一种转基因作物通用内标的制作方法

专利2025-08-01  13


本发明涉及核酸检测,具体涉及一种转基因作物通用内标。


背景技术:

1、本节中的陈述仅提供与本申请公开相关的背景信息,并且可能不构成现有技术。

2、许多国家制定了转基因生物(genetically modified organisms,gmo)相关的法律法规,以保证市场上食品/饲料产品的可追溯性,并保护消费者的选择自由。因此,为了执行这些法律人们开发了几种主要基于dna的转基因作物检测方法。由于荧光定量pcr(qpcr)具有高灵敏度、高特异性、防污染等诸多优点,已经成为转基因作物常规检测的首选方法。

3、就荧光定量pcr检测方法流程而言,主要分为样本的采集、样本的处理(核酸提取)、上机检测和结果分析。样本的采集和处理对最终的结果尤为重要,当样本采集或处理方法不正确时,有可能导致待检测核酸的丢失而引起假阴性的结果。在传统的分子诊断领域,会通过设计内标(internal control,ic)来监测样本的采集和处理过程。当阳性质控品扩增正常,而样本内标没有扩增信号时,暗示了有可能在样本采集和处理过程不正确,该阴性结果可能有问题。因此,包含内标是检测试剂中非常重要的一部分。

4、基于荧光定量pcr技术检测转基因作物主要是通过设计引物探针检测转基因特征相关的基因,例如花椰菜花叶病毒35s启动子(cauliflower mosaic virus(camv)35spromoter)、草甘膦抗性基因(streptomyces viridiochromogenes phosphinothricin-acetyltransferase gene)、根癌农杆菌胭脂碱合酶基因终止子序列(agrobacteriumtumefaciens nopaline synthase(nos)terminator)等。这些序列的检测设计相对简单,在不同作物间是统一的,然而包含内标可能会对检测试剂厂家带来麻烦。转基因作物的检测不像是人类病原菌的体外诊断试剂盒。人用体外诊断试剂盒主要是检测人类病原菌,其内标仅需要根据人保守基因设计就可以满足要求。但是,转基因作物品种多样,例如大豆、番茄、油菜、土豆、玉米、水稻、棉花等等。因此,如果没有通用型的内标,虽然检测试剂本身是相同的,但依然要需要根据不同的检测对象来生产不同的检测试剂盒;终端使用的时候,也要根据检测作物的种类来进行适配。这会带来极大的不便。


技术实现思路

1、本发明的目的在于:针对目前针对不同植物需要分别设计试用不同的内标,使得检测过程变得复杂的问题,提供了一种转基因作物通用内标,其在大豆、玉米、油菜、番茄、土豆等作物中均可以良好的扩增,从而实现转基因作物检测试剂盒的统一化生产制造。

2、本发明的技术方案如下:

3、本发明一方面提供一种转基因作物通用内标,所述内标的引物序列如seq idno.1和seq id no.2所示,探针序列如seq id no.3所示。

4、根据一种优选的实施方式,所述通用内标能够用于检测玉米、油菜、水稻、棉花、土豆、大豆、番茄、春蓼、无子草莓、黄花九轮草、香堇菜、拟漆姑草和胡萝卜的基因组dna的存在。

5、根据一种优选的实施方式,所述通用内标能够应用于玉米、油菜、水稻、棉花、土豆、大豆、番茄、春蓼、无子草莓、黄花九轮草、香堇菜、拟漆姑草和胡萝卜的pcr检测中。

6、根据一种优选的实施方式,所述内标扩增核糖体rna28s基因序列。

7、根据一种优选的实施方式,所述探针为mgb型探针。

8、本发明另一方面提供一种转基因作物通用内标在玉米、油菜、水稻、棉花、土豆、大豆、番茄、春蓼、无子草莓、黄花九轮草、香堇菜、拟漆姑草和胡萝卜的基因检测中的应用。

9、与现有的技术相比本发明的有益效果是:

10、1、一种转基因作物通用内标,能够同时在超过10种以上的作物中实现良好扩增,进而能够作为多植物混合检测或单一检测中性质优良的内标,能够简化检测过程,为转基因作物检测试剂盒的统一化生产提供便利,无需根据检测对象来区分生产,大大提升了试剂盒制备效率。



技术特征:

1.一种转基因作物通用内标,其特征在于,所述内标的引物序列如seq id no.1和seqid no.2所示,探针序列如seq id no.3所示。

2.根据权利要求1所述的一种转基因作物通用内标,其特征在于,所述通用内标能够用于检测玉米、油菜、水稻、棉花、土豆、大豆、番茄、春蓼、无子草莓、黄花九轮草、香堇菜、拟漆姑草和胡萝卜的基因组dna的存在。

3.根据权利要求1所述的一种转基因作物通用内标,其特征在于,所述通用内标能够应用于玉米、油菜、水稻、棉花、土豆、大豆、番茄、春蓼、无子草莓、黄花九轮草、香堇菜、拟漆姑草和胡萝卜的pcr检测中。

4.根据权利要求1所述的一种转基因作物通用内标,其特征在于,所述通用内标扩增核糖体rna28s基因序列。

5.根据权利要求1所述的一种转基因作物通用内标,其特征在于,所述探针为mgb型探针。

6.一种转基因作物通用内标在玉米、油菜、水稻、棉花、土豆、大豆、番茄、春蓼、无子草莓、黄花九轮草、香堇菜、拟漆姑草和胡萝卜的基因检测中的应用。


技术总结
本发明涉及核酸检测技术领域,本发明公开了一种转基因作物通用内标,本发明通用内标的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示,探针序列如SEQ ID NO.3所示。本发明的通用内标能够用于多种植物的基因检测中使用,包括玉米、油菜、水稻、棉花、土豆、大豆、番茄、春蓼、无子草莓、黄花九轮草、香堇菜、拟漆姑草和胡萝卜等,从而有利于统一的试剂盒制备,简化转基因植物检测操作。

技术研发人员:金雅康,苏景和,谢敏,邱成秀,李欣悦,吴兴君,陆永华
受保护的技术使用者:苏州莱必德生物技术有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/11/11
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