本发明涉及一种生化测试用的试剂盒，具体涉及一种稳定性提高的总胆汁酸测定试剂及试剂盒。
背景技术：
1、总胆汁酸(tba)是在肝脏内合成与甘氨酸或牛磺酸结合成为结合型胆汁酸，然后被肝细胞分泌入胆汁，随胆汁至肠道后，在肠道内细菌作用下被水解成游离型胆汁酸，有97％被肠道重新吸收后回到肝脏。如此循环不息。这样能使总胆汁酸发挥最大生理效应。更可防止总胆汁酸大量进入循环中对其它组织细胞的毒害(总胆汁酸的ph值非常低)。健康人的周围血液中血清胆汁酸含量极微，当肝细胞损害或肝内、外阻塞时，胆汁酸代谢就会出现异常，总胆汁酸就会升高。因此，总胆汁酸测定是一项比较敏感和有效的肝功能试验之一。
2、总胆汁酸测定试剂盒(酶循环法)是现有技术中应用广泛的一种测试方法，这种方法的基本原理如下：如图1所示，该胆汁酸被3α-羟基类固醇脱氢酶(3α-hsd)及硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(thio-nad+)特异性地氧化，生成3α-酮类固醇(3α-ks)及硫代还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(thio-nadh)。生成的3α-ks在3α-hsd及还原型辅酶i(nadh)存在下，又生成胆汁酸和氧化型辅酶i(nad+)。如此循环往复产生大量thio-nadh，thio-nadh在405nm波长附近有吸收峰，在一定的反应时间内，其吸光度变化与总胆汁酸浓度呈正比，根据校准品吸光度的变化率，从而计算总胆汁酸含量。
3、然而，这种检测试剂在应用中存在一定的问题，主要就是其保质期较短，通常会低于12个月。究其原因，一方面是内部含有的微量重金属离子容易与其它有效成分如thio-nadh发生结合，另外就是微生物的缓慢繁殖而是试剂中积累之后容易与其它试剂成分反应，从而使得检测准确度降低。
技术实现思路
1、为解决上述技术中存在的问题，本发明提供一种提高保质期的稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂和试剂盒。
2、本发明提供的一种稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂，包括试剂r1和试剂r2，试剂r1包括β-硫烟酰胺腺苷二核苷酸氧化型试剂th i o-nad、缓冲液a、表面活性剂和稳定剂a；
3、试剂r2包括还原型辅酶ⅰ、3α-羟类固醇脱氢酶试剂3α-hsd、缓冲液b和稳定剂b；
4、其特征在于，试剂r1和试剂r2中还具有水溶性羧甲基壳聚糖，水溶性羧甲基壳聚糖在溶液中形成纳米微球。
5、优选地，水溶性羧甲基壳聚糖的浓度为1mmo l/l～10mmo l/l。
6、优选地，先制备形成水溶性羧甲基壳聚糖纳米微球，将水溶性羧甲基壳聚糖溶于2％质量浓度的乙酸溶液中，超声混合，然后加入至液体石蜡和span-80混合溶剂中，液体石蜡和span-80的体积比例为10：1至50：1；常温搅拌1-2小时，加入戊二醛，在40℃至45℃反应1-2小时，调节ph至9-10，然后升温至70℃至75℃，得到的产物用丙酮、石油醚和n,n二甲基甲酰胺清洗和过滤，最后用超纯水充分清洗过滤，并得到水溶性的甲基壳聚糖纳米微球；把甲基壳聚糖纳米微球溶解在试剂r1或者试剂r2中，以形成分散状态的水溶性的甲基壳聚糖纳米微球。
7、优选地，试剂r1中，th i o-nad的浓度500mg/l～1000mg/l；缓冲液a的浓度范围为10mmo l/l～100mmo l/l；表面活性剂的浓度按质量百分含量计为0.05-5％；稳定剂a的浓度范围为1000mg/l～5000mg/l。
8、优选地，试剂r2中，3α-hsd的浓度为10-50ku/l；还原型辅酶ⅰ的浓度为0.1-2g/l；缓冲液b的浓度为10-100mmo l/l；缓冲液b的浓度范围为10mmo l/l～100mmo l/l；稳定剂b的浓度为1000mg/l～5000mg/l。
9、优选地，，缓冲液a和缓冲液b为goods缓冲液、三(三羟甲基氨基甲烷)缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或多种；
10、所述的稳定剂选自海藻糖、甘露醇、聚乙二醇的一种或多种；
11、表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚和聚乙二醇对异辛基苯基醚中的至少一种。
12、本发明提供的一种试剂盒，采用如权利要求1至5中任一项所述的稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂制成试剂盒。
13、本发明的有益效果如下：通过引入水溶性羧甲基壳聚糖，其能够明显的提高试剂盒的保质期。从原理上来说，首先，这种试剂水溶性羧甲基壳聚糖具有重金属离子的吸附络合作用，对于试剂中的微量的重金属离子能够进一步吸附络合，从而避免这些重金属离子对于试剂的影响。
14、另外，试剂盒在存放一段时间之后微生物就会增多，达到一定量之后就会影响到有效试剂的作用，例如容易降低th i o-nad和还原型辅酶ⅰ的活性，从而使得保质期缩短。水溶性羧甲基壳聚糖则为一种天然的抑菌物质，其可以很好地抑制微生物的生长，并且对于大分子蛋白等具有很好的吸附附着作用，因此进一步避免了对于试剂成分后期检测的影响。
15、再者，水溶性羧甲基壳聚糖分身具有良好分散性，并且其可用于载药用途，因为这种材料本身就具有对于小分子药物的吸附性能，因此可以负载部分th i o-nad、还原型辅酶ⅰ和3α-羟类固醇脱氢酶试剂3α-hsd，使得这些分子更好的分散，并且可依附在水溶性羧甲基壳聚糖的表面，这样提高这些分子的稳定性，避免在试剂中经过长时间存放后发生沉淀或者反应的问题。
16、需要说明的是，水溶性羧甲基壳聚糖经过一段时间存放之后，纳米颗粒可能会转换为普通游离状态的分子而分散在水中，但是这不会影响试剂的稳定性，水溶性羧甲基壳聚糖依然具有离子吸附作用和抑菌性能。
1.一种稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂，包括试剂r1和试剂r2，试剂r1包括β-硫烟酰胺腺苷二核苷酸氧化型试剂thio-nad、缓冲液a、表面活性剂和稳定剂a；
2.根据权利要求1所述的稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂，其特征在于，水溶性羧甲基壳聚糖的浓度为1mmol/l～10mmo l/l。
3.根据权利要求1所述的稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂，其特征在于，先制备形成水溶性羧甲基壳聚糖纳米微球，将水溶性羧甲基壳聚糖溶于2％质量浓度的乙酸溶液中，超声混合，然后加入至液体石蜡和span-80混合溶剂中，液体石蜡和span-80的体积比例为10：1至50：1；常温搅拌1-2小时，加入戊二醛，在40℃至45℃反应1-2小时，调节ph至9-10，然后升温至70℃至75℃，得到的产物用丙酮、石油醚和n,n二甲基甲酰胺清洗和过滤，最后用超纯水充分清洗过滤，并得到水溶性的甲基壳聚糖纳米微球；把甲基壳聚糖纳米微球溶解在试剂r1或者试剂r2中，以形成分散状态的水溶性的甲基壳聚糖纳米微球。
4.根据权利要求1所述的稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂，其特征在于，试剂r1中，thio-nad的浓度500mg/l～1000mg/l；缓冲液a的浓度范围为10mmo l/l～100mmo l/l；表面活性剂的浓度按质量百分含量计为0.05-5％；稳定剂a的浓度范围为1000mg/l～5000mg/l。
5.根据权利要求1所述的稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂，其特征在于，
6.根据权利要求1所述的稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂，其特征在于，缓冲液a和缓冲液b为goods缓冲液、三(三羟甲基氨基甲烷)缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或多种；
7.一种试剂盒，其特征在于，采用如权利要求1至5中任一项所述的稳定性能长达24个月的总胆汁酸测定试剂制成试剂盒。
