本申请涉及一种重组蛋白以及在治疗有需要的受试者的疾病或病状中的用途。
背景技术：
1、神经调节蛋白(nrg；调蛋白，hrg)，也称为胶质细胞生长因子(ggf)和新分化因子(ndf)，是一种分子量为44kd的糖蛋白。nrg蛋白家族具有四个成员：nrg-1、nrg-2、nrg-3以及nrg-4。nrg(包含nrg-1)在心脏的发育中起着特别重要的作用。作为erbb家族的酪氨酸激酶受体的配体，nrg-1直接与膜结合的erbb3或erbb4结合，从而诱导二聚化以产生erbb2/erbb4、erbb2/erbb3、erbb3/erbb3和erbb4/erbb4复合物以及随后的细胞内信号传导。在动物模型中，nrg的表达诱导旁分泌信号传导以促进胚胎发生期间心脏组织的生长和分化，其中erbb2、erbb4或nrg-1中任何一个的缺失会导致胚胎致死。进一步地，已经表明阻断erbb2受体信号传导的癌症疗法具有显著的心脏毒性副作用，这证明人体内erbb2介导的信号传导不仅对发育而且对健康心脏组织的体内平衡均至关重要。
2、证据还表明，nrg-1信号转导在其它器官系统的发育和功能以及人类疾病(包含精神分裂症和头颈癌)的发病机理中起一定作用。nrg-1有许多异构体。对基因突变小鼠(基因敲除小鼠)的研究指示，具有不同n端区域或egf样结构域的异构体具有不同的体内功能。本发明基于nrg-1βa2同种型。
3、内源性nrg-1与erbb3(her3)和erbb4(her4)两者结合并通过所述两者诱导信号传导。许多临床前和临床研究已表明，nrg-1主要通过其与心肌细胞表达的erbb4(her4)的相互作用而在多种心血管适应症中具有治疗潜力。然而，三个关键因素限制了重组人nrg-1(rhnrg-1)的临床应用和效用。首先，nrg-1通过her3的信号传导可能会促进癌症的发展和/或进展，这引起了对任何需要长期施用或没有严重心血管(cv)风险因素的应用的明显担忧。第二，nrg-1对her3的过度激活可能会破坏胃肠(gi)上皮完整性和体内平衡，从而导致严重的gi毒性，并且因此导致nrg-1的治疗窗的丧失。第三，rhnrg-1的两个临床阶段活性蛋白片段均显示出较短的半衰期，这指示可能需要繁重的给药和施用方案来达到期望的治疗暴露水平。因此，需要提供一种基于nrg-1的治疗剂，所述基于nrg-1的治疗剂保留了对各种心血管适应症的临床上显著的治疗潜力，但肿瘤发生或促进癌症进展的风险更低，gi耐受性更好并且药代动力学(pk)分布更有利。
4、本发明通过提供一种重组蛋白来满足这些需求，所述重组蛋白包括rhnrg-1活性结构域与her3特异性拮抗剂抗体的融合物：her3信号传导以减轻rhnrg-1的致瘤风险和gi毒性的方式被阻断，同时抗体主链形式赋予典型单克隆抗体的分子半衰期，从而使产品的给药和施用能够更加方便。
技术实现思路
1、在一方面，本发明涉及一种重组融合蛋白，所述重组融合蛋白包括心脏保护蛋白神经调节蛋白-1(nrg-1)的片段，所述片段与单克隆抗体(mab)主链融合。在相关方面，nrg-1片段通过连接子与抗体重链的c端融合。在另一个相关方面，nrg-1通过nrg-1的n端上的第一(第1)氨基酸连接到所述连接子，在一个实施例中，所述第一氨基酸为丝氨酸(s或ser)氨基酸。在相关方面，片段是包括nrg-1的活性结构域的活性片段。在另一个相关方面，mab对erbb3(her3)具有单特异性。在另一个相关方面，nrg-1是nrg-1β2a同种型。
2、在另一个方面，本发明涉及一种药物组合物，所述药物组合物包括重组融合蛋白和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，所述重组融合蛋白包括心脏保护蛋白神经调节蛋白-1(nrg-1)的片段，所述片段与抗her3单克隆抗体主链融合。
3、在另一个方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，所述方法包括施用治疗有效量的重组融合蛋白或本文公开的包括所述重组融合蛋白的药物组合物。
4、在另一个方面，本发明涉及一种预防、抑制、阻止或延迟受试者的心血管疾病或病状的发作的方法，所述方法包括施用有效量的本文公开的重组融合蛋白。
5、在另一个方面，本发明涉及一种治疗有需要的受试者的cns相关疾病或病状的方法，所述方法包括施用治疗有效量的重组融合蛋白。
6、在另一个方面，本发明涉及一种预防、抑制、阻止或延迟受试者的cns相关疾病或病状的发作的方法，所述方法包括施用有效量的重组融合蛋白。
7、在另一个相关方面，nrg-1与erbb4(her4)结合并通过erbb4(her4)诱导信号传导。在另一个相关方面，mab通过erbb3(her3)抑制nrg-1信号传导。
8、在另一个方面，本发明涉及一种试剂盒，所述试剂盒包括有效量的本发明的重组融合蛋白或包括本发明的重组融合蛋白的药物组合物。
9、根据以下详细实例和附图，本发明的其他特征和优点将是显而易见的。然而，应当理解尽管详细描述和具体实例表示本发明的实施例，然而它们仅以说明的方式给出，因为处于本发明的精神和范围内的不同变化和修改对于本领域技术人员从此详细说明将是显而易见的。
1.一种重组融合蛋白，其包含心脏保护蛋白神经调节蛋白-1(nrg-1)的活性片段，所述片段与单特异性erbb3(her3)单克隆抗体(mab)融合，所述mab包括包含fc结构域的重链和轻链，其中所述nrg-1活性片段与erbb4(her4)结合并通过所述erbb4(her4)诱导信号传导，并且所述mab抑制通过erbb3(her3)的nrg-1信号传导。
2.根据权利要求1所述的重组融合蛋白，其中所述nrg-1活性片段包含nrg-1β2a同种型。
3.根据权利要求1或2所述的重组融合蛋白，其中所述nrg-1活性片段通过其n端氨基酸使用连接子与抗体重链的c端融合。
4.根据权利要求3所述的重组融合蛋白，其中所述连接子包含seq id no:5所示的gly-gly-gly-gly-ser-gly-gly-gly-gly-ser连接子的至少一个拷贝。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述抗体重链的c端包含所述抗体的fc结构域。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述单克隆抗体是经过糖基化的。
7.根据权利要求6所述的重组融合蛋白，其中糖基化是n-糖基化或o-糖基化。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述nrg-1片段包含seq idno:4的氨基酸序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述重链包含seq id no:2的氨基酸序列。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述轻链包含seq id no:3的氨基酸序列。
11.根据权利要求1-8中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述mab包含seq id no:2的氨基酸234、239和434的至少一个中的取代突变。
12.根据权利要求11所述的重组融合蛋白，其中所述至少一个取代突变包含l234f突变、s239a突变、n434a突变或其组合。
13.根据权利要求1-8中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白包含seqid no:3和seq id no:14的氨基酸序列。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的重组融合蛋白，其中相对于重组nrg-1，所述重组融合蛋白减弱了肿瘤或癌细胞的增殖。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白促进心肌细胞增殖、分化和存活。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白促进心脏组织的增殖、分化和存活。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的重组融合蛋白，其中所述重组融合蛋白诱导抗体依赖性细胞毒性(adcc)的能力降低。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的重组融合蛋白，其中相对于重组nrg-1的信号诱导潜力，所述重组融合蛋白优先于her2/3信号传导促进her2/4信号传导。
19.一种重组核酸分子，其对根据权利要求1-18中任一项所述的重组融合蛋白进行编码。
20.根据权利要求19所述的重组核酸分子，其中所述mab的重链由包含seq id no:6或seq id no:7的序列编码。
21.根据权利要求19或20所述的重组核酸分子，其中所述mab的轻链由包含seq id no:8的序列编码。
22.一种重组载体，其包含根据权利要求19-21中任一项所述的核酸分子。
23.一种重组细胞，其包含根据权利要求22所述的重组载体。
24.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-18中任一项所述的重组融合蛋白。
25.一种试剂盒，其包含有效量的根据权利要求1-18中任一项所述的重组融合蛋白或根据权利要求24所述的药物组合物。
26.根据权利要求1-18中任一项所述的重组融合蛋白或根据权利要求24所述的药物组合物或根据权利要求25所述的试剂盒在制备用于治疗、预防、抑制、阻止有需要的受试者的心血管疾病或延迟其发作的药物中的用途。
27.根据权利要求26所述的用途，其中所述治疗减轻所述受试者的所述心血管疾病的体征或症状。
28.根据权利要求26或27所述的用途，包括以0.1mcg/kg至5mg/kg的重组融合蛋白向所述受试者施用药物。
29.根据权利要求26-28中任一项所述的用途，其中所述心血管疾病是收缩性心力衰竭。
30.根据权利要求26-28中任一项所述的用途，其中所述心血管疾病是慢性心力衰竭/充血性心力衰竭(chf)、急性心力衰竭/心肌梗塞(mi)、左心室收缩功能障碍、与mi有关的再灌注损伤、化疗诱导的心脏毒性(成人或小儿)、放射诱导的心脏毒性、小儿先天性心脏病的外科手术干预的附加物。
31.根据权利要求30所述的用途，其中所述化疗诱导的心脏毒性是由于受试者接受用作化疗的蒽环类药物、烷化剂、抗微管剂或抗代谢药剂引起的。
32.根据权利要求26-28中任一项所述的用途，其中所述心血管疾病包含由于受试者接受癌症疗法而引起的心脏毒性。
33.根据权利要求32所述的用途，其中所述癌症疗法是her-2靶向疗法，优选地所述her-2靶向疗法包括使用曲妥珠单抗(trastuzumab)、ado-曲妥珠单抗(ado-trastuzumab)、美坦新(emtansine)、拉帕替尼(lapatinib)、来那替尼(neratinib)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、任何抗her2抗体、任何抗her2药剂或其组合。
34.一种生产根据权利要求1-18中任一项所述的重组融合蛋白的方法，其中所述方法包括：
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述真核宿主细胞包括cho细胞，优选地所述cho细胞包括cho-k1细胞。
