本发明属于化合物提取制备，具体涉及一种双酯型儿茶素类化合物及制备方法。
背景技术：
1、儿茶素是一类广泛存在于植物体中的多酚化合物，具有2-苯基苯并吡喃骨架结构。儿茶素是茶叶中含量最为丰富的一类物质，其含量占茶叶干重质量的12-14％。
2、儿茶素类物质在植物次生代谢过程中，会形成种类多样的儿茶素单体，如儿茶素(c)、表儿茶素(ec)、表没食子儿茶素(egc)、表儿茶素没食子酸酯(ecg)、表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)等。这些儿茶素类化合物也表现出了包括抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌、和抗病毒等多方面的生物活性。羟基化和酯化是儿茶素类物质骨架上易发生的反应，除了反应发生数量和反应位点的变化而产生异构体外，儿茶素还会形成不同聚合度的聚合物，如二聚体、三聚体等。因此，茶叶中儿茶素类物质的形式多样，但这些化合物的结构也具有不稳定的特点，在外界加热作用下，儿茶素会发生氧化降解或发生异构化作用，转化成为其对应的立体异构体。
3、由于儿茶素类化合物结构相似，立体化学性质复杂,其中，双酯型儿茶素化合物的热不稳定性质更为突出，增大了物质基础研究的难度。现有茶叶纯化得到的儿茶素化合物种类较为固定，研究报道相对较少，提取制备方法也较为单一。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的问题，本发明设计的目的在于提供一种双酯型儿茶素类化合物及制备方法。具体通过以下技术方案加以实现：
2、1)将茶叶与甲醇水溶液混合，超声提取，过滤得到茶叶提取液；
3、2)在室温条件下，将所述茶叶提取液通过装有填料的填充柱进行反相液相色谱分离，收集15min-20min段馏分，得到第一馏分物，其中，以0.05％三氟乙酸水溶液为流动相a相，以甲醇为流动相b相；流动相梯度洗脱方式为0min-10min，8％-15％流动相b相；10min-40min，15％-25％流动相b相；40min-45min，25％-100％流动相b相；45min-60min，100％流动相b相；流速为80ml/min，进样量为125ml；填料为十八烷基键合固定相；
4、将第一馏分物置于冰箱内预冻3h-5h，转移至真空冷冻干燥机，减压冻干移除溶剂，得到样品粗组分；
5、3)在室温条件下，将所述样品粗组分通过装有填料的填充柱进行反相液相色谱分离，根据馏分液相制备谱图的色谱峰型收集馏分，收集19min-21.5min段洗脱色谱峰，得到第二馏分物，其中，以0.05％三氟乙酸水溶液为流动相a相，以乙腈为流动相b相；流动相梯度洗脱方式为0min-25min，15％-30％流动相b相；25min-30min，30％-95％流动相b相；30min-40min，95％流动相b相；流速为80ml/min，进样量为20ml；所述填料为十八烷基键合固定相；
6、将第二馏分物置于冰箱内预冻3h-5h，转移至真空冷冻干燥机，减压冻干移除溶剂，得到儿茶素精细组分；
7、4)在室温条件下，将所述儿茶素精细组分通过装有填料的填充柱进行反相液相色谱分离，根据馏分液相制备谱图的色谱峰型收集馏分，收集27min-30min和37min-39min段洗脱色谱峰，对应得到第三馏分物和第四馏分物，其中，以0.05％三氟乙酸水溶液为流动相a相，以甲醇为流动相b相；流动相梯度洗脱方式为0min-20min，25％流动相b相；20min-30min，25％-35％流动相b相；30min-45min，35％流动相b相；流速为80ml/min，进样量为80ml；所述填料由十八烷基键合固定相填料和异丙醇混合而成；
8、将第三馏分物和第四馏分物分别置于冰箱内预冻3h-5h，转移至真空冷冻干燥机，减压冻干移除溶剂，得到双酯型儿茶素类化合物；双酯型儿茶素类化合物为epigallocatechin-3,4'-di-o-gallate或gallocatechin-3,4'-di-o-gallate。
9、作为优选，所述茶叶为绿茶或黄茶或红茶或黑茶或白茶或青茶。
10、作为优选，所述茶叶超声提取时甲醇水溶液的浓度为12％-15％。
11、作为优选，所述茶叶和甲醇水溶液的质量体积比例为1g：40-60l。
12、作为优选，所述超声提取的时间为20min-30min，超声提取后抽滤留取滤液，并通过滤膜过滤得到茶叶提取液。
13、作为优选，所述滤膜的孔径为0.45μm-0.5μm。
14、作为优选，所述填充柱的柱床高度为260mm，直径为50mm。
15、作为优选，所述冰箱内温度、真空冷冻干燥机内温度均设置为-80℃。
16、上述制备方法制得的双酯型儿茶素类化合物，该双酯型儿茶素类化合物具有以下结构特征：
17、
18、本发明通过采用超声提取茶叶结合多步连续反相液相色谱分离纯化、减压冻干技术，通过采用特定的色谱和梯度洗脱条件，从茶叶中提取获得了未被报道的新化合物1
19、(epigallocatechin-3,4'-di-o-gallate)以及首次通过分离纯化得到的单体化合物3(gallocatechin-3,4'-di-o-gallate)，获得的双酯型儿茶素化合物纯度高，该制备方法可在茶叶成分研究和饮料食品行业或生物医药行业中获得应用，为茶叶的质量控制和商业开发提供一定的物质基础。
1.一种双酯型儿茶素类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种双酯型儿茶素类化合物的制备方法，其特征在于步骤1)中甲醇水的浓度为12-15％，茶叶和甲醇水的质量体积比为1g:40-60l。
3.如权利要求1所述的一种双酯型儿茶素类化合物的制备方法，其特征在于步骤1)中超声提取的时间为20-30min，超声提取后抽滤留取滤液，滤液通过滤膜过滤得到茶叶提取液。
4.如权利要求3所述的一种双酯型儿茶素类化合物的制备方法，其特征在于步骤1)中滤膜的孔径为0.45μm-0.5μm。
5.如权利要求1所述的一种双酯型儿茶素类化合物的制备方法，其特征在于色谱分离所使用的色谱柱的株高为260mm，直径为50mm。
6.如权利要求1所述的一种双酯型儿茶素类化合物的制备方法，其特征在于冰箱预冷冻的温度以及真空冷冻干燥机内温度均设置为-80℃。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的制备方法制得的双酯型儿茶素类化合物，该双酯型儿茶素类化合物具有以下结构特征：
