻片，载玻片上滴1-2滴活力检测培养液，将要检测的西瓜鲜花在培养液上蘸几下，此时可以观察到花粉数量，盖上培养皿盖，常温下培养25min；
42.步骤d、观察花粉管萌发情况，计算花粉活力百分数：在40
×
10倍显微镜下观察花粉管生长情况，花粉管长度超过花粉直径的为有活力的花粉粒，有活力的花粉粒除以花粉粒总数为花粉活力百分数，取3-5个视野计算花粉活力百分数后取平均值，花粉活力百分数为90％。
43.对比例1
44.快速测定西瓜花粉活力的方法，包括如下步骤：
45.步骤a、配置储备液：800ml水中添加无水cacl
2 1g，kno
3 0.95g，mgso4·
7h2o 0.37g，kcl 0.175g，h3bo
3 0.01g，完全溶解后定容至1l得到储备液，常温存放；
46.步骤b、活力检测培养液的配制：在上述制备得到的储备液中添加蔗糖1.2g/10g，蔗糖完全溶解后得到活力检测培养液；
47.步骤c、活力检测：培养皿内铺一张用水浸湿的滤纸，滤纸上放置一载玻片，载玻片上滴1-2滴活力检测培养液，将要检测的西瓜鲜花在培养液上蘸几下，此时可以观察到花粉数量，盖上培养皿盖，常温下培养20min；
48.步骤d、观察花粉管萌发情况(见图3)，计算花粉活力百分数：在40
×
10倍显微镜下观察花粉管生长情况，花粉管长度超过花粉直径的为有活力的花粉粒，有活力的花粉粒除以花粉粒总数为花粉活力百分数，取3-5个视野计算花粉活力百分数后取平均值，花粉活力
52％。
49.硼元素是花粉管生长过程中的必须元素之一，硼酸含量过低导致花粉萌发率显著下降。
50.对比例2
51.快速测定西瓜花粉活力的方法，包括如下步骤：
52.步骤a、配置储备液：800ml水中添加无水cacl
2 1g，kno
3 0.95g，mgso4·
7h2o 0.37g，kcl 0.175g，h3bo
3 0.1g，peg 150g完全溶解后定容至1l得到储备液，常温存放；
53.步骤b、活力检测培养液的配制：在上述制备得到的储备液中添加蔗糖1.2g/10g，蔗糖完全溶解后得到活力检测培养液；
54.步骤c、活力检测：培养皿内铺一张用水浸湿的滤纸，滤纸上放置一载玻片，载玻片上滴1-2滴活力检测培养液，将要检测的西瓜鲜花在培养液上蘸几下，此时可以观察到花粉数量，盖上培养皿盖，常温下培养20min；
55.步骤d、观察花粉管萌发情况(见图4)，计算花粉活力百分数：在40
×
10倍显微镜下观察花粉管生长情况，花粉管长度超过花粉直径的为有活力的花粉粒，有活力的花粉粒除以花粉粒总数为花粉活力百分数，取3-5个视野计算花粉活力百分数后取平均值，花粉活力0。
56.peg是菊科植物花粉萌发的必备药品之一，但添加到西瓜花粉培养基中会导致西瓜花粉无法萌发。
57.对比例3
58.快速测定西瓜花粉活力的方法，包括如下步骤：
59.步骤a、配置储备液：800ml水中添加无水cacl
2 1g，kno
3 0.95g，mgso4·
7h2o 0.37g，kcl 0.175g，h3bo
3 0.1g，完全溶解后定容至1l得到储备液，常温存放；
60.步骤b、活力检测培养液的配制：在上述制备得到的储备液中添加蔗糖0.5g/10g，蔗糖完全溶解后得到活力检测培养液；
61.步骤c、活力检测：培养皿内铺一张用水浸湿的滤纸，滤纸上放置一载玻片，载玻片上滴1-2滴活力检测培养液，将要检测的西瓜鲜花在培养液上蘸几下，此时可以观察到花粉数量，盖上培养皿盖，常温下培养20min；
62.步骤d、观察花粉管萌发情况(见图5)，计算花粉活力百分数：在40
×
10倍显微镜下观察花粉管生长情况，花粉管长度超过花粉直径的为有活力的花粉粒，有活力的花粉粒除以花粉粒总数为花粉活力百分数，取3-5个视野计算花粉活力百分数后取平均值，花粉活力百分数仅为30％。
63.蔗糖为花粉萌发提供能量和渗透压，减少蔗糖含量会导致花粉萌发率下降。
技术特征：1.一种快速测定西瓜花粉活力的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：步骤a、配置储备液：600-800ml水中添加无水cacl
2 0.9-1.2g，kno30.9-1.0g，mgso4·
7h2o 0.3-0.5g，kcl 0.1-0.3g，h3bo
3 0.1-0.12g，完全溶解后定容至1l得到储备液，常温存放；步骤b、活力检测培养液的配制：在上述制备得到的储备液中添加蔗糖1.0-1.5g/10g，蔗糖完全溶解后得到活力检测培养液；步骤c、活力检测：培养皿内铺一张用水浸湿的滤纸，滤纸上放置一载玻片，载玻片上滴1-2滴活力检测培养液，将要检测的西瓜鲜花在培养液上蘸几下，此时可以观察到花粉数量，盖上培养皿盖，常温下培养20-30min；相同的检测方法随机检测同一批雄花3-5朵；步骤d、观察花粉管萌发情况，计算花粉活力百分数：在40
×
10倍显微镜下观察花粉管生长情况，花粉管长度超过花粉直径的为有活力的花粉粒，有活力的花粉粒除以花粉粒总数为花粉活力百分数，取3-5个视野计算花粉活力百分数后取平均值。2.根据权利要求1所述的快速测定西瓜花粉活力的方法，其特征在于：所述步骤a中，储备液中，包括cacl
2 1g/l、kno
3 0.95g/l、mgso4·
7h2o 0.37g/l、kcl 0.175g/l和h3bo
3 0.1g/l。3.根据权利要求2所述的快速测定西瓜花粉活力的方法，其特征在于：所述步骤b在储备液中添加蔗糖量优选为1.2g/10g。4.根据权利要求3所述的快速测定西瓜花粉活力的方法，其特征在于：所述步骤b制备的活力检测培养液直接用于花粉活力检测或者冷藏存放小于7天后进行花粉活力检测。
技术总结一种快速测定西瓜花粉活力的方法，包括如下步骤：配置储备液：600-800mL水中添加无水CaCl
技术研发人员：党继革 范冬冬 赵新芳 赵翠媛 李雷霞 李甄 李冬军 刘伟
受保护的技术使用者：河北双星种业股份有限公司
技术研发日：2022.07.14
技术公布日：2022/11/1
