本申请属于癌症患者营养供给，尤其涉及一种癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法、改善患者免疫力的方法及其应用。
背景技术：
1、癌症患者由于肿瘤压迫、转移或炎症反应等原因往往合并胸腔积液，导致呼吸困难、胸痛等症状。为缓解症状、减轻患者痛苦，在治疗原发疾病(放化疗、靶向治疗)同时，需要予以胸腔积液抽液、引流等对症处理。超声引导经皮胸腔穿刺置管引流术，可在超声影像实时引导下穿刺进针，放置引流管，具有精准、微创、疗效显著等优点，在多种疾病引起的胸腔积液对症处理中得到广泛应用。但是，这种方法在有效实现肺复张、缓解呼吸困难等症状的同时，导致蛋白质和其他营养物质的大量丢失，影响患者的营养状态和免疫功能。
2、胸腔积液中含有大量的蛋白质，包括白蛋白、免疫球蛋白等重要成分。这些蛋白质对于维持机体正常的生理功能至关重要。在进行胸腔积液抽取时，如果能有效回收这些蛋白质，不仅可以减少营养物质的损失，提高患者的生活质量，还可以减轻医疗系统对这类昂贵蛋白质补充剂的依赖。因此，开发一种有效提取癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的方法，对于提升患者治疗效果、改善患者预后具有重要意义。
3、现有的蛋白回收技术主要包括以下几种：
4、1.离心浓缩法：利用高速离心机对胸腔积液样本进行离心，使蛋白质等大分子物质沉淀，然后将沉淀物收集起来。这种方法较为简单，但对设备要求较高，且操作过程中容易造成蛋白质变性。
5、2.超滤法：利用超滤膜的选择透过性，将胸腔积液中的小分子物质和水分透过膜，而保留大分子的蛋白质。这种方法效率较高，且可以在低温下进行，减少蛋白质变性风险，但蛋白回收较低，且操作较为繁琐难以推广应用。
6、3.凝胶过滤法：利用凝胶过滤柱对胸腔积液进行分离，根据蛋白质分子大小不同进行分级回收。这种方法适用于较大规模的蛋白质回收，但设备复杂，操作时间较长。
7、4.电泳法：利用电场作用将蛋白质按照其电荷和分子量进行分离，然后回收目标蛋白。这种方法分辨率高，但对操作技术要求较高，适合实验室条件下的小规模蛋白质回收。
8、5.免疫沉淀法：利用特异性抗体与目标蛋白结合形成沉淀，然后收集沉淀物。这种方法具有高度特异性，适合回收特定种类的蛋白质，但成本较高，且需要相应的抗体制备。
9、然而，上述蛋白回收方法均未用于胸腔积液的活性蛋白回收。癌症患者胸腔积液活性蛋白自体回收，具有一定的特殊性：
10、1.高含量的肿瘤标志物：胸腔积液中常含有较高浓度的肿瘤标志物(如癌胚抗原、癌抗原125等)，这些标志物可以用于疾病监测和治疗效果评估。
11、2.炎症和免疫反应：癌症相关的胸腔积液通常伴有显著的炎症反应，包含大量的细胞因子和炎症介质。这些成分可能会影响蛋白质的回收和纯化过程。
12、3.异质性：胸腔积液的成分可能因患者的癌症类型、阶段和个人差异而显著不同，这使得标准化处理和回收过程具有挑战性。
13、4.治疗应用潜力：回收的活性蛋白可能具有治疗潜力，例如用于免疫治疗或作为治疗剂的载体。
14、5.患者个体化治疗：自体回收的活性蛋白可以用于患者的个体化治疗，提供更精确和针对性的治疗方案，这在个性化医学领域具有重要意义。
15、综上所述，考虑到胸腔积液中蛋白质的价值以及对患者健康的重要性，开发一种高效的蛋白回收技术显得尤为迫切和有益。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法、改善患者免疫力的方法及其应用，旨在解决采用现有的方法对胸腔积液进行处理导致蛋白质和其他营养物质的大量丢失，影响患者的营养状态和免疫功能的问题。
2、为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
3、第一方面，本申请提供一种癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法，包括：
4、将胸腔积液和乙醇的温度均冷却至≤4℃；
5、将胸腔积液和乙醇混合且搅拌，乙醇的体积为胸腔积液体积的50％～70％；
6、调节体系的ph值至6.8～7.2，后置于温度≤4℃的环境中冷藏2～4小时；
7、对冷藏完成的体系进行离心分离，获得沉淀的蛋白质。
8、作为一种可能的设计，所述乙醇的体积为胸腔积液体积的60％～70％。
9、作为一种可能的设计，所述胸腔积液和乙醇的温度均冷却至-10～4℃。
10、作为一种可能的设计，将胸腔积液和乙醇混合，具体如下：
11、将乙醇加入胸腔积液中，每分钟加入乙醇的量大约为积液体积的5-10％。
12、作为一种可能的设计，所述ph值至6.8～7.0。
13、作为一种可能的设计，所述分离提取方法还包括对胸腔积液冷却前进行预处理，所述预处理包括过滤或离心。
14、作为一种可能的设计，所述分离提取方法还包括对获得的蛋白质进行纯化，所述纯化包括采用滤纸或微孔滤膜进行过滤。
15、作为一种可能的设计，所述离心分离中离心转速为2000～3000rpm，分离时间为3～6min。
16、第二方面本申请提供一种改善患者免疫力的方法，将分离提取方法获得的蛋白质输回所述患者体内。
17、本发明的有益效果为：
18、1、高回收率：冷乙醇沉淀条件(不同乙醇浓度)可显著提高胸腔积液中有效蛋白的回收率，最大限度地减少蛋白质的损失，保留更多有价值的生物活性物质。
19、2、良好的蛋白质完整性和活性保持：低温条件下进行的蛋白质沉淀有助于减少蛋白质因热变性而失活的风险，从而更好地保留蛋白质的原有结构和生物学功能。
20、3、安全性提高：通过冷乙醇法处理，可有效去除胸腔积液中的细菌、病毒等潜在病原体，提高了回收蛋白质的安全性，为后续的临床应用提供了保障。
21、4、操作简便与成本效益：该方法操作简单，不需要复杂的设备或高昂的操作成本，相较于其他蛋白质分离技术具有明显的成本优势，特别适合于资源有限的医疗环境。
22、5、环境友好：冷乙醇法相比化学法少用或不用有害化学试剂，处理过程对环境的影响较小，是一种更环保的蛋白质回收方法。
23、6、广泛的适用性：该技术不仅适用于胸腔积液中蛋白的回收，同样也可以用于其他体液或生物样本中蛋白质的分离与提纯，具有广泛的应用前景。
24、7、提升患者治疗体验和预后：通过有效回收和再利用胸腔积液中的蛋白质，减少了患者体内蛋白质的流失，有助于改善患者的营养状态和免疫力，从而可能提升治疗效果和患者的生活质量。
25、8、降低医疗成本：通过减少对外源性蛋白质(如人工合成的白蛋白)的依赖，降低了治疗成本，对医疗系统和患者都具有经济上的益处。
26、综上所述，冷乙醇法在回收胸腔积液中的有效蛋白方面预期能带来显著的技术改进和多方面的好处，对于临床治疗和患者康复具有重要的促进作用。
1.一种癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法，其特征在于，所述分离提取方法包括：
2.如权利要求1所述的癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法，其特征在于，所述乙醇的体积为胸腔积液体积的60%~70%。
3.如权利要求1所述的癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法，其特征在于，所述胸腔积液和乙醇的温度均冷却至-10~4℃。
4.如权利要求1所述的癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法，其特征在于，将胸腔积液和乙醇混合，具体如下：
5.如权利要求1所述的癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法，其特征在于，所述ph值至6.8~7.0。
6.如权利要求1所述的癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法，其特征在于，所述分离提取方法还包括对胸腔积液冷却前进行预处理，所述预处理包括过滤或离心。
7.如权利要求1所述的癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法，其特征在于，所述分离提取方法还包括对获得的蛋白质进行纯化，所述纯化包括采用滤纸或微孔滤膜进行过滤。
8.如权利要求1所述的癌症患者胸腔积液自体活性蛋白的分离提取方法，其特征在于，所述离心分离中离心转速为2000~3000rpm，分离时间为3~6min。
9.一种改善患者免疫力的方法，其特征在于，将权利要求1-8任一项所述分离提取方法获得的蛋白质输回所述患者体内。
10.一种权利要求1-8任一项所述分离提取方法在蛋白质的分离与提纯中的应用。
