本发明涉及基因工程领域，特别是涉及一种猪b细胞增殖诱导配体蛋白及其制备方法和应用。
背景技术：
1、猪肠道病毒病对养猪业发展造成巨大经济损失，主要包括传染性胃肠炎病(tge)、猪流行性腹泻病(ped)、猪德尔塔冠状病(pdco)和猪急性腹泻综合征冠状病(sads-co)。其中猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，ped)是常见的猪肠道病毒病，由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，pedv)引起的，一种高度接触性肠道传染病，主要通过口鼻途径感染，能在肠道上皮细胞定殖并大量繁殖，造成肠上皮细胞和肠绒毛的损伤和脱落，从而导致剧烈的腹泻症状和猪只脱水死亡，是长期以来危害养猪业健康发展的常见疾病之一。接种疫苗是当前预防ped最经济有效的措施，但由于pedv变异株的不断出现，疫苗的免疫保护效果不佳。因此，急需研发更加安全、高效的疫苗来预防ped。
2、研究显示高效刺激黏膜免疫对于ped的防治至关重要，研究猪黏膜免疫应答对于设计防控猪肠道病毒病的黏膜疫苗具有重要意义。疫苗主要是通过体液免疫及细胞免疫发挥作用，猪黏膜免疫应答的相关研究较少，其中参与猪黏膜免疫应答的多种细胞因子作用尚不清楚。已知细胞因子是调节细胞功能的重要蛋白质，涉及免疫反应、细胞增殖和分化等生物学过程。随着生物技术的发展，新的细胞因子被不断发现，对其作用机制和生物学功能的认识也在不断深入。
3、增殖诱导配体(proliferation-inducing ligand，april)为肿瘤坏死因子家族成员，在人类医学研究中，april被发现参与b细胞发育成熟和刺激浆细胞形成。然而，目前尚未见猪april蛋白表达及制备的研究，其在猪黏膜免疫应答中的作用也尚不清晰。虽然目前没有关于april对pedv作用的研究，但有研究成果表明，在pedv的感染和免疫反应中，宿主细胞因子在分子机制可能发挥了重要功能。未来可能会有更多的研究揭示april在pedv感染中的潜在作用。基于上述问题，本发明所要解决的问题在于制备猪b细胞增殖诱导配体并鉴定其基本功能。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种猪b细胞增殖诱导配体蛋白及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明去除april蛋白跨膜区得到april重组蛋白的氨基酸序列，之后构建重组载体，在大肠杆菌表达系统中表达、纯化，经鉴定该重组蛋白能够保证猪b细胞存活的功能。
2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
3、本发明提供一种猪b细胞增殖诱导配体蛋白，其氨基酸序列如seq id no：1所示。
4、本发明还提供一种猪b细胞增殖诱导配体蛋白相关的生物材料包括如下任一项：
5、(1)编码权利要求1所述的猪b细胞增殖诱导配体蛋白的核酸分子；
6、(2)含有所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组菌。
7、优选的是，所述核酸分子的序列如seq id no：2所示。
8、本发明还提供一种猪b细胞增殖诱导配体蛋白的制备方法，包括以下步骤：
9、获取编码猪b细胞增殖诱导配体蛋白的基因序列，并将所述基因序列与表达载体构建重组载体；
10、在受体菌中表达所述重组载体，得到重组菌；
11、对所述重组菌进行诱导培养，从菌体中分离纯化得到所述猪b细胞增殖诱导配体蛋白。
12、优选的是，所述基因序列如seq id no：2所示：
13、caacaaacagaattacagactctaagaagggaggttacccgcctgcaacgtaccggtggtccatcggaaaaaggtgagggcgacccgtggcaaaacctgtgggagcaagagcaaagcccggacggcgcggaagcctgggaaaatggcgaacgttctcgccgtcgccgagctgtgttgacccgcaagcagaaaaagaagcgctccgtgttgcacctggttccgaccaacatcaccagcaaagaggatagcgatgtgacggaactgatgtggcagccggcgttaaaacgtggccgtggtctggaggcgcagggctacttcgttcgtgtttgggatgctggtgtatacctgctgtattcccaggttctcttccacgacgtcaccttcaccatgggtcaagttgtcagccgtgaaggccagggtcgtcaggagactctgtttcgttgtattcgctctatgccgagcaatccggactgggcatataacagctgctacagcgcaggcgtgtttcatttgcatcagggcgatattctgagcgttgtcatcccgagagcgcgtgcgaaattgtccctgtcaccgcatggtacgtttctgggtgtggtgaagctt。
14、优选的是，所述受体菌为大肠杆菌。
15、优选的是，所述重组菌诱导培养的条件为：采用异丙基硫代半乳糖苷(iptg)诱导，诱导浓度为0.2mmol/l-1.0mmol/l；于16℃、200rpm条件培养8-24h收菌。
16、优选的是，所述分离纯化包括以下步骤：
17、将收集的菌体重悬，超声破碎，收集上清液；
18、将所述上清液过滤后，加入镍柱，采用20mm-500mm的咪唑洗脱液进行洗脱，收集不同浓度的洗脱液。
19、本发明还提供所述的猪b细胞增殖诱导配体蛋白在如下任一项中的应用：
20、(1)在制备提高猪b细胞存活率的产品中的应用；
21、(2)在研究猪黏膜免疫应答的作用机制中的应用；
22、(3)在研究猪b细胞增殖诱导配体蛋白在猪流行性腹泻病毒感染中的作用机制中的应用。
23、本发明公开了以下技术效果：
24、本发明通过预测增殖诱导配体蛋白二级结构、功能域和跨膜区后，获取去除跨膜区的重组蛋白氨基酸序列。基于基因工程技术，本发明构建了表达去除跨膜区的增殖诱导配体重组蛋白的重组载体，并在大肠杆菌表达系统中进行表达、纯化，经鉴定该去除跨膜区的增殖诱导配体重组蛋白抑制igm+b细胞的增殖，但有效保证b细胞的存活，这对进一步研究增殖诱导配体在pedv的感染和免疫反应中的作用具有重要的科学意义和研究价值。
1.一种猪b细胞增殖诱导配体蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no：1所示。
2.一种猪b细胞增殖诱导配体蛋白相关的生物材料包括如下任一项：
3.如权利要求2所述的生物材料，其特征在于，所述核酸分子的序列如seq id no：2所示。
4.一种猪b细胞增殖诱导配体蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述基因序列如seq id no：2所示。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述受体菌为大肠杆菌。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述重组菌诱导培养的条件为：采用异丙基硫代半乳糖苷诱导，诱导浓度为0.2mmol/l-1.0mmol/l；于16℃、200rpm条件培养8-24h收菌。
8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述分离纯化包括以下步骤：
9.如权利要求1所述的猪b细胞增殖诱导配体蛋白在如下任一项中的应用：
