本发明属于天然药物化学，具体涉及一种同步分离青钱柳多糖和青钱柳三萜皂苷的制备方法。
背景技术：
1、青钱柳(cyclocarya paliurus(batal.)iljinskaja)又名青钱李、摇钱树、一串钱、甜茶树等，属于双子叶植物纲胡桃科唯一的青钱柳属植物，多分布于长江沿岸及长江以南诸省海拔500～2500m山地。目前多项研究结果表明，青钱柳的根、茎、叶均具有药用价值，其中叶片的药用价值最高。青钱柳叶中的多糖以及三萜皂苷等作为主要化学成分，具有抗炎、降血糖和降血压、减脂、抗氧化、抗衰老、抗过敏、提高免疫力等多种药理活性。
2、相关现有技术公开了一种从青钱柳叶中制备具有降血糖作用的总三萜的方法，以青钱柳叶为原料，经乙醇水混合溶剂提取，有机溶剂液液萃取后，通过聚酰胺柱色谱有机溶剂洗脱和大孔树脂柱色谱乙醇水洗脱进行分离纯化，可得到总三萜。相关现有技术还公开了一种青钱柳多糖的提取及脱色方法，包括如下步骤：将青钱柳叶原料粉碎，低功率超声辅助复合酶酶解三级逆流提取，提取液去杂、浓缩、加乙醇沉淀多糖；得到的多糖沉淀加蒸馏水溶解，然后用大孔树脂超声辅助脱色，脱色液浓缩，冷冻干燥即可得脱色青钱柳多糖干燥粉。但以上方法存在收率或纯度有限、成本高、耗能高等弊端，不适合工业化生产。
3、考虑到青钱柳资源较为稀缺、且价格较为昂贵，有必要改善青钱柳多糖和青钱柳三萜皂苷成分的提取、纯化方法，以降低提取成本、提高得率，但目前对此的研究仍然较为缺乏，基于此，提供了本发明技术方案。
技术实现思路
1、以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。
2、本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种同步分离青钱柳多糖和青钱柳三萜皂苷的制备方法。本发明的制备方法简单，工艺可操作性强，青钱柳多糖和青钱柳三萜皂苷的得率高且纯度高。
3、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
4、本发明提供一种同步分离青钱柳多糖和青钱柳三萜皂苷的制备方法，包括以下步骤：
5、将青钱柳叶膨化干燥后粉碎，得青钱柳叶粉末；将所述青钱柳叶粉末加入到萃取液中进行超声提取，过滤，取滤液，浓缩，得粗提物，将所述粗提物用大孔树脂吸附上柱；
6、收集上柱流出液，加入无水乙醇析出沉淀，取所述沉淀进行脱蛋白、脱色，得到所述青钱柳多糖；
7、将处理后的大孔树脂用碱醇溶液洗涤，再用50～95wt％的乙醇水溶液进行解吸，收集解吸液，脱色，得到所述青钱柳三萜皂苷；
8、其中，所述萃取液为低共熔溶剂和水以体积比1：0.5～2混合的混合液；
9、所述脱蛋白的步骤包括向所述沉淀的水溶液中加入硫酸铵和叔丁醇，离心，收集水相。
10、本发明通过膨化干燥使得青钱柳叶的内部组织形成均匀多孔状结构，辅以低共熔溶剂和水的混合液作为萃取液对植物细胞壁具有溶解破坏作用，便于目标成分从青钱柳叶内部组织中提取分离出来，从而实现了本发明较高的提取率。其次，本发明通过大孔吸附树脂柱分离青钱柳多糖和青钱柳三萜皂苷，其中，三萜皂苷与大孔吸附树脂上的极性基团通过范德华力的作用而吸附，多糖不易被吸附而直接流出。使用无水乙醇沉淀多糖，采用三相分离技术脱蛋白可以在实现较好的除蛋白效果的同时保证较高的多糖保留率。预先采用含碱的低浓度醇溶液对大孔树脂进行洗涤，除去黄酮类物质，再用较高浓度的乙醇溶液对大孔树脂进行洗脱，将吸附在大孔树脂上的青钱柳三萜皂苷尽可能的洗脱下来，有效提高了青钱柳三萜皂苷的提取率和纯度。
11、在本发明的一些实施方式中，所述膨化干燥的参数包括：膨化的温度为40～50℃，例如，40～45℃、45～50℃、约45℃。
12、在本发明的一些实施方式中，所述膨化干燥的参数包括：停滞时间为5～10min，例如，5～8min、8～10min、约8min。
13、在本发明的一些实施方式中，所述膨化干燥的参数包括：干燥在压力为-30kpa～-100kpa的条件下进行，例如，-40kpa～-100kpa、-50kpa～-100kpa、-60kpa～-100kpa、-80kpa～-100kpa、-90kpa～-100kpa、-98kpa～-100kpa。
14、在本发明的一些实施方式中，所述膨化干燥的参数包括：干燥的温度为40～60℃，例如，40～50℃、50～60℃、约50℃。
15、在本发明的一些实施方式中，所述膨化干燥的参数包括：干燥的时间为20～40min，例如，20～30min、30～40min、约30min。
16、在本发明的一些实施方式中，在所述膨化干燥前，还依次包括热风干燥和均湿。
17、在本发明的一些实施方式中，所述热风干燥的温度为40～60℃，例如，40～50℃、50～60℃、约50℃。
18、在本发明的一些实施方式中，所述热风干燥的时间为0.5～2h，例如，0.5～1h、1～2h、约01h。
19、在本发明的一些实施方式中，所述均湿的温度为0～10℃，例如，0～6℃、0～4℃、约4℃。
20、在本发明的一些实施方式中，所述均湿的时间为2～8h，例如，2～6h、约4h。
21、在本发明的一些实施方式中，所述粉碎为过10～100目筛，优选地，所述粉碎为过10～50目筛。
22、一般来说，在固定单位质量的物料内，随着颗粒尺寸的减小，比表面积相应增加，提取率也随着比表面积的增大而增加。然而，在实际萃取过程中，颗粒尺寸并不总是越小越好，当颗粒太小时，会造成萃取物中细粉污染和影响目标成分溶出等一系列问题。
23、在本发明的一些实施方式中，所述低共熔溶剂选自氯化胆碱/二醇基低共熔溶剂或氯化胆碱/尿素低共熔溶剂；优选为氯化胆碱/二醇基低共熔溶剂。
24、在本发明的一些实施方式中，所述氯化胆碱与所述二醇基或尿素的摩尔比为1：2～4；优选为约1：3。
25、在本发明的一些实施方式中，所述二醇基选自乙二醇、1,3-丙二醇、1,4-丁二醇中的至少一种；优选地，所述二醇基为乙二醇。
26、本发明中所述的萃取液可采用本领域常规手段制备得到，本发明对萃取液的制备方法无特殊限制；例如，在本发明的一些实施方式中，所述萃取液的制备方法可为：将氯化胆碱与所述二醇基或尿素在70～95℃下搅拌至均匀透明，得到氯化胆碱/二醇基低共熔溶剂或氯化胆碱/尿素低共熔溶剂，再将所得低共熔溶剂与蒸馏水混合，即得。
27、在本发明的一些实施方式中，所述青钱柳叶粉末与所述萃取液的固液比为1g:6～15ml，例如，1g:6～12ml、1g:6～10ml、1g:6～8ml、1g:7～12ml、1g:7～10ml、1g:8～12ml、1g:8～10ml、1g:10～15ml、1g:10～12ml、约1g:6ml、1g:7ml、约1g:8ml、约1g:10ml、约1g:12ml。
28、在本发明的一些实施方式中，所述超声提取的功率为400～800w，例如，400～600w、500～800w、500～600w、约600w。当超声功率过高时，混合溶液体系的萃取伴随着溶剂的气化和挥发，这不利于萃取。
29、在本发明的一些实施方式中，所述超声提取的温度为50～70℃，例如，50～60℃、60～70℃。
30、在本发明的一些实施方式中，所述超声提取的总时间为4-10h，例如，4～6h、4-8h、5～8h、6～8h。所述超声提取可进行1次，单次超声提取的时间为4-10h；所述超声提取也可进行两次及以上，本发明对单次超声提取的时间不作特别限制，只要控制超声提取的总时间在4-10h范围内即可。
31、在本发明的一些实施方式中，所述滤液经离心后再进行所述浓缩，本发明对离心的转速和时间无特别要求，能实现分离目的即可；例如，所述离心的转速为4000～8000r/min，离心的时间为10～20min。
32、在本发明的一些实施方式中，所述大孔树脂选自ab-8型、d101型大孔树脂；优选地，所述大孔树脂为ab-8型大孔树脂。ab-8型大孔树脂对青钱柳三萜皂苷的吸附作用更强，有利于后续分离纯化步骤。
33、在本发明的一些实施方式中，大孔树脂柱的高径比为5～8：1，柱体积为60～90l。
34、在本发明的一些实施方式中，所述粗提物的上柱流速为1-2bv/h。
35、在本发明的一些实施方式中，所述上柱流出液与无水乙醇的体积比为1：6～9，例如1：7～8。
36、在本发明的一些实施方式中，所述沉淀的水溶液的浓度为5～15mg/ml。
37、在本发明的一些实施方式中，所述沉淀的水溶液与硫酸铵的液固比为3～8ml：1g，例如3～7ml：1g、4～6ml：1g、约5ml：1g。
38、在本发明的一些实施方式中，所述沉淀的水溶液与叔丁醇的体积比为1：1～2。
39、在本发明的一些实施方式中，所述碱醇溶液的碱含量为0.1～4wt％，例如，0.1～3wt％、0.1～2wt％、0.1～1wt％、0.1～0.5wt％、0.5～4wt％、0.5～3wt％、0.5～2wt％、0.5～1wt％、1～4wt％、1～3wt％、1～2wt％、1～1.5wt％、2～4wt％、2～3wt％、3～4wt％；所述碱醇溶液的醇含量为10～30wt％，例如，10～25wt％、10～20wt％、15～30wt％、15～25wt％、15～20wt％、20～30wt％、20～25wt％。
40、在本发明的一些实施方式中，所述碱醇溶液为含碱的乙醇溶液，其中，所述碱选自naoh、koh、nahco3、na2co3；优选地，所述碱为naoh。
41、在本发明的一些实施方式中，采用2～5bv的50～95wt％的乙醇水溶液解吸，其中，解吸流速为1-2bv/h。
42、在本发明的一些实施方式中，采用2～3bv的60～80wt％的乙醇水溶液解吸，其中，解吸流速为1-2bv/h。
43、在本发明的一些实施方式中，采用活性炭进行脱色，本发明对具体脱色步骤中的参数无特别限定，可按照本领域常用条件进行。任选地，可将脱色后溶液过0.22μm微孔滤膜，以除去部分杂质。
44、根据本发明一些优选的实施方式，至少具备如下有益效果：
45、本发明的制备方法简单，工艺可操作性强，青钱柳多糖和青钱柳三萜皂苷的得率高且纯度高。本发明通过采用膨化干燥预处理法辅以低共熔溶剂进行萃取，便于从目标药材内部组织中提取分离目标成分；采用大孔树脂，通过不同洗脱溶剂分离纯化青钱柳三萜皂苷和青钱柳多糖，通过加入硫酸铵，叔丁醇进行脱蛋白，在除去蛋白的同时最大程度的保留了多糖含量。
1.一种同步分离青钱柳多糖和青钱柳三萜皂苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述膨化干燥的参数包括：
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述膨化干燥前，还依次包括热风干燥和均湿，其中，所述热风干燥的温度为40～60℃，所述热风干燥的时间为0.5～2h，所述均湿的温度为0～10℃，所述均湿的时间为2～8h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述低共熔溶剂选自氯化胆碱/二醇基低共熔溶剂或氯化胆碱/尿素低共熔溶剂；任选地，所述氯化胆碱与所述二醇基或尿素的摩尔比为1：2～4；任选地，所述二醇基选自乙二醇、1,3-丙二醇、1,4-丁二醇中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述青钱柳叶粉末与所述萃取液的固液比为1g：6～15ml。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂选自ab-8型或d101型大孔树脂。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述粗提物的上柱流速为1-2bv/h。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述沉淀的水溶液的浓度为5～15mg/ml，任选地，所述沉淀的水溶液与硫酸铵的液固比为3～8ml：1g，任选地，所述沉淀的水溶液与叔丁醇的体积比为1：1～2。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碱醇溶液的碱含量为0.1～4wt％，任选地，所述碱醇溶液的醇含量为10～30wt％，任选地，所述碱醇溶液为含碱的乙醇溶液。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用2～5bv的50～95wt％的乙醇水溶液解吸，其中，解吸流速为1-2bv/h。
