本发明属于生物医学，具体涉及耐药铜绿假单胞菌噬菌体组合物与应用。
背景技术：
1、铜绿假单胞菌原称绿脓杆菌，是假单胞菌属的代表菌种。为专性需氧的非发酵型革兰氏阴性单鞭毛杆菌，该菌广泛存在于水、土壤等自然环境和动物体内。
2、铜绿假单胞菌是临床上较常见的条件致病菌，是一种主要的医源感染的病原菌。该菌可引起菌血症和败血症、心内膜炎及呼吸道、消化道、尿路、中枢神经系统、骨关节、皮肤、五官等感染，易感因素包括：体弱、免疫功能低下、外伤、插管、手术、移植、使用呼吸机等。
3、铜绿假单胞菌具有异常复杂的耐药机制，包括：外膜通透性低、生物膜的形成、改变药物作用靶位、对抗生素产生抗性酶(如对氨基糖苷类和很多β-内酰胺类)、主动泵出系统等，对大多数临床常用的抗生素天然耐药，给临床治疗带来很大困难。随着抗生素的广泛、大剂量使用，其分离率在非发酵菌属中呈上升趋势。
4、噬菌体(bacteriophage，phage)是一类以特定的细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物作为宿主的病毒。与别的病毒相似，噬菌体的头部由包裹着遗传物质的蛋白质衣壳构成。有尾噬菌体还具有长短不一、形态多样的"尾巴"，用来特异性识别宿主菌，并将遗传物质注入宿主体内。与传统抗生素药物相比，噬菌体具有杀菌能力强、特异性高、安全性高、成本低等优势，且其杀菌能力不依赖于细菌的耐药性。因此，噬菌体在防治细菌感染尤其是耐药细菌感染方面展现出极大的应用潜力。
5、噬菌体无疑是克制耐药菌的有利武器，其应用范围十分广泛。早在100多年前，在噬菌体发现之初，欧洲一些国家已经尝试用其治疗痢疾等疾病。后来由于抗生素的发现和广泛使用，使得许多国家放弃了噬菌体治疗。随着细菌耐药性问题日益严重，噬菌体疗法重新得到重视，在国内外已经开展了多例噬菌体个性化治疗耐药菌感染的临床案例，展示了噬菌体治疗的巨大潜力。
6、目前噬菌体个性化治疗并没有得到广泛推广，国内外也没有已经上市的噬菌体药物。相较于传统的广谱抗生素，噬菌体治疗也面临特异性强、杀菌谱窄和细菌易发生耐受的瓶颈。
7、针对现有技术存在的问题，有必要针对耐药铜绿假单胞菌噬菌体进行研究，开发裂解谱更宽、效价更稳定的耐药铜绿假单胞菌噬菌体。
技术实现思路
1、本发明的目的是，提供耐药铜绿假单胞菌噬菌体组合物与应用。基于不同的天然噬菌体拥有不同的宿主谱范围，因此通过噬菌体组合可以一定程度上突破上述噬菌体治疗的瓶颈，大幅拓宽宿主谱，在临床治疗铜绿假单胞菌感染和环境净化中具有广阔的应用潜力。
2、本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
3、本发明提供一种铜绿假单胞菌噬菌体，所述噬菌体cp-p-pa-21006，保藏编号为：cgmcc no：45793；所述噬菌体于2023年12月04日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，分类命名为肌尾病毒家族myoviridae。
4、本发明还提供一种铜绿假单胞菌噬菌体，所述噬菌体cp-p-pa-21013，保藏编号为：cgmcc no：45794；所述噬菌体于2023年12月04日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，分类命名为短尾病毒家族podoviridae。
5、本发明还提供一种铜绿假单胞菌噬菌体，所述噬菌体cp-p-pa-22067，保藏编号为：cctcc m 20232436；所述噬菌体于2023年12月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，分类命名为短尾病毒家族podoviridae。
6、本发明还提供一种铜绿假单胞菌噬菌体，所述噬菌体cp-p-pa-23125，保藏编号为：cctcc m 20232438；所述噬菌体于2023年12月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，分类命名为肌尾病毒家族myoviridae。
7、本发明还提供一种铜绿假单胞菌噬菌体，所述噬菌体cp-p-pa-23129，保藏编号为：cctcc m 20232437；所述噬菌体于2023年12月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，分类命名为短尾病毒家族podoviridae。
8、本发明还提供一种铜绿假单胞菌噬菌体组合物，所述噬菌体组合物包括噬菌体cp-p-pa-21006，噬菌体cp-p-pa-21013，噬菌体cp-p-pa-22067，噬菌体cp-p-pa-23125或噬菌体cp-p-pa-23129中的任意两种以上的组合。
9、进一步，所述铜绿假单胞菌噬菌体组合物优选为噬菌体cp-p-pa-23129与噬菌体cp-p-pa-21006、噬菌体cp-p-pa-21013、噬菌体cp-p-pa-22067或噬菌体cp-p-pa-23125中的一种或多种组合而成。
10、本发明还提供所述铜绿假单胞菌噬菌体cp-p-pa-21006、噬菌体cp-p-pa-21013、噬菌体cp-p-pa-22067、噬菌体cp-p-pa-23125、噬菌体cp-p-pa-23129或铜绿假单胞菌噬菌体组合物在制备防治铜绿假单胞菌污染制剂或药物方面的应用。
11、本发明还提供一种用于防治铜绿假单胞菌的制剂，所述制剂包括噬菌体cp-p-pa-21006、噬菌体cp-p-pa-21013、噬菌体cp-p-pa-22067、噬菌体cp-p-pa-23125、噬菌体cp-p-pa-23129或所述铜绿假单胞菌噬菌体组合物。
12、进一步，所述制剂可以为抗菌药物和/或环境消杀剂。
13、进一步，所述防治铜绿假单胞菌的制剂可以为治疗铜绿假单胞菌感染的药物。
14、进一步，所述防治铜绿假单胞菌的制剂可以为消杀铜绿假单胞菌的环境净化剂。
15、与现有技术相比，本发明至少具有如下有益效果：
16、1，本发明从不同环境中分离多株铜绿假单胞菌噬菌体(共179株)，使用来自全国不同地区多家医院的临床耐药铜绿假单胞菌121株对分离的179株铜绿假单胞菌噬菌体进行裂解谱分析，发现其中两株铜绿假单胞菌噬菌体相对于其他噬菌体具有明显的裂解优势。其中，铜绿假单胞菌噬菌体cp-p-pa-21013和cp-p-pa-23129分别能够裂解44株和80株不同的铜绿假单胞菌，裂解谱明显优于现有技术，在临床应用中具有很大潜力。
17、2，本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体cp-p-pa-21013、cp-p-pa-22067、cp-p-pa-23129的最佳感染复数均为10-5，因此，该噬菌体在生产过程中，只需要极低量的母液或者种子液便能扩增出大量的子代噬菌体，具有很高的生产效率；cp-p-pa-21006的最佳感染复数为100；cp-p-pa-23125的最佳感染复数为10-2。噬菌体cp-p-pa-21006、cp-p-pa-21013、cp-p-pa-22067、cp-p-pa-23125和cp-p-pa-23129的效价均超过1×109pfu/ml；噬菌体cp-p-pa-21006、cp-p-pa-21013、cp-p-pa-22067、cp-p-pa-23125、cp-p-pa-23129的裂解期分别为25min、50min、10min、15min、15min，并且这些噬菌体能够在短时间内大量扩增，表明这些噬菌体具有高效的裂解活性。
18、3，本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体能够特异性杀死铜绿假单胞菌，不受细菌是否含有耐药基因的限制。
19、4，本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体组合物，拓宽了宿主谱和裂解能力，在临床治疗铜绿假单胞菌感染和环境净化中具有广阔的应用潜力。
20、5，本发明采用分离于不同地区的121株铜绿假单胞菌临床株，并进行噬菌体与宿主的互作分析，提供了铜绿假单胞菌噬菌体组合物，该噬菌体组合物与单株噬菌体相比，拓宽了所能裂解的宿主谱，覆盖率大幅提高。
21、6，本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体组合物拓宽了噬菌体裂解谱，增强了噬菌体对细菌的裂解效果。
22、7，本发明提供的铜绿假单胞菌噬菌体稳定性强，耐受温度和耐受ph范围较广，有利于噬菌体制剂的长期稳定保存，可在4℃下存放6个月后，效价降低小于一个数量级。
1.一种铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于：所述噬菌体cp-p-pa-23129，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc m 20232437，保藏日为2023年12月04日。
2.一种铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于：所述噬菌体cp-p-pa-21006，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：cgmcc no：45793，保藏日为2023年12月04日。
3.一种铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于：所述噬菌体cp-p-pa-21013，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：cgmcc no：45794，保藏日为2023年12月04日。
4.一种铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于：所述噬菌体cp-p-pa-22067，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc m 20232436，保藏日为2023年12月04日。
5.一种铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于：所述噬菌体cp-p-pa-23125，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc m 20232438，保藏日为2023年12月04日。
6.一种铜绿假单胞菌噬菌体组合物，其特征在于：所述噬菌体组合物包含如权利要求2所述的噬菌体cp-p-pa-21006，如权利要求3所述的噬菌体cp-p-pa-21013，如权利要求4所述的噬菌体cp-p-pa-22067，如权利要求5所述的噬菌体cp-p-pa-23125或如权利要求1所述的噬菌体cp-p-pa-23129中的任意两种或多种组合。
7.如权利要求6所述的铜绿假单胞菌噬菌体组合物，其特征在于：所述组合物包括噬菌体cp-p-pa-23129与下列噬菌体中的一种或多种：噬菌体cp-p-pa-21006，噬菌体cp-p-pa-21013，噬菌体cp-p-pa-22067或噬菌体cp-p-pa-23125。
8.如权利要求6所述的铜绿假单胞菌噬菌体组合物，其特征在于：铜绿假单胞菌噬菌体cp-p-pa-21006、cp-p-pa-21013、cp-p-pa-22067、cp-p-pa-23125、cp-p-pa-23129的特异性序列分别如seq no 1～5所示。
9.权利要求1-5任一项所述的铜绿假单胞菌噬菌体或权利要求6或7所述的铜绿假单胞菌噬菌体组合物在制备防治铜绿假单胞菌污染制剂或药物方面的应用。
10.一种用于防治铜绿假单胞菌的制剂，其特征在于：所述制剂包括如权利要求1-5任一项所述的铜绿假单胞菌噬菌体或权利要求6或7所述的铜绿假单胞菌噬菌体组合物。
