本公开内容总体上涉及包含甲病毒复制子和抗原的有效疫苗，以及用于针对抗原治疗和/或免疫的方法和组合物的领域。特别地，本公开内容涉及用于冠状病毒例如sars-cov-2(covid-19)的疫苗。
背景技术：
1、冠状病毒是一个大的病毒科，其通常引起轻度至中度上呼吸道疾病，如普通感冒。然而，在过去的二十年里，三种新的冠状病毒已从动物宿主中出现，以引起严重且广泛的疾病和死亡。
2、存在数百种冠状病毒，其中大多数在此类动物如猪、骆驼、蝙蝠和猫中传播。有时，这些病毒转移至人类-称为溢出(spillover)事件-并且可以引起疾病。使人生病的已知的七种冠状病毒中的四种仅引起轻度至中度疾病。三种可以引起更严重甚至致命的疾病。sars冠状病毒(sars-cov)于2002年11月出现，并且引起严重急性呼吸综合征(sars)。该病毒在2004年消失。中东呼吸综合征(mers)由mers冠状病毒(mers-cov)引起。从骆驼中的动物宿主传播的mers于2012年9月被鉴定，并且继续引起零星和局部暴发。本世纪出现的第三种新型冠状病毒被称为sars-cov-2。它引起2019冠状病毒病(covid-19)，并且在2020年3月11日被世界卫生组织(world health organization)宣布为全球大流行(冠状病毒：https://www.niaid.nih.gov/diseases-conditions/coronaviruses)。
3、大多数感染sars-cov-2病毒的人将经历轻度至中度呼吸道疾病，并且无需特别治疗即可康复。老年人和具有潜在医学问题如心血管疾病、糖尿病、慢性呼吸道疾病和癌症的那些人更有可能发展严重疾病。任何人都可能在任何年龄感染covid-19，并且患上严重疾病或死亡(冠状病毒疾病(covid-19):https://www.who.int/health-topics/coronavirus#tab＝tab_1)。
4、奥密克戎(omicron)(b.1.1.529变体)在2021年11月24日首次由南非向who报告为新的sars-cov-2变体。
5、初步证据提示，与其它关切变体(variant of concern)相比，再次感染奥密克戎的风险可能增加(即，先前已患有covid-19的人可以变得更容易再次感染奥密克戎)(关于奥密克戎的更新：https://www.who.int/news/item/28-11-2021-update-on-omicron)。
6、当前存在几种已获批准的针对covid-19的疫苗。特别地，mrna疫苗显示了超过95％的有效性。然而，需要向全世界提供更多的疫苗来预防这一大流行病。为了向全世界提供甚至对于任何变体都有效的疫苗，需要更多的疫苗开发，特别是基于允许在短时间内生产对于任何变体有效的疫苗的技术的疫苗。
7、引文列表
8、专利文献
9、ptl 1
10、wo2021/21068
技术实现思路
1、本公开内容的一个目的是提供一种新的设计概念，用于开发针对抗原例如病毒抗原、癌症抗原和其它抗原的疫苗，其有效预防或治疗传染病或癌症。
2、本公开内容涉及能够诱导针对抗原的免疫应答的新型抗原活性蛋白/多肽。本文公开的蛋白质/多肽包括融合至信号序列、跨膜结构域以及选自cd4+t细胞表位和cd8+t细胞表位的至少一种肽的抗原蛋白质。抗原蛋白质可以是衍生自冠状病毒结构蛋白或其片段的蛋白质。
3、冠状病毒结构蛋白可以包含刺突(s)蛋白、核衣壳(n)蛋白、膜(m)蛋白和小包膜(e)蛋白。抗原蛋白质可以衍生自任何结构蛋白或其组合。抗原蛋白质的具体实例可以包括刺突蛋白的s1和/或s2亚基，且尤其是s1亚基的受体结合结构域(rbd)。
4、在另一个方面，本公开内容涉及编码上文讨论的新型抗原活性蛋白/多肽的新型多核苷酸，其能够诱导针对抗原蛋白质的保护。
5、在另一个方面，本公开内容涉及可以表达上文讨论的抗原活性蛋白/多肽的新型甲病毒复制子。甲病毒复制子包括多核苷酸例如编码甲病毒非结构蛋白nsp1、nsp2、nsp3和nsp4的rna，以及作为目的基因的编码上文讨论的抗原活性蛋白/多肽的多核苷酸。
6、在再一个方面，本公开内容涉及包含上文讨论的多肽或多核苷酸的疫苗。尤其地，本公开内容提供了一种疫苗，其包含编码甲病毒非结构蛋白nsp1、nsp2、nsp3和nsp4以及多肽的多核苷酸，所述多肽包含融合至信号序列、跨膜结构域以及选自cd4+t细胞表位和cd8+t细胞表位的至少一种肽的抗原蛋白质。cd4+t细胞表位可以是通用表位。在抗原蛋白质是衍生自病毒结构蛋白的蛋白质的情况下，疫苗可以用于预防受试者免于病毒感染和/或治疗受试者的病毒感染。
7、在再一个方面，本公开内容涉及用于免疫、预防受试者免于病毒感染或治疗受试者的病毒感染的方法，其包括将有效量的上文讨论的多肽或多核苷酸施用于有此需要的受试者。
8、在另外一个方面，本公开内容涉及上文讨论的多肽或多核苷酸用于制造药剂的用途。
9、在进一步的方面，本公开内容涉及一种新型多核苷酸，其编码甲病毒非结构蛋白nsp1、nsp2、nsp3和nsp4以及包含抗原肽的多肽，其中所述多核苷酸包含修饰的核苷(例如n1-甲基-假尿苷或5-甲基-胞苷或两者)。
10、这种有效的疫苗设计也应用于开发用于治疗癌症或炎性疾病的疫苗。
1.一种分离的多核苷酸，其编码甲病毒非结构蛋白nsp1、nsp2、nsp3和nsp4以及多肽，所述多肽包含融合至信号序列、跨膜结构域以及选自cd4+t细胞表位和cd8+t细胞表位的至少一种肽的抗原蛋白质。
2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述抗原蛋白质融合至cd4+t细胞表位，并且其中所述cd4+t细胞表位是泛dr表位(padre)。
3.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述抗原蛋白质是衍生自病毒、癌症或细胞因子的蛋白质。
4.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述抗原蛋白质是衍生自病毒或细菌的蛋白质，所述病毒或细菌选自严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(sars)、严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(sars-cov-2)、埃博拉病毒、hiv、乙型肝炎病毒(hbv)、流感病毒、丙型肝炎病毒(hcv)、人乳头状瘤病毒(hpv)、巨细胞病毒(cmv)、基孔肯雅病毒、呼吸道合胞病毒(rsv)、登革热病毒、正粘病毒科(orthymyxoviridae)病毒和结核分枝杆菌(mycobacteriumtuberculosis)。
5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述抗原蛋白质进一步融合至cd8+t细胞表位，并且其中所述cd8+t细胞表位是衍生自病毒的肽，所述抗原蛋白质衍生自所述病毒。
6.根据权利要求4或5所述的多核苷酸，其中所述抗原蛋白质衍生自冠状病毒。
7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述抗原蛋白质衍生自冠状病毒刺突(s)蛋白。
8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其中所述抗原蛋白质是冠状病毒刺突(s)蛋白中的s1和/或s2亚基。
9.根据权利要求8所述的多核苷酸，其中所述抗原蛋白质是冠状病毒刺突(s)蛋白中的s1亚基。
10.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述抗原蛋白质是冠状病毒s1亚基的受体结合结构域(rbd)。
11.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域衍生自流感血凝素(ha)、cd80或衍生自所述抗原蛋白质的修饰的跨膜结构域。
12.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域衍生自流感血凝素(ha)。
13.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述修饰的跨膜结构域包含covid-19刺突(s)蛋白的近膜结构域和跨膜结构域。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域和/或信号序列通过接头与所述抗原蛋白质融合。
15.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述冠状病毒是covid-19。
16.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是rna。
17.一种载体，其包含根据权利要求1所述的多核苷酸。
18.根据权利要求17所述的载体，其包含启动子，5'utr，编码甲病毒非结构蛋白nsp1、nsp2、nsp3和nsp4的多核苷酸，sg启动子，编码多肽的目的基因，所述多肽包含融合至信号序列、跨膜结构域以及选自cd4+t细胞表位和cd8+t细胞表位的至少一种肽的抗原蛋白质，3'utr和多聚a尾。
19.一种疫苗组合物，其包含根据权利要求1所述的多核苷酸或包含根据权利要求1所述的多核苷酸的载体、以及药学上可接受的递送媒介物。
20.根据权利要求18所述的疫苗组合物，其中所述递送媒介物是由一种或多种甲病毒结构蛋白组成的颗粒或脂质递送系统。
21.一种针对受试者中的抗原治疗、预防和/或免疫的方法，其包括将有效量的根据权利要求19所述的疫苗施用于有此需要的受试者。
22.一种分离的多核苷酸，其编码甲病毒非结构蛋白nsp1、nsp2、nsp3和nsp4以及多肽，所述多肽包含融合至信号序列、跨膜结构域以及选自cd4+t细胞表位和cd8+t细胞表位的至少一种肽的抗原蛋白质，其中所述多核苷酸包含修饰的核苷。
23.根据权利要求22所述的多核苷酸，其中所述修饰的核苷是修饰的胞苷和/或修饰的尿苷。
24.根据权利要求23所述的多核苷酸，其中所述修饰的胞苷是5-甲基-胞苷，且所述修饰的尿苷为n1-甲基-假尿苷。
25.根据权利要求22所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸中基本上100％的胞苷是修饰的胞苷。
26.根据权利要求22所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸中少于100％的尿苷是修饰的尿苷。
